免疫组织化学染色用组合物制造技术

组合物，其特征在于其是免疫组织化学染色用的组合物，其含有包括荧光性官能团结合抗体在内的诊断用标记物和选自甘油磷脂、脂肪酸、及糖衍生物表面活性剂的物质。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及免疫组织化学染色用组合物。详细来讲，本专利技术涉及包含对组织损害性小的、经近红外线或远红外线照射后能发出荧光的标记用化合物，能与特异的识别癌细胞等的抗体等结合的诊断用标记，并且荧光强度优良的免疫组织化学染色用组合物。近年来，随着电子内窥镜的普及内窥镜诊断变得越来越容易，胃癌及结肠癌等癌症在早期阶段即可被发现。不过，在微小癌症的诊断方面，采用电子内窥镜与使用一般的内窥镜其诊断能力几乎相同。这与新的诊断方法还没有确立，尚无法充分发挥和利用电子内窥镜的机能有关。如果能发现一种能标记微小病变的标记抗体，使在一般内窥镜下无法辨别的微小病变，在电子内窥镜下能够检测出来，再经电子计算机的处理使之图象化，就可以使检测变得简易可行，但这种方法迄今还未实用化。为了使上述使用电子内窥镜进行诊断的方法得以实现，有采用根据免疫组织化学染色法对活体组织进行直接染色。固定后标本的染色法已有非常成熟的技术。但是，未经固定的标本的染色法却没有现成的、可供同行利用的技术。例如，尽管目前已有有关未经固定标本的免疫染色法报道(四国医学杂志，29,180,1987)，但尚未见有关采用近红外线对新鲜切除标本或活体组织本身进行免疫染色的报道。另一方面，对于上面描述的诊断方法，必须有在电子内窥镜下能够检测出来的诊断用标记物(标记化的抗体等)才行。我们知道目前已有这么一种诊断用标记物它把具有经紫外线激发后、可发出紫外或可见荧光的标记用化合物结合到抗体上，这种诊断用标记物已被广泛地用于诊断从活体摘除的组织是否存在癌组织或癌细胞。但是采用这种由紫外线激发、具有荧光特性的诊断用标记物的方法，由于紫外线会导致活体组织和DNA的损伤，不适宜在活体使用。迄今还没有能够直接用于活体的诊断用标记物。我们知道吲哚花青绿(ICG)在红外线内窥镜下，具有特异性吸收从而发出荧光。尽管已有在使用红外线内窥镜时，使用吲哚花青绿的报道(Gastroenterological Endoscopy,34,pp.2287-2296,1992；Gastrointestinal Endoscopy,40,pp.621-2；628,1994)，但有关这方面的工作均为血管内给ICG。而且，一般说来，象吲哚花青绿这类荧光性物质疏水溶性强，其单体在肠道内很快被吸收，我们尝试着在其母核或侧链部位导入一个亲水溶性的磺基以提高它的水溶性，从而使测定效率提高，并可避免吸收后的毒性问题(有关以上
技术介绍
材料的综述，可以参考喜纳兼勇著“2．临床检查用(诊断用)色素”项pp.223-230、入江正浩主编“技能性色素的最新应用技术”、株式会社CMC发行、1996年)。本专利技术者们，经过不断合成各种各样的吲哚花青绿衍生物，终于成功地生产出在近红外线乃至远红外线激发下即可产生荧光的吲哚花青绿衍生物，同时发现将上述吲哚花青绿衍生物用作标记用化合物，使之与抗癌抗原抗体发生反应，能制造出可直接在活体上使用的诊断用标记物，而且发现这种诊断用标记物对于采用免疫组织化学染色法直接用于活体的组织染色是很有用的。有关此项专利技术已做了专利申请(特愿平7-12283号)。另外，本专利技术人，本着要提供具有良好水溶性的诊断用标记物为宗旨，进行了锐意研究，结果发现对于上述吲哚花青绿衍生物中能形成分子内偶离子(两性离子)的化合物，偶离子的形成，可使分子的离子性下降，进而使水溶性会受到损害对此让碘化钠等作用于该衍生物，使其分子内部无法形成偶离子，继续保持分子整体的离子特性，水溶性可显著增加。有关这方面的专利技术也做了专利申请(特愿平7-223613号)。但是，对于使吲哚花青绿衍生物等具有荧光特性的标记用化合物和抗体结合得到的本诊断用标记物。做进一步的研究发现这种诊断用标记物的荧光强度，与结合前吲哚花青绿衍生物(标记用化合物)自身的荧光强度相比较，大约衰减了十分之一。在应用上述诊断用标记物进行在体免疫组织化学染色、进行癌组织等微小组织检测时，如果采用与一般的荧光检测装置相比敏感度很高的装置来进行，则有可能避免这样的问题，但是高性能装置的开发和使用必须投入巨大的劳力和资金。另一方面，如果能提供一种特异地作用于将荧光性标识用化合物结合在抗体上得到的诊断用标记物，并使它的荧光强度增强的荧光强度增强剂，就有可能利用原本就有的检测装置对杂色组织进行简便而准确的检测。本专利技术的目的，是提供一种能作用于使吲哚花青绿衍生物等具有荧光特性的标记化合物和抗体结合。得到的诊断用标记物、并使其荧光强度增强的物质，另外提供一种，当在使用上述诊断用标记物进行活体内免疫组织化学染色时，能使其荧光强度显著增强的免疫组织化学染色用组合物。本研究的专利技术者们，为了解决上述课题，进行了锲而不舍的努力，结果发现选自二肉豆蔻酰基磷脂酸及二硬脂酰基磷脂酸等酰基甘油磷酸、二硬脂酰基磷脂酰胆碱等酰基甘油磷酸胆碱等甘油磷脂；硬脂酸等脂肪酸；及辛基糖苷等糖衍生物表面活性剂的物质，这些物质能使这种-让吲哚花青绿衍生物等具有荧光特性的标记用化合物和抗体结合得到的诊断用标记物荧光强度显著增强。另外，发现包含这些物质和诊断用标记物的组合物，作为能够直接用于活体免疫组织化学染色用的组合物是非常有实际价值的。而且发现在上述组合物中辛基糖苷等糖衍生物表面活性剂如果作为必须成分来使用的话，能够提供溶解性优良的稳定的组合物。本专利技术就是在这些见解的基础上完成的。也就是说，本专利技术是提供一种免疫组织化学染色用的组合物，其特征在于包括含有结合了与荧光性官能团的抗体的诊断用标记物，及选自甘油磷脂、脂肪酸、糖衍生物等表面活性剂中选取出来的物质。根据本专利技术的最佳实施方式，可以提供甘油磷脂是酰基甘油磷酸的组合物；酰基甘油磷酸是包含2个C10-20脂肪酸残基的1,2-二酰基-sn-甘油3-磷酸的组合物；1,2-二酰基-sn-甘油3-磷酸是二肉豆蔻酰基磷脂酸或二硬脂酰基磷脂酸的组合物；甘油磷脂是酰基甘油磷酸胆碱的组合物；酰基甘油磷酸胆碱是包含2个C10-20脂肪酸残基的1,2-二酰基-sn-甘油3-磷酸胆碱的组合物；1,2-二酰基-sn-甘油3-磷酸胆碱是二硬脂酰基磷脂酰胆碱的组合物；以及该表面活性剂是辛基糖苷的组合物。而且，按照本专利技术可以提供包含选自甘油磷脂及脂肪酸的物质和上述表面活性物质的上述组合物；该荧光性官能团是来源于吲哚花青绿衍生物的官能团的上述组合物；荧光性官能团是由吲哚花青绿-N-羟基硫代琥珀酰亚胺基酯衍变而来官能团的上述组合物；及抗体是抗癌抗原抗体的上述组合物。进一步根据本专利技术的其它形式，可以提供包括结合了荧光性官能团的抗体的免疫组织化学染色用的诊断用标记物荧光强度增强剂，该荧光强度增强剂包括选自甘油磷脂、脂肪酸、及糖衍生物表面活性剂的物质；提供运用以包括含有结合了荧光性官能团的抗体的诊断用标记物和选自甘油磷脂、脂肪酸、及糖衍生物表面活性剂的物质在内的荧光强度增强剂为特点的组合物进行活体组织免疫组织化学染色的方法；以及，提供运用以包括含有荧光性官能团结合抗体在内的诊断用标记物和选自甘油磷脂、脂肪酸、及糖衍生物表面活性剂的物质在内的荧光强度增强剂为特点的组合物，从免疫组织化学角度进行癌症诊断的方法。附图简述附图说明图1是在普通光及红外线光的照射下，滴加了本专利技术组合物的木棉纱布类纤维组织通过显微镜拍摄下来的照本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：芝村诚一，伊东进，竹迫和浩，入村达郎，
申请(专利权)人：第一化学药品株式会社，
类型：发明
国别省市：