一种固态发酵制备粪肠球菌的方法技术

本发明专利技术涉及一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，该方法包括以下步骤：(1)将粪肠球菌种子接种到一级种子培养基中，于35～40℃、微氧条件下培养16～25h，得到一级种子液；(2)将步骤(1)得到的一级种子液接种到种子罐的二级种子培养基中扩大培养，在35～40℃、微氧条件下培养16～20h，得到二级种子液；(3)将步骤(2)得到的二级种子液接种到发酵罐的发酵培养基中培养，在35～40℃、微氧条件下发酵16～30h，得到三级种子液；(4)将步骤(3)得到的三级种子液与固态培养基混合均匀，装袋发酵培养36～80h，制得发酵鲜料；(5)将步骤(4)得到的发酵鲜料干燥后，即制得固态发酵粪肠球菌成品。与现有技术相比，本发明专利技术生产工艺简单、产品成本低、粪肠球菌活菌数高等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种乳酸菌的制备方法，具体涉及一种固态发酵制备粪肠球菌的方法。
技术介绍
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是乳酸菌中的一类，属于链球菌科(Strep tococcaceae)肠球菌属(Enterococcus)。细胞球形，链状排列，无芽孢，兼性厌氧，革兰阳性球菌。粪肠球菌能发酵多种糖，产酸不产气，属于同型发酵。粪肠球菌能在10℃和45℃生长，化学耐性高，可生长于6.5％NaCl和pH 9.6的环境等，广泛分布于自然界中。粪肠球菌是人和动物肠道中的正常菌群，也是一种重要的乳酸菌，具有较好的肠道粘附能力，能产生乳酸及一些抗菌物质，抑制肠道腐败菌、致病菌的繁殖及肠道感染，降低腹泻率，促进营养物质的消化吸收，增强免疫力，提高采食量及饲料转化率，促进动物健康，是畜牧生产及食品工业首选使用的益生菌菌种之一。利用从健康人或动物分离的具有生理功能、无毒害的粪肠球菌及其他益生菌可制成动物微生态制剂，具有良好的防治消化道疾病和调节体内微生态平衡、提高机体免疫力、降低和中和毒素、促进康复等功能，并具有无毒、无害、无污染、无残留的优势。目前现有的粪肠球菌生产普遍采用液体深层发酵培养工艺，其存在发酵工艺生产投资大，原料及能源消耗量大，且生产出的产品保存性差，球菌活性不高，其含活菌量少。中国专利CN102286417A中公开了一种高密度粪肠球菌及其发酵培养工艺，该专利技术用高密度固体发酵培养工艺，分为以下几个步骤：1)以米糠、麸皮、玉米粉、豆粕中任意一种或几种原料，和活性炭左固态培养基料；2)于固态培养基料中加入营养液培养基作为固态发酵培养基；3)将固态发酵培养基灭菌后，接种粪肠球菌种液，经培养，干燥，粉粹制得高密度粪肠球菌产品。该专利技术生产的粪肠球
菌产品保存性好，含菌量较高，但是成本较高，蛋白含量低，综合性能较差。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种生产工艺简单、产品成本低的固态发酵制备粪肠球菌的方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，该方法包括以下步骤：(1)将粪肠球菌种子接种到一级种子培养基中，于35～40℃、微氧条件下培养16～25h，得到一级种子液；(2)将步骤(1)得到的一级种子液接种到种子罐的二级种子培养基中扩大培养，在35～40℃、微氧条件下培养16～20h，得到二级种子液；(3)将步骤(2)得到的二级种子液接种到发酵罐的发酵培养基中培养，在35～40℃、微氧条件下发酵16～30h，得到三级种子液；(4)将步骤(3)得到的三级种子液与固态培养基混合均匀，装袋发酵培养36～80h，制得发酵鲜料；(5)将步骤(4)得到的发酵鲜料干燥后，即制得固态发酵粪肠球菌成品。步骤(1)所述的一级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；步骤(2)所述的二级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；步骤(3)所述的发酵培养基包括以下重量百分比的组分：豆粕粉40g/L、麸皮25g/L、西红柿粉10g/L、磷酸二氢钾2g/L、蔗糖5g/L、硫酸镁0.8g/L、硫酸锰0.3g/L、无水乙酸钠3g/L，pH7.0±0.2。步骤(1)中所述的微氧条件为在转速180转/min的条件下；步骤(2)中所述的微氧条件的含氧量为0.15m3/min；步骤(3)中所述的微氧条件的含氧量为0.2m3/min。步骤(4)所述的固态培养基为豆粕与玉米的混合物，其中，豆粕与玉米的质量比为1～10:1。所述的固态培养基中豆粕与玉米的质量比为5:1。步骤(4)中固态培养基与三级种子液的质量比为10:1～2。步骤(4)中发酵温度为20～30℃，发酵时间为24～60h。步骤(5)中发酵鲜料的干燥温度为50～80℃，干燥时间为2～4h。所述的干燥温度为50℃。与现有技术相比，本专利技术的生产工艺简单、产品成本低，制备的粪肠球菌活菌数高，蛋白含量高，同时含有丰富的发酵代谢产物，能防治消化道疾病和调节体内微生态平衡、提高机体免疫力、降低和中和毒素、促进康复等功能。并具有无毒、无害、无污染、无残留的优势。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，该方法包括以下步骤：(1)用MRS培养基为种子培养基，在35℃，转速180转/min的条件下培养粪肠球菌20h，得到一级种子液；所述的一级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、无水乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；(2)将一级种子液接种到种子罐中进行扩大培养，MRS培养基为种子培养基，在35℃微氧条件下(含氧量为0.15m3/min)培养20h，得到二级种子液；所述的二级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、无水乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；(3)将二级种子液接种到发酵罐中进行扩大培养，MRS培养基为发酵培养基，在35℃微氧条件下(含氧量为0.2m3/min)培养30h，得到三级种子液；所述的发酵培养基包括以下重量百分比的组分：豆粕粉40g/L、麸皮25g/L、西红柿粉10g/L、磷酸二氢钾2g/L、蔗糖5g/L、硫酸镁0.8g/L、硫酸锰0.3g/L、无水乙酸钠3g/L，pH7.0±0.2。(4)将豆粕、玉米按质量比1:1混合后制得固态培养基，然后将固态培养基与三级种子液按质量比10:1均匀混合，装袋，并于20℃下发酵培养50h，制得鲜料；(5)将鲜料50℃干燥4h，制成固态发酵粪肠球菌成品。成品中粪肠球菌活菌数为5.2×1010cfu/g，水分含量9.2％。实施例2一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，该方法包括以下步骤：(1)用MRS培养基为种子培养基，在37℃微氧条件下(转速180转/min)培养粪肠球菌18h，得到一级种子液；所述的一级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、无水乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；(2)将一级种子液接种到种子罐中进行扩大培养，MRS培养基为种子培养基，在37℃微氧条件下(含氧量为0.15m3/min)培养18h，得到二级种子液；所述的二级种子培养基包括以下重量百分比的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将粪肠球菌种子接种到一级种子培养基中，于35～40℃、微氧条件下培养16～25h，得到一级种子液；(2)将步骤(1)得到的一级种子液接种到种子罐的二级种子培养基中扩大培养，在35～40℃、微氧条件下培养16～20h，得到二级种子液；(3)将步骤(2)得到的二级种子液接种到发酵罐的发酵培养基中培养，在35～40℃、微氧条件下发酵16～30h，得到三级种子液；(4)将步骤(3)得到的三级种子液与固态培养基混合均匀，装袋发酵培养36～80h，制得发酵鲜料；(5)将步骤(4)得到的发酵鲜料干燥后，即制得固态发酵粪肠球菌成品。

【技术特征摘要】
1.一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将粪肠球菌种子接种到一级种子培养基中，于35～40℃、微氧条件下培养16～25h，得到一级种子液；(2)将步骤(1)得到的一级种子液接种到种子罐的二级种子培养基中扩大培养，在35～40℃、微氧条件下培养16～20h，得到二级种子液；(3)将步骤(2)得到的二级种子液接种到发酵罐的发酵培养基中培养，在35～40℃、微氧条件下发酵16～30h，得到三级种子液；(4)将步骤(3)得到的三级种子液与固态培养基混合均匀，装袋发酵培养36～80h，制得发酵鲜料；(5)将步骤(4)得到的发酵鲜料干燥后，即制得固态发酵粪肠球菌成品。2.根据权利要求1所述的一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，其特征在于，步骤(1)所述的一级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、无水乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；步骤(2)所述的二级种子培养基包括以下重量百分比的组分：蛋白胨10g/L、酵母膏15g/L、无水乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、葡萄糖20g/L，pH7.0±0.2；步骤(3)所述的发酵培养基包括以下重...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖前青，郑云峰，陆克文，
申请(专利权)人：上海邦成生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31