本发明专利技术描述了用于在哺乳动物中针对人偏肺病毒(hMPV)进行使用的免疫原性制剂，其由1×109cfu/ml的表达(基因群(genogroup)A1、A2、B1和B2的)hMPV的病毒蛋白P的重组BCG的冻干物组成。所述疫苗源自hMPV的基因P的完全或部分产物，其可以无需佐剂地以溶液形式进行使用、稳定化和施用。制备物还可以包含上面所描述的制剂的组合。所述制剂可以通过冻干(4℃至8℃的保存范围)来进行稳定化，以便以后在其使用前在无佐剂的盐水溶液中进行重构。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及免疫学和生物
，特别地涉及待用于制备针对人偏肺病毒(hMPV)的疫苗的基于重组减毒细菌的免疫原性制剂。所述制剂包含表达hMPV的蛋白P这种抗原性肽的重组卡-介杆菌(BCG)。专利技术背景人偏肺病毒(此后，hMPV)是与上和下呼吸道的急性呼吸系统疾病相关的高住院百分比和发病率的病因学因子，特别是在婴儿、老年人和无免疫应答的个体中。由该病毒引起的感染与宽范围的病理学状况相关，其中细支气管炎和肺炎属于具有较大社会经济影响的情形。另外，它与胃肠炎和角膜结膜炎相关。Calvo等人(2008)在3年的时间段中证明，由呼吸道病毒RSV、ADV和hMPV引起的急性呼吸道感染的累积发病率对于64.5％的小于2岁的儿童的住院负有责任，其中对于所述病毒中的每一种而言发病率分别为35.4％、19.3％和9.8％。hMPV与其他具有高发病率的呼吸道病毒所共有的一个令人感兴趣的特征为在整个幼年期间产生反复感染，这是一种可能与在生命的最初几个月期间在建立针对初次感染的保护性免疫应答方面的失败相关的现象。该最后的现象激发了在公共卫生系统中对于能够控制呼吸道感染每年爆发的新的疫苗原型的急迫需要，从而使得能够减少医疗中心的拥堵和最终减少与这些感染相关的社会经济影响。迄今为止，还没有关于hMPV感染引起的特别的经济影响的研究，然而，由hMPV造成的住院发生率据估计为由人呼吸道合胞病毒(hRSV)造成的住院发生率的1/3。在发达国家中进行的研究估计，hRSV感染的个体花费为大约3,000欧元($1,860,000智利比索)，其中具有直至8,400欧元($5,200,000智利比索)的上限。考虑到需要住院的病理学过程具有相似的特征，暗示了关于个体住院的花费是近似的。病毒hMPV被归类为副粘病毒科(Paramyxoviridae)的肺病毒亚科(Pneumovirinae)，这是与hRSV被归类为的相同的分类，虽然它们各自分别被分组在偏肺病毒属(Metapneumovirus)和肺病毒属(Pneumovirus)中。hMPV的基因组由负义的不分节段的单链核糖核酸(ssRNA)组成，因此病毒蛋白质以3’至5’的方向(关于其序列)按下列形式进行安排：N、P、M、F、M2(ORF1和2)、SH、G和L。这些蛋白质中的五个负责遗传物质的包装和确定病毒颗粒的特有结构，它们分别相应于核衣壳蛋白N和基质蛋白M，以及跨膜糖蛋白F、G和SH。其他四个蛋白质M2-1、M2-2、P和L参与病毒的复制和转录。存在两种亚型的hMPV，它们基于主要在蛋白F和G中的序列差异而被划分为A和B(关于两个抗原组)。虽然这些蛋白质具有一定程度的差异，但是相对于由病毒基因组所编码的其他蛋白质而言，存在高度的同一性。针对呼吸道病毒的疫苗的开发始于20世纪60年代，其中采用基于通过福尔马林灭活的病毒(hRSV-FI)的最初的针对hRSV的疫苗原型，其具有很大的副作用，这阻碍了在免疫接种计划中的使用。伴随有氢氧化铝佐剂的肌内制剂在经疫苗接种的儿童中产生了比在未进行疫苗接种的那些被感染个体中更严重的状况。该效应与针对感染的免疫应答的超反应性相关，所述超反应性以升高的多形核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的实质浸润以及升高的补体结合性抗体的滴度为特征。针对人偏肺病毒(hMPV)仅开发了很少的疫苗，并且迄今这些疫苗中没有任何一个拥有令人满意的结果。采用相同的通过福尔马林灭活的病毒(hMPV-FI)的先前设计的原型，也显示出产生具有与在感染的粗毛棉田鼠(Sigmodonhispidus)模型中由针对hRSV的疫苗所产生的相似的特征的炎症超反应性情形(Yim等人,2007)。与对于hRSV所观察到的超反应性过程不同，显示出将病毒从呼吸系统中部分地去除。在暴露于hRSV-FI的小鼠和粗毛棉田鼠中所观察到的疾病与Th2型的基于抗体的病理性免疫应答和NF-κΒ的过分激活相关。NF-κΒ转录活性的增加还涉及促炎细胞因子例如IL-8的分泌。另一方面，在hMPV感染后肺组织的超反应性与这样的免疫应答相关，所述免疫应答以在支气管肺泡灌洗物中存在IFN-γ和IL-4以及在患病小鼠的血清中检测到IgG1和IgG2a同种型的中和抗体为特征，这强烈地暗示所观察到的慢性炎症归因于Th1和Th2型的病理性应答，或者归因于不足的Th1型的基于细胞的应答，其伴随有Th2病理性应答。关于该后一种假设，一些作者已提出，增加的Th1型应答还可以使疾病加重。这些过去的情况强调了建立平衡的且有效的免疫应答的重要性，其能够限制炎症过程的进展，并且同时，引起从被感染的组织中适当地去除这些病毒。由于由hMPV引起的呼吸系统疾病与先前用hRSV所见到的(已将其与细胞免疫诱导失败相关)相似，因此需要产生尽到作为细胞毒性CD8+T细胞和辅助性CD4+T细胞(两者都产生IFN-γ)的良好诱导物之责的疫苗原型。最近的实验探求将其努力集中于开发针对仅一个病毒物种的疫苗，这通过使用不同的分子遗传学和免疫学技术来进行。重要的是提及，这些研究对于每一种目的病毒使用了有限量的蛋白质或蛋白质亚基作为抗原。对于hRSV，它们中的一些基于在感染的鼠类和非人灵长类模型中使用独个病毒蛋白质，例如蛋白F或G的完整亚基或片段，或者其混合物。已经在I和II期临床试验中使用了一些针对hRSV的疫苗原型，但是结果未显示出长期的保护能力，并且所述疫苗远不适合于将其在感染预防中大规模使用(Denis等人,2005；Karron等人,2005)。通过去除已被提示涉及病毒致病性的基因，开发出了减毒的hMPV株系。已提出将缺乏编码蛋白SH、G、M2-1和M2-2的基因的hMPV株系作为用于疫苗的候选物(Biacchesi等人,2005)。这些候选物已经在动物模型中呈现出了良好的结果，但是还没有在人类中进行研究。虽然该备选方案是可行的，但其结果是昂贵的，因为这需要在被批准用于在人类中使用的细胞培养物中生产病毒。疫苗的其他来源为通过异源系统来过表达病毒蛋白质，例如hMPV的蛋白F，其与佐剂相偶联，从而产生中和抗体，但该选项的缺点是在非常短的时间段内提供免疫性(Herfst等人,2008a)。不存在关于针对hMPV的疫苗候选物的临床研究，因为还未能开发出能够产生保护性免疫的原型。迄今在动物模型中评价过的原型产生Th2型的基于抗体的免疫性，其不是长期的本文档来自技高网...
【技术保护点】
赋予针对偏肺病毒(hMPV)感染的保护作用和/或减弱由hMPV引起的致病性的免疫原性制剂，其特征在于，所述制剂在药理学上可接受的盐水缓冲液中以104至109个细菌(CFU/剂)/株的量包含一种或多种重组分枝杆菌减毒株，其中每种菌株表达hMPV的蛋白P或蛋白P的免疫原性片段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.01 CL CL2013-028291.赋予针对偏肺病毒(hMPV)感染的保护作用和/或减弱由
hMPV引起的致病性的免疫原性制剂，其特征在于，所述制剂在药理
学上可接受的盐水缓冲液中以104至109个细菌(CFU/剂)/株的量包
含一种或多种重组分枝杆菌减毒株，其中每种菌株表达hMPV的蛋白
P或蛋白P的免疫原性片段。
2.根据权利要求1的免疫原性制剂，其特征在于，所述重组分枝
杆菌减毒株源自卡-介杆菌(BCG)菌株。
3.根据权利要求1的免疫原性制剂，其特征在于，所述偏肺病毒
来自亚型A、亚型B或这两种亚型。
4.根据权利要求1的免疫原性制剂，其特征在于，将编码hMPV
的蛋白P或蛋白P的免疫原性片段的核酸序列以一个或多个拷贝插入
到分枝杆菌减毒株的基因组中或插入到染色体外质粒中，从而使得由
所述核酸序列表达出所述病毒蛋白或免疫原性片段。
5.根据权利要求1的免疫原性制剂，其特征在于，所述制剂包含
两种或更多种重组分枝杆菌减毒株，并且其中每一种包含两种或更多
种重组分枝杆菌减毒株，并且其中每一种菌株在不同的位置处表达
hMPV的蛋白P的蛋白质或免疫原性片段，以可溶的形式、以可溶的
胞质蛋白质形式、作为经分泌的细胞外蛋白质或者作为与膜相结合的
蛋白质。
6.根据权利要求1的免疫原性制剂，...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·M·布埃纳拉米耶，A·M·卡莱伊斯帕拉，C·帕拉韦西诺博蒙特，
申请(专利权)人：智利天主教教皇大学，
类型：发明
国别省市：智利;CL
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。