应用RNA酶保护法高通量筛选天然存在的正义-反义转录物制造技术

本发明专利技术涉及一种高通量筛选天然存在的正义－反义转录物（Ｎａｔｕｒａｌｓｅｎｓｅ－ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ，ＮＳＡＴｓ）的新方法。本发明专利技术利用细胞内ＮＳＡＴｓ是双链ＲＮＡ分子的特点，以及双链ＲＮＡ分子能够免受单链ＲＮＡ特异的ＲＮａｓｅⅠ的酶解作用，从而在ＲＮａｓｅⅠ酶解反应中保留下来的特性，建立了通过实验的手段来实现高通量筛选细胞内真正的ＮＳＡＴｓ的方法。利用这一方法，可以通过高通量筛选各种来源和状态的组织或细胞内真正的正义ＲＮＡ－反义ＲＮＡ复合物，理论上，通过该方法可以获得细胞内任何一个存在的ＮＳＡＴｓ。在鉴定ＲＮＡ作用的靶向基因或筛选潜在的ＲＮＡ药物时，本发明专利技术也有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
本专利技术涉及一种高通量筛选细胞内真正的正义－反义转录物的新方法，实施步骤为：ｉ．提取组织总ＲＮＡ。ｉｉ．用ＲＮａｓｅⅠ处理总ＲＮＡ。ｉｉｉ．证实残余的ＲＮＡ是双链ＲＮＡ（Ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＲＮＡ，ｄｓＲ ＮＡ）。ｉｖ．证实残余的ＲＮＡ是细胞内源的ＲＮＡ。ｖ．把双链ＲＮＡ变性为单链ＲＮＡ。ｖｉ．把单链ＲＮＡ逆转录为互补的ＤＮＡ（ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＤＮＡ，ｃＤＮＡ）。ｖｉｉ．在ｃＤＮＡ的３’端加上多聚Ａ。　 　ｖｉｉｉ．合成ｃＤＮＡ的第二条链。ｉｘ．制备双链ＤＮＡ（Ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ，ｄｓＤＮＡ）的一个平端和一个粘端。ｘ．把双链ＤＮＡ克隆入克隆载体。ｘｉ．把重组载体转化如宿主细胞，构建总ＲＮＡ中 ＮＳＡＴｓ的ｃＤＮＡ文库。ｘｉｉ．对克隆进行序列测定。ｘｉｉｉ．把克隆序列进行生物信息学分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘德培，柯细松，宫环，陆璐，屈祎，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]