一种溶藻弧菌的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)PCR检测试剂盒，包括PCR缓冲液、dNTPs、纯化水和Taq DNA聚合酶及引物，所述的引物碱基序列为SEQ ID No.1~2。本发明专利技术还提供含有所述引物的PCR检测试剂盒。本发明专利技术所设计的引物检测特异性好,灵敏度高,非常适用于检测海产品中的溶藻弧菌。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种溶藻弧菌(Vibrio?alginolyticus)PCR检测试剂盒，包括PCR缓冲液、dNTPs、纯化水和Taq?DNA聚合酶及引物，所述的引物碱基序列为SEQ?ID?No.1~2。本专利技术还提供含有所述引物的PCR检测试剂盒。本专利技术所设计的引物检测特异性好,灵敏度高,非常适用于检测海产品中的溶藻弧菌。【专利说明】一种溶藻弧菌的检测试剂盒
本专利技术主要涉及海产品疾病检测
，具体涉及海产品致病微生物检测方法，尤其是一种溶藻弧菌PCR检测试剂盒。
技术介绍
我国海域辽阔，自然条件优越，海洋资源十分丰富。但目前开发利用的程度还很低。这也说明我国开发利用海洋资源的潜力巨大，辽宁海域是中国重要的海洋生物资源、渔业资源宝库，其盛产海参、扇贝、贻贝、牡蛎和鱼、虾以及藻类等，带动海洋经济发展。加强多边和双边的海洋开发国际合作，集中集约开发利用海域及海岛资源，合理配置优势海洋产业，科学高效开发海洋资源，积极开展科研与试验、开发与利用，海水养殖标准化是合理开发海水养殖资源的重要手段，研究制定海产品养殖标准，合理开发海水滩涂养殖资源，提高养殖海产品疾病是当今养殖业的重点内容。海产品养殖是一项高风险的养殖业，传统的小户的海产品养殖给养殖户带来了巨大的市场和技术风险。为了将养殖户养殖风险降到最低，开展对各类养殖业，包括鱼、虾、蟹、海参、鲍鱼、贝类、海藻等各类海产品的疾病防治工作任务举足轻重。有报道称，霍乱弧菌、漂浮弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌等有害细菌，是引起海产品各种疾病的罪魁祸首。其中，杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonida、中间气单胞菌Aeromonas media和海弧菌生物变种I Vibro pelagius biovar I均可引起刺参表皮溃烂病,症状为:发病初期，病参有摇头现象，围口腔膜松弛，触手对外界刺激反应迟钝，继而出现排脏现象；发病中期，刺参口腹部出现小面积溃烂，形成小白斑，溃烂面积逐渐增大，口部肿大，不能收缩与闭合，逐渐失去摄食能力；发病末期，刺参体表大面积溃烂，身体收缩，溶解成粘胶状。假交替单胞菌Psevdoal`teromonas nigrifaciens可导致保苗期腐皮综合征:病参首先口部肿大，触手不能完全合拢；然后口部出现溃烂白斑，直至参体大面积溃烂，导致最终死亡。灿烂弧菌Vibrio splendidus可导致耳状幼体烂胃病、幼参急性口围肿胀症和养成期刺参腐皮综合征等。发病症状:幼体:在显微镜下可见耳状幼体胃壁增厚、萎缩、溃烂。幼参:活力下降，身体萎缩，口围肿胀，排脏，体表溃烂，管足松弛失去附着力，脱落至池底，最后死亡。养成期:首先触手过度伸张，逐步失去伸展活力，口部肿大，体表分泌粘液增多；然后，口部出现溃烂白斑，从小到大。严重者身体发生溃烂，最终导致死亡。弧菌Vibro tapetis和病菌Marinomonas dokdonensis均可导致幼参急性口围肿胀症:病参活力下降，身体萎缩，口围肿胀，排脏，体表溃烂，管足松弛失去附着力，脱落至池底，最后死亡。弧菌Vibrio Ientus还可导致耳状幼体烂边病:在显微镜下可见耳状幼体边缘突起处组织增生，颜色加深变黑，边缘变得模糊不清，逐步溃烂，最后整个幼体解体消失。存活个体的发育迟缓、变态率低，即使幼体能变态附板I周左右也大多“化板”消失。藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和灿烂弧菌(V.splendidus)是水产养殖业中常见的致病菌，对水生动物包括鱼类、双壳贝类、甲壳类和棘皮动物等的养殖造成了巨大的损失，溶藻弧菌对人的临床感染也屡见报道，灿烂弧菌还可作为致病微生物之一；世界海参养殖以刺参(温带种)和糙海参(热带种)为主要品种。除中国、日本、韩国主要养殖刺参外，其他国家均以糙海参为主要养殖对象。近年来，随着自然资源的减少和消费需求的增加，海参的人工养殖在一些国家逐渐兴起。其中，中国和日本是主要的养殖国家，印度、印度尼西亚、越南、菲律宾、韩国、埃及等也有小规模的增养殖。刺参(Apostichopus japonicus)是我国有记载的20余种食用海参中价值最高、惟一分布于黄渤海域的温带种。其蛋白质含量高，糖类丰富，脂类含量低，且不含胆固醇，具有很高的营养保健和药用价值，被人们视为重要的海珍品，因而具有重要的市场价值。近年来，海参消费需求量的逐年增加导致了世界范围内海参自然资源的过度开发和种群数量的急剧下降，因此，海参的人工养殖也随之发展起来。随之而来的是海参养殖中遇到的各类问题。其中，海参腐皮综合症，该症也称“皮肤溃烂病”，“化皮病”，是当前养殖刺参最常见的疾病，危害最为严重。越冬保苗期幼参和养成期海参均可被感染发病，但幼参的感染率、发病率和死亡率都高于成参，感染率很高，一旦发病很快就会蔓延至全池，死亡率可达九成以上，属急性死亡。每年的1-3月份养殖水体温度较低时(8°C以下)是发病高峰。感染初期病灶部位以假单胞菌属的和灿烂弧菌为优势菌，感染后期由于刺参表皮受细菌的侵袭腐蚀作用形成体表创伤面，易于使霉菌和寄生虫富集和生长造成继发性感染，加剧海参的死亡速度。 溶藻弧菌病是指由各种类型溶藻弧菌所引起的对人类、以及海洋生物等不同形式的总称。溶藻弧菌可引起刺参溃疡病，发病症状为:患病刺参体表溃疡，粘液增多，吐肠，1/4出现肿嘴，最后自溶死亡。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)属于弧菌科(Vibrionaceae),弧菌属(Vibrio),革兰氏阴性短杆菌,无芽孢、荚膜，单独存在或尾端相连成“C”或“S”形，为嗜盐嗜温性、兼性厌氧海生弧菌，适宜温度为17~35°C。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)作为一种革兰氏阴性嗜盐菌，广泛存在于世界各地海水和海产品中，是许多海水养殖动物的致病菌。近年来在养殖生产上出现了较为严重的耐药性现象，给养殖业带来了很大的危害，这很可能与溶藻弧菌生物被膜的形成有关。溶藻弧菌还能引起人类食物中毒。溶血毒素、耐热性肠毒素(ST)和不耐热性肠毒素(LT)是致病性微生物中常见的致病因子。因此，由溶藻弧菌引起的海洋生物疾病问题是常见的，而目前检测溶藻弧菌的方法检测时间长，费用较高，不利于在基层单位推广使用。为了使得海产品因细菌引起的各种疾病有很好的预防和检测，需要有新的方法能够在一个短的时间内，在一个给定的样品量中检测病原体。
技术实现思路
本研究的目的是:建立一个新的检测海产品中的病原体的方法。为达到直接在海产品中溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)检测的目的。本专利技术采用Primer Express 1.5软件中设计的引物，提供一种溶藻弧菌PCR检测试剂盒，其为:上游引物:5，aggtctaaaagcagtcgc 3，, SEQ ID N0.1。下游引物:5，aacacttgttgtacgcac 3，SEQ ID N0.2。其中，所述的引物扩增片段为499bp左右的片段，根据电泳结果，即可判断为是否存在病原体基因。本专利技术还提供含有上述引物的溶藻弧菌PCR检测试剂盒，所述试剂盒还可包括PCR缓冲液、dNTPs、纯化水和Taq DNA聚合酶等。本专利技术还提供应用上述的试剂盒在海产品中检测溶藻弧菌的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)PCR检测试剂盒，其特征在于：包括PCR缓冲液、dNTPs、纯化水和Taq DNA聚合酶及引物，所述的引物碱基序列为SEQ ID No.1~2。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢克焕，
申请(专利权)人：大连德通生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21