一种新的多肽——信号肽酶28和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－信号肽酶２８，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的信号肽酶２８的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——信号肽酶28，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。信号肽酶是一种将信号肽从分泌蛋白上切除的一种多肽。在原核生物中，有三种类型的信号肽酶lepB基因编码类型Ⅰ信号肽酶，该类型信号肽酶负责大多数输出前蛋白的加工过程lsp基因编码类型Ⅱ信号肽酶，它只加工脂蛋白，第三种类型的信号肽酶加工毛亚基。信号肽酶Ⅰ是一种整合膜蛋白，它依靠一个或两个N端转膜结构域锚定于细胞质膜，同时其蛋白的主要部分则定位于璧膜间隙。一个丝氨酸和一个赖氨酸是信号肽酶催化反应所必须的两个氨基酸残基(Sung M.etal.,J.Biol.；Chem.267:13154-13159)。信号肽酶Ⅰ在进化上与酵母线粒体内膜蛋白水解酶亚基1和亚基2有关。酵母线粒体内膜蛋白水解酶亚基1和亚基2催化信号肽的解离，这些信号肽引导分泌蛋白从线粒体基体穿过内膜，到达内膜空间(Nunnari J.etal.,Science.262:1997-2004)。在真核生物中，信号肽的解离受一个寡聚酶复合体的影响。这个寡聚酶复合体至少由5个亚基组成，这5个亚基组成信号肽酶复合体(SPC)。SPC定位于内质网膜。哺乳动物SPC的两个组成成分，SPC18和SPC21亚基以及酵母SEC11亚基都有一个共同的区域与原核生物信号肽酶Ⅰ和酵母IMP1/IMP2相似。信号肽酶Ⅰ和IMP1/2共同组成的家族蛋白有三个共同特征。第一个特征是可能的丝氨酸激活位点；第二个特征是可能的赖氨酸的激活位点，这个激活位点在SPC亚基中并不是保守的；第三个特征是位于C末端的目前还不知道其生物学意义的但在信号肽酶Ⅰ家族所有蛋白中都保守的区域。信号肽酶Ⅰ和IMP1/2共同组成的家族蛋白有对应于以上三个共同特征有以下三个共同序列1．-X-S-M-X---其中，S是一个氨基酸残基的激活位点；2．K-R-(2)-G-X--G--X--X-其中，K是一个氨基酸残基的激活位点，但IMP2不含该序列；3．(2)-X-(2)-G-D--X(3)--X(2)-。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与信号肽酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为信号肽酶28。由于如上所述信号肽酶28蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的信号肽酶28蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新信号肽酶28蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——信号肽酶28以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码信号肽酶28的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码信号肽酶28的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产信号肽酶28的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——信号肽酶28的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——信号肽酶28的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与信号肽酶28异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中335-1096位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1697位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制信号肽酶28蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与信号肽酶28蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于信号肽酶28表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与信号肽酶28结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合信号肽酶28的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－信号肽酶２８，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]