诊断用标记物制造技术

包括（ａ）检测系统，及（ｂ）与该检测系统结合的下式表示的荧光性官能基的诊断用标记物， ＊＊＊ （式中，Ｒ↑［１］及Ｒ↑［２］分别独立地表示氢原子、烷基、芳基、烷氧基或磺酸基；Ｒ↑［３］表示烷基、磺酸烷基或氨基取代烷基；根据需要，Ｘ↑［－］表示阴离子种；Ｙ表示碳数１～１０的亚烷基、或含有从氧原子、氮原子及硫原子组成群选出的，１个以上原子的碳数１～１０的亚烷基）。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诊断用标记物。进一步详细地说，本专利技术涉及使特异识别癌细胞的抗体等与用对组织障碍性小的经近红外线或远红外线照射激发后发出荧光的特定标记用化合物结合的，可适用于生物体的诊断用标记物。
技术介绍
近年，由于电子内窥镜的普及，使内窥镜诊断变得容易，在癌症早期，可确切地发现胃癌和大肠癌等。进而，对于微小癌的诊断，电子内窥镜和使用通常的内窥镜时的诊断能力几乎相同，这就意味着还未确立活用电子内窥镜功能的新的诊断方法。对于用通常的内窥镜不能识别的微小病变，只要用在电子内窥镜下可检测的标记抗体，标记微小病变，就可用计算机处理，进行图像解析，可容易地进行检测，但这种方法还未实用化。为了确立使用电子内窥镜的上述诊断方法，需要用免疫组织化学的染色法直接对生物体组织染色。固定化标本的染色法是已经确立的技术。可是，非固定化标本的染色法对于本专业人员还不是可利用的技术。例如，对于非固定化标本的免疫染色法虽然有报告(四国医学杂志，29，180，1987)但对于使用近红外线的本领域的切除新鲜标本和生物体组织本身的免疫染色法，还没有报告。另一方面，对于上述的诊断方法，也需要在电子内窥镜下可检测的诊断用标记物(标记化的抗体等)。已知将用紫外线激发，发出紫外·可见光的荧光的标记用化合物与抗体结合的诊断用标记物，广泛用于检测存在于摘出生物体外的组织的癌细胞和癌组织。可是，使用由紫外线激发的荧光性诊断用标记物的方法，由于紫外线能损伤生物体组织和DNA，所以不适用于生物体。目前，还没有可直接适用于生物体的诊断用标记物。已知吲哚花青绿(ICG)，在红外线内窥镜下，显示特异的吸收，发出荧光。已知用红外线内窥镜，使用吲哚花青绿的例子(Gastroenterological Endoscopy，34，pp.2287-2296，1992；及Gastrointestmal Endoscopy，40，pp 62-2；628，1994)，但任何一个例子都是在血管内投入ICG。另外，一般由于以吲哚花青绿为主的荧光性色素疏水性高，以单体给于肠道内时可快速吸收，所以试图通过在母环或侧链部分导入亲水性的磺酰基等，提高水溶性，提高测定效率，避免吸收后的毒性问题。可是，还未发现与吲哚花青绿发出相同荧光的水溶性标记用化合物。本专利技术的目的在于提供对于通过免疫组织化学的染色法直接使生物体组织染色的有用的诊断用标记物。本专利技术另一目的在于提供通过对组织障碍性小的近红外线乃至远红外线照射，发生荧光，可直接用于生物体的诊断用标记物。即，本专利技术的课题在于提供不必担心由于紫外线激发所引起生物体组织和DNA损伤的、也适用于生物体的诊断用标记物。提供具有这样特征的，且水溶性优良的诊断用标记物也是本专利技术的目的之一。另外，本专利技术的目的在于提供对于使用红外线内窥镜等的准体内的食道癌、胃癌、大肠癌等上皮性组织的恶性新生物及感染症等早期诊断和外科手术时病灶的确定或诊断上有用的，适用于生物体的诊断标记物。另外，本专利技术另一目的在于提供使用这种诊断用标记物，通过免疫组织化学的染色法，将生物体组织直接染色的方法。专利技术的公开本专利技术者们，通过潜心研究上述课题，合成各种吲哚花青绿的衍生物，成功地制造了通过近红外线乃至远红外线激发，发出荧光的吲哚花青绿衍生物。另外，本专利技术者们发现使用上述的吲哚花青绿衍生物作为标记用化合物，与抗癌抗原体等反应，可制造对生物体直接适用的诊断用标记物，以及这种诊断用标记物，对于通过免疫组织化学的染色法直接染色生物体组织是有用的。进而，本专利技术者们对于提供水溶性优良的诊断用标记物进行潜心研究结果发现，在上述的吲哚花青绿衍生物中，对于可形成分子内抗衡离子(两性离子)的化合物，由于形成抗衡离子，分子的离子性降低，有损坏水溶性的场合，但是若碘化钠等与该衍生物作用，在分子内不形成抗衡离子，保持了整个分子的离子性，显著地增大了水溶性。本专利技术就是基于这些见解而完成的。即，本专利技术提供了包括(a)检测系统，及(b)结合在该检测系统上的用下述式(I)表示的荧光性官能基的诊断用标记物， (式中，R1及R2分别独立地表示氢原子、烷基、芳基、烷氧基或磺酸基；R3表示烷基、磺酸烷基或氨基取代烷基；X-，根据需要，表示阴离子种；Y表示碳数1～10的亚烷基、或含有从氧原子、氮原子及硫原子组成群选出的1个以上原子的碳数1～10的亚烷基)。另外，按照本专利技术的另一个方案，提供包括(a)检测系统，及(b)结合在该检测系统上的用下式(II)表示的荧光性官能基的诊断用标记物， (式中，R4及R5分别独立地表示氢原子、烷基、烷氧基、或磺酸盐基；R6表示亚烷基；M+表示碱金属离子；Q-表示卤离子、高氯酸根离子、或硫氰酸根离子；Y表示碳数1～10的亚烷基、或含有从氧原子、氮原子及硫原子组成群选出的1个以上原子的碳数1～10的亚烷基)。进而，按照本专利技术的另一方案，提供制造上述诊断用标记物有用的化合物，用下述式(III)和用下述式(V)表示的化合物。 (式中，R1及R2分别独立地表示氢原子、烷基、芳基、烷氧基或磺酸基；R3表示烷基、磺酸烷基或氨基取代烷基；X-，根据需要，表示阴离子种；Z表示由下述式组成群选出的基； W及Y分别独立地表示碳数1～10的亚烷基、或含有氧原子、氮原子及硫原子组成群选出的1以上原子的碳数1～10的亚烷基)。 (式中，R4及R5分别独立地表示氢原子、烷基、烷氧基、或磺酸盐基；R6表示亚烷基；M+表示碱金属离子；Q-表示卤离子、高氯酸根离子、或硫氰酸根离子；Z表示由下式组成群选出的基， W及Y分别独立地表示碳数1～10的亚烷基、或含有从氧原子、氮原子及硫原子组成群选出的1个以上原子的碳数1～10的亚烷基的化合物)。本专利技术也提供了包括使这些化合物和检测系统结合的工序的上述诊断用标记物的制造方法。另外，提供了包括(a)检测系统，及(b)结合在该检测系统上的荧光官能基的诊断用标记物，当用波长600～800nm的激发光照射时，所述官能基发出780nm以上波长的荧光。此外，按照上述各诊断用标记物优选的方案，可提供荧光性官能基与检测系统直接结合的上述各诊断用标记物；荧光性官能基，通过接头或者蛋白，与检测系统结合的上述各诊断用标记物；检测系统从抗体、核酸及扩增系物质组成群中选出的上述各诊断用标记物；作为抗体，使用抗癌抗原体的上述各诊断用标记物；用于红外线内窥镜检查或外科手术时，确定病灶的上述各诊断用标记物；及通过免疫组织化学的染色法、直接用于染色生物体组织上述各诊断用标记物。另外，提供了含有上述各诊断用标记物作为有效成分的诊断药。图的简单说明附图说明图1是表示标记用化合物(化合物18)的红外线吸收光谱的图。(A)是通过添加碘化钠，形成盐的化合物18的红外线吸收光谱，(B)是作为原料使用的吲哚花青绿-N-己酸磺基琥珀酰亚胺酯(化合物17)的红外线吸收光谱。图2是表示用标记用化合物6和抗EMA抗体结合，得到的本专利技术诊断用标记物(74μg/ml)的紫外·可见光吸收光谱。图3是表示使标记用化合物18和人体IgG结合的本专利技术诊断用标记物的荧光光谱。图中，实线表示发光光谱、虚线表示激发光谱。实施专利技术的最佳方案上述用通式(I)及(II)表示的荧光性官能基，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：伊东进，野沢正之，志贺匡宣，佐佐本一美，竹迫和浩，竹内博，
申请(专利权)人：第一化学药品株式会社，
类型：发明
国别省市：