一组特异识别三种海洋毒素的核酸适配体制造技术

本发明专利技术提供了一组能同时识别软骨藻酸和河豚毒素的单链DNA核酸适配体DA‑01和TTX‑27，一条能特异性识别软骨藻酸的单链DNA核酸适配体DA‑06，一条能特异性识别河豚毒素的单链DNA核酸适配体TTX‑07，一条能特异性识别石房蛤毒素的单链DNA核酸适配体STX‑41。本发明专利技术采用磁性还原氧化石墨烯(MRGO)辅助分离的指数富集配体系统进化(SELEX)技术，利用磁性还原氧化石墨烯能吸附游离的单链DNA但不能吸附与靶标分子结合的单链DNA的特性，同时利用其磁分离富集特性，将对靶标毒素具有亲和性的和无亲和性的单链DNA分离，经过16轮反复的孵育、分离、扩增、制备单链的体外筛选，对所得ssDNA进行一级结构同源性和二级结构相似性分析，然后测定其亲和性和特异性，最终获得一组高亲和性和特异性的核酸适配体。该组适配体在水产品中软骨藻酸、河豚毒素、石房蛤毒素的分析检测和分离富集脱除净化方面具有广泛的应用前景。

A group of aptamers specifically identifying three kinds of marine toxins

The invention provides a set of simultaneous identification of domoic acid and tetrodotoxin single stranded DNA aptamer DA 01 and TTX 27, a specific recognition of single stranded DNA cartilage alginic acid nucleic acid aptamer DA 06, a single strand of DNA nucleic acid can specifically recognize tetrodotoxin aptamer TTX 07, a single strand of DNA nucleic acid can specifically recognize saxitoxin aptamer STX 41. The invention adopts magnetic reduction of graphene oxide (MRGO) assisted separation of systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) technology, reduction of graphene oxide can not but single stranded DNA adsorption and target molecules combined with the characteristics of single stranded DNA isolated by magnetic adsorption, while using its magnetic separation and enrichment characteristics of the target will have an affinity for toxin the affinity of single stranded DNA and no separation, after 16 rounds of repeated incubation, isolation, amplification, single strand preparation in vitro, the ssDNA primary structure homology and two structural similarity analysis, and then determine its affinity and specificity, and ultimately get a group of high affinity nucleic acids and the specificity of aptamer. This group of aptamers has broad application prospects in the analysis, detection, separation, enrichment and purification of alginic acid, tetrodotoxin and clam toxin in aquatic products.

【技术实现步骤摘要】
一组特异识别三种海洋毒素的核酸适配体
本专利技术属于食品安全生物
，涉及利用磁性还原氧化石墨烯辅助分离的指数富集配体系统进化技术筛选一组能同时识别软骨藻酸和河豚毒素的单链DNA核酸适配体及能特异性识别软骨藻酸、河豚毒素、石房蛤毒素的单链DNA核酸适配体各一条。
技术介绍
海洋毒素主要来自有毒藻类，经食物链传递给水生动物并在其体内积累。近年来，随着海洋赤潮和湖泊蓝藻爆发的加剧，人们因食用含毒水产品造成的食物中毒事件逐渐增多。海洋毒素种类繁多，根据其溶解性不同可以分为亲水性和亲脂性两大类。石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)、软骨藻酸(Domoicacid,DA)和河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是最主要的三类亲水性海洋毒素。STX和TTX都是钠离子通道抑制剂，能通过选择性地结合电压门控钠离子通道表面受体阻止钠离子的传输，进而阻断神经冲动的传导，从而引起神经麻痹、呼吸困难等症状，甚至造成死亡。软骨藻酸是一种类氨基酸的兴奋性神经毒素，与中枢神经系统中的丙酸受体、谷氨酸受体、天冬氨酸受体都具有很强的亲和力，通过激活这些受体引起Ca2+、Na+在神经细胞中的过量积累并产生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组能同时识别软骨藻酸和河豚毒素的单链DNA核酸适配体DA‑01和TTX‑27，一条能特异性识别软骨藻酸的单链DNA核酸适配体DA‑06，一条能特异性识别河豚毒素的单链DNA核酸适配体TTX‑07，一条能特异性识别石房蛤毒素的单链DNA核酸适配体STX‑41，适配体的序列如序列表中序列1，2，3，4，5所示。

【技术特征摘要】
1.一组能同时识别软骨藻酸和河豚毒素的单链DNA核酸适配体DA-01和TTX-27，一条能特异性识别软骨藻酸的单链DNA核酸适配体DA-06，一条能特异性识别河豚毒素的单链DNA核酸适配体TTX-07，一条能特异性识别石房蛤毒素的单链DNA核酸适配体STX-41，适配体的序列如序列表中序列1，2，3，4，5所示。2.根据权利要求1所述的适配体，其特征在于，所述序列为人工合成的序列，或任何其他来源的同样的序列。3.特异性识别软骨藻酸、河豚毒素、石房蛤毒素的核酸适配体，该适配体为在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王周平，顾华杰，段诺，吴世嘉，叶华，马鹏飞，邹颖，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32