一种能够识别并结合溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种能够识别并结合水产致病菌溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体及其筛选方法、检测方法与应用，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’‑ATTTTGCTTTTGCCACTTAT CAACATTTGTTTTTCCGCTTTCGCACTTC‑3’(SEQ ID NO：1)或5’‑GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG‑ATTTTGCTTTTGCCACTTATCAACATTTGTTTTTCCGCTTTCGCACTTC‑CGAAGGACGCAGATGAAGTCTC‑3’(SEQ ID NO：2)。本发明专利技术的ssDNA核酸适配体对溶藻弧菌具有特异性和高灵敏度，且结构稳定、易修饰、便于合成和保存的优点，可对溶藻弧菌进行快速准确的检测和诊断。

An aptamer of ssDNA nucleic acid that can identify and combine with Vibrio alginolyticus and its application

【技术实现步骤摘要】
一种能够识别并结合溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体及其应用
本专利技术涉及一种ssDNA核酸适配体及其筛选方法、检测方法和应用，特别是涉及一种能够识别并结合水产致病菌溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体及其筛选方法、检测方法与应用。
技术介绍
溶藻弧菌作为引起海水养殖鱼类发生细菌性鱼病的主要致病菌之一，主要在广西等华南沿海地区暴发及流行，对当地的水产养殖行业造成巨大经济损失。且溶藻弧菌所引起的鱼病具有发病迅速、死亡率高、流行面广的特点，一旦出现鱼类病亡便难以进行快速有效的防治，对着华南地区水产养殖业的发展具有严重威胁。目前国际上对鱼类细菌性疾病的诊断主要采用传统观察法、免疫学检测方法、分子生物学技术等。但这些方法操作繁琐、耗时长、仪器试剂昂贵、精确度不高等问题，缺少可以针对溶藻弧菌进行快速检测及诊断的方法和探针。指数富集的配基系统进化技术(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichmenttechnology,SELEX)是一种生物文库筛选技术，该技术使用容量高达1014-1015的随机寡核苷酸文库，在体外经过多轮筛选最终获得能够特异性识别本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够识别并结合溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’‑ATTTTGCTTTTGCCACTTATCAACATTTGTTTTTCCGCTTTCGCACTTC‑3’(SEQ ID NO：1)的ssDNA核酸适配体。

【技术特征摘要】
1.一种能够识别并结合溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’-ATTTTGCTTTTGCCACTTATCAACATTTGTTTTTCCGCTTTCGCACTTC-3’(SEQIDNO：1)的ssDNA核酸适配体。2.一种能够识别并结合溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列为5’-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-ATTTTGCTTTTGCCACTTATCAACATTTGTTTTTCCGCTTTCGCACTTC-CGAAGGACGCAGATGAAGTCTC-3’(SEQIDNO：2)的ssDNA核酸适配体。3.根据权利要求1或2所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列上任一位置能进行磷酸化、巯基化、甲基化、氨基化或同位素化反应。4.根据权利要求1或2所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述ssDNA核酸适配体的核苷酸序列上结合有标记物。5.根据权利要求4所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述标记物选自生物素、酶、发光基团中的一种或多种。6.根据权利要求5所述的ssDNA核酸适配体，其特征在于，所述发光基团选自异硫氰酸荧光素、羧基四甲基罗丹明、双(2,2`-联吡啶)(4,4`-二羧基-2,2`-联吡啶)钌配体中的一种或多种。7.一种如权利要求1或2所述ssDNA核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：合成以下序列所示的单链DNA文库和引物：随机文库Library50：5’-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG(50N)CGAAGGACGCAGATGAAGTCTC-3’；FITC标记的5’引物：5’-FITC-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-3’；Biotin标记的5’引物：5’-Biotin-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-3’；TAMRA标记的5’引物：5’-TAMRA-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG-3’；步骤2：取10nmol上述随机文库溶解于300-500μlPBS中，在70-92℃下恒温水浴5-15min，然后迅速进行冰浴，冰浴5-20min，取处理后的随机文库与溶藻弧菌活菌在冰上孵育0.5-2h；待孵育结合完成后，离心并除去上清，取10mL的PBS洗涤溶藻弧菌活菌，并在92℃下恒温水浴5-30min，在12000g的条件下离心1-20min，并收集上清液，所述上清液即为特异性识别溶藻弧菌的ssDNA核酸适配体库；步骤3：取100-200ul筛选得...

【专利技术属性】
技术研发人员：李鹏飞，秦启伟，余庆，陈波，
申请(专利权)人：广西科学院，
类型：发明
国别省市：广西,45