一种可特异性识别溶藻弧菌的核酸适配体及其应用制造技术
A nucleic acid could specifically recognize Vibrio alginolyticus aptamer and its application
【技术实现步骤摘要】
一种可特异性识别溶藻弧菌的核酸适配体及其应用
本专利技术涉及一种ssDNA核酸适配体及其筛选方法、检测方法和应用，特别是涉及一种可特异性识别水产致病菌溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体及其筛选方法、检测方法与应用。
技术介绍
我国作为水产养殖大国，水产养殖量占世界水产品养殖总量的70％。然而，近年来细菌性病原的暴发及流行对我国的水产养殖行业造成巨大经济损失。在广西等华南沿海地区，溶藻弧菌是引起海水养殖鱼类发生细菌性鱼病的主要致病菌之一，其引起的鱼病发病迅速、死亡率高、流行面广，对着华南地区水产养殖业发展具有严重威胁。目前国际上对鱼类细菌性疾病的诊断主要采用传统观察法、免疫学检测方法、分子生物学技术等。但这些方法存在操作繁琐、耗时长、仪器试剂昂贵、精确度不高等问题，不能在现场快速对溶藻弧菌进行准确检测和诊断。指数富集的配基系统进化技术(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichmenttechnology,SELEX)是一种生物文库筛选技术，该技术使用容量高达1014-1015的随机寡核苷酸文库，在体外经过多轮筛选最终...
【技术保护点】
一种可特异性识别溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’‑TTTGATATTGCTTTGTCTTCTATTTTATGCTAATCTTTAAATGTACTGGT‑3’(SEQ ID NO：1)。
【技术特征摘要】
1.一种可特异性识别溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’-TTTGATATTGCTTTGTCTTCTATTTTATGCTAATCTTTAAATGTACTGGT-3’(SEQIDNO：1)。2.一种可特异性识别水产致病菌溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-TTTGATATTGCTTTGTCTTCTATTTTATGCTAATCTTTAAATGTACTGGT-CGAAGGACGCAGATGAAGTCTC-3’(SEQIDNO：2)。3.根据权利要求1或2所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列上任一位置能进行磷酸化、巯基化、甲基化、氨基化或同位素化反应。4.根据权利要求1或2所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列上结合有标记物。5.根据权利要求4所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述标记物选自生物素、酶、发光基团中的一种或多种。6.根据权利要求5所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述发光基团选自异硫氰酸荧光素、羧基四甲基罗丹明、双(2,2`-联吡啶)(4,4`-二羧基-2,2`-联吡啶)钌配体中的一种或多种。7.一种如权利要求1或2所述ssDNA核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：合成以下序列所示的单链DNA文库和引物：随机文库Library50：5’-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG(50N)CGAAGGACGCAGATGAAGTCTC-3’；FITC标记的5’引物：5’-FITC-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-3’；Biotin标记的5’引物：5’-Biotin-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-3’；TAMRA标记的5’引物：5’-TAMRA-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-3’；步骤2：取10nmol上述随机文库溶解于300-500μlPBS中，在80-95℃下恒温水浴5min，然后迅速进行冰浴，冰浴5-20min，取处理后的随机文库与溶藻弧菌活菌在冰上孵育0.5-2h；待孵育结合完成后，离心并除去上清，取10mL的PBS洗涤溶藻弧菌活菌，并在92℃下恒温水浴5-30min，在12000g的条件下离心1-20min，并收集上清液，所述上清液即为特异性识别溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体库；步骤3：取100-200ul筛选得到的识别溶藻弧菌的ss...
【专利技术属性】
技术研发人员：李鹏飞，秦启伟，余庆，陈波，
申请(专利权)人：广西科学院，
类型：发明
国别省市：广西,45
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