一种蛭弧菌冻干制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种蛭弧菌冷冻剂以及相应的冷冻干燥方法。该方法包括以下步骤：按噬菌蛭弧菌的常规培养方法制成菌液，获得噬菌蛭弧菌水剂，将噬菌蛭弧菌水剂与冷冻剂混合，获得待冻干混合液，将待冻干混合液置于冷冻干燥器中进行冷冻干燥，获得噬菌蛭弧菌冻干制剂。通过数据计算出蛭弧菌微生物制剂的保质期比现有技术的冷冻方法以及相应的冷冻剂得到的冻干产品要长很多。明显延长蛭弧菌微生物制剂的保质期。另外，本发明专利技术提供的保护剂价格低廉，适用于大规模推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种蛭弧菌冻干制剂的制备方法。
技术介绍
没有水就没有生命，就没有人类，可是随着社会人口的增多，生活需求量是越来越大，排放量也越来越大，因此人生活需要粮食，粮食生产需要农药化学肥料，农民为了增产丰收大量超标使用化肥农药，化肥农药超标使用造成水源污染，农药中的砷、镉、氰化物等有毒有害物，在下雨时混同水源反消的化学肥料一同流入沟塘河坝，进入江河湖泊、污染水资源，使绿水变臭水，造成鱼虾不生，有害微生物漫延，产生病菌病毒，污染生态环境，给人的生活用水带来安全隐患；人们需要生活用具，交通住宿等，需要开矿和工厂生产，工厂的生产，矿山的开采，大量的重金属流入水体，污染了水资源；金属矿石淬取的尾渣堆集储存不当，在下雨时尾渣中未被淬取的剩余重金属也会随雨水流入河流进入湖泊，造成水体重金属超标形成污染。养殖水体是动物赖以生存的环境和直接接触的媒介。水体质量的高低决定着水产动物的生长发育状况和养殖业的经济效益。在水资源短缺、高密度养殖、残饵污染的养殖条件下，水产动物的抗病力降低，易导致各种病原菌的侵袭，给养殖生产带来很大经济损失。这些水体内养殖的水生动物，容易出现病害，因此必须进行相应的消毒杀菌处理，但是现阶段，各种杀菌消毒的制剂本身具有一定污染，虽然实现了部分水体的消毒杀菌，但是本身产生的污染造成了水体的二次污染，使用效果并不好。CN 101779628 B中公开了一种没食子酸水产消毒杀菌剂的制备方法及其产品，是将五倍子经微波离心过滤，微滤，精滤，精滤液用5万分子量聚砜膜超滤，超滤截留液回用提取，超滤透析液再纳滤，纳滤透析液回用提取所得，可制成水剂和粉剂。但是该菌剂杀菌效果并不是非常显著，而且五倍子作为中药，其来源也不固定，成本较高。CN 101606534 B中公开了一种含溴消毒杀菌剂，其中消毒杀菌剂组成及其重量配比为：固体溴或二溴二甲基海因10-50，无水硫酸钠5-30，碱性剂10-20、十二烷基硫酸钠2-8，氨类活性剂3-20，EDTA 1-10。但是该杀菌剂，采用化学药剂作为基础药物，在水体中会有较大的残留性，会影响后续水体的养殖特性。因此，化学杀菌剂，虽然能够有效杀灭水体中有害微生物，但是同样会污染水体，使有害物质在鱼类体内富集，造成药物残留。在食品安全日益重视的今天，这无疑会对水产养殖造成不小的危害，影响养殖户的经济效益。生物修复(Bioremediation)是指生物尤其是微生物催化降解环境污染物，减少或消除环境污染的受控或自发过程(Madsen E L.Metermining in situ biodegradation:facts andchallenges[J].Evrion Sci Technol,1991,25(10):1663-1672)。利用微生物为主体的生物修复在治理海洋中有毒有害污染物的作用日显重要，对养殖环境起到明显改善效果。研究表明，光合细菌、诺卡氏菌、芽孢杆菌、硝化细菌、酵母、绿藻、席藻、螺旋藻、小球藻等微生物及复合微生物菌群均具有良好的净化水质的效果，可用于海水养殖生物修复过程(刘卫东，苏浩，邓立康.微生物在水产养殖中的应用[J].水产科学，2001，20(2):28-31；赵玉洁，谢风行，周可.微生态制剂在水产养殖中的应用[J].可持续发展，2007，1:27-29)。中国专利ZL 200810230123.9公开了利用海水养殖系统自产污泥对海水养殖废水进行反硝化净化，废水中NH/-N由0.80mg/L降至0.54mg/L,NOf-N由60.37mg/L降至41.lmg/L。但该方法主要去除水体中的硝酸盐，对有机物，磷等污染物去除效果不明显，处理菌种单一，不彻底。CN 102381768 B公开了一种利用复合微生物菌剂净化海水养殖废水的方法，包括如下步骤：1)筛选复合微生物菌剂：由光合细菌、硝化细菌、反硝化细菌、产朊假丝酵母、嗜酸乳酸菌以及芽孢杆菌组成复合微生物菌剂。但是该菌剂需要的微生物种类繁多，培养的条件也各不相同，制备及其复杂，在菌体中微生物残留也不较多，对于后续的养殖也会产生较大的影响。蛭弧菌(Bdellovibrio)是由Stolp和Petzhold从菜豆叶烧病假单胞菌ATCCl1355中分离发现的一类以攻击和裂解其它细菌来完成自身生长和繁殖的寄生菌。蛭弧菌具有类似噬菌体的功能，对能导致渔业养殖病害和人类食物中毒的致病菌具有良好的裂解清除效果，但对动植物无毒副作用。蛭弧菌作为一类具有裂解致病菌的特殊细菌，不仅可应用到淡水产品生产的全过程，而且也不会导致细菌出现抗性，也无噬菌体宿主过于专一的缺点，因此蛭弧菌作为一类致病菌的生物消除剂具有相当的优势。如能在淡水产品在养殖期间、运输过程或食用、加工前，先进行致病菌的生物消除工作，则一方面可以减少或消除食物中毒的机率，减少或消除药物残留的可能，提高产品质量安全系数，保护消费者的健康，另一方面也可为淡水产品的加工提供优质原材料和加工上的便利，为出口创汇提供强有力的保障。噬菌蛭弧菌制剂的制备方法在过去的报导中也有大量介绍，例如：中华流行病学杂志1989年第10卷特刊11号中刊登了题为“噬菌蛭弧菌在死的宿主菌中生长特性的研究”的文章，其中详细介绍了噬菌蛭弧菌制剂的制备方法。但目前这类制剂通常都是液态的，由于在该类液态制剂中，随着自身菌的不断生长繁殖，会导致液态制剂中的新陈代谢产物不断积累、pH值逐渐变化，而且制品中的杂菌也会日渐增殖，有毒有害因子越积越多，所以，必然致使该制品的有效成分不断下降，而不安全因素日趋增多。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蛭弧菌冻干制剂及其生产工艺，以克服现有技术中所存在的缺陷。本专利技术的任务是以下述方式完成的：一种噬菌蛭弧菌冻干制剂生产工艺，其关键是它依次包括以下工艺过程：a.按噬菌蛭弧菌的常规培养方法制成菌液，获得噬菌蛭弧菌水剂，b.将由a工艺过程获得的噬菌蛭弧菌水剂与冷冻剂混合，获得待冻干混合液，c.将上述待冻干混合液置于冷冻干燥器中进行冷冻干燥，获得噬菌蛭弧菌冻干制剂，d.将上述噬菌蛭弧菌冻干制剂在真空条件下或者在填充惰性气体(例如氮气)的条件下进行密封包装，获得噬菌蛭弧菌冻干制剂成品。上述b工艺过程中所提及的冷冻剂为：脱脂乳粉15％，甘油10％，蔗糖12％，海藻糖15％，谷氨酸钠1％，半乳糖20％。上述b工艺过程中所提及的冷冻剂还可以为：脱脂乳粉11％，甘油15％，蔗糖10％，海藻糖17％，谷氨酸钠2％，半乳糖25％。上述b工艺过程中所提及的冷冻剂还可以为：脱脂乳粉10％，甘油15％，蔗糖8％，海藻糖14％，谷氨酸钠1.5％，半乳糖22％。上述稳定剂均需经高压灭菌处理，无菌检查合格后备用。上述b工艺过程中所提及的噬菌蛭弧菌水剂与冷冻剂的混合比例最好为1∶2-10。其中蛭弧菌水剂的菌浓最好为5*109个/mL以上。上述步骤c中，先在-80℃预冻2h之后，接着真空冷冻干燥，干燥分为二步，第一步抽真空至干燥室压力50Pa，温度逐渐升温至-25℃，保持时间2h；第二步，快速升温至4℃，抽真空至干燥室压力10Pa，处理至干燥即可(含水率为0-1％)。由于在低温真空条件下干燥，氧气极少，微生物的生长和酶的作用几乎无法进行，易氧化物质得到有效保护，因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛭弧菌冻干制剂，其特征在于将蛭弧菌在冷冻保护剂存在的条件下冷冻干燥后获得。

【技术特征摘要】
1.一种蛭弧菌冻干制剂，其特征在于将蛭弧菌在冷冻保护剂存在的条件下冷冻干燥后获得。2.一种蛭弧菌冻干保护剂，其特征在于：各组分的浓度为脱脂乳粉10％w/v，甘油15％v/v，蔗糖8％w/v，海藻糖14％w/v，谷氨酸钠1.5％w/v，半乳糖5％w/v，混匀，溶剂为超纯水，PH值8.0。3.一种蛭弧菌冻干保护剂，其特征在于：各组分的浓度分别为脱脂乳粉15％w/v，甘油10％v/v，蔗糖12％w/v...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏永鹏，
申请(专利权)人：贝嘉美天津生物技术研发有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12