本发明专利技术涉及VP53B和VP110抗体及其在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。本发明专利技术筛选得到VP53B和VP110部分蛋白片段，生产了多克隆抗体，采用对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白抗体中和实验证实了VP53B和VP110的多克隆抗体可以显著抑制WSSV病毒的经口侵染能力，尤其VP53B的多克隆抗体保护率高达85％。此外，两种多克隆抗体具有协同效应。本发明专利技术为防治对虾白斑综合征提供了一种新的药物，可有效预防WSSV的感染和传播。
The application of VP53B and VP110 antibodies in the preparation of drugs against leukoplakia syndrome in shrimp
The present invention relates to VP53B and VP110 antibodies and their application in the preparation of drugs to prevent and control white spot syndrome of shrimp. The present invention screened VP53B and VP110 protein fragment, producing polyclonal antibody, the white spot syndrome virus (WSSV) envelope protein antibody neutralization test confirmed by oral infection of polyclonal antibodies against VP53B and VP110 can significantly inhibit the WSSV virus, especially VP53B polyclonal antibody protection rate as high as 85%. In addition, the two polyclonal antibodies have synergistic effects. The invention provides a new drug for the prevention and control of white spot syndrome of prawns, which can effectively prevent infection and transmission of WSSV.
【技术实现步骤摘要】
VP53B和VP110抗体及其在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用
本专利技术涉及水产养殖的疾病防治领域，具体地说，涉及VP53B和VP110抗体及其在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。
技术介绍
对虾白斑综合征是一种在对虾养殖业较为常见的爆发性流行性疾病，其具有传播宿主广、致死速度快、致死率高等特点。对虾白斑综合征病毒(WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV)为导致对虾白斑综合征的病原体病毒。宿主范围具体包括对虾、螯虾等在内的大约98种甲壳类动物。宿主感染WSSV后的症状包括：食欲减退，常浮于水面，部分宿主体表出现白斑，附肢无力，肝胰腺褪色等现象。WSSV感染对虾后，可导致对虾在三到七天内死亡，且死亡率接近100％。对虾白斑综合征给世界的虾养殖业造成了巨大的损失。自上世纪九十年代初在中国爆发以来，对虾白斑综合征陆续在亚洲、美洲、欧洲等国相继爆发。相关统计数据显示，由于对虾白斑综合征的爆发所造成的经济损失已经达到80-150亿美元，并且该损失以每年10亿美元的速度递增，占到世界虾养殖年产量的十分之一。然而，迄今为止，依然没有相对有效的方法去防治WSSV。随着对于WSSV研究的深入，人们对于WSSV的了解也逐步加深。目前关于WSSV病毒的病毒结构、病毒宿主范围、病毒分类都有了较为深入的了解。WSSV病毒粒子的结构特征及其分类：WSSV病毒粒子呈长杆状，无包涵体，尾部有类似鞭毛的附着结构，该结构的功能尚不清楚。病毒颗粒长约250nm-330nm，宽约80-120nm，为双链DNA病毒。其病毒粒子的结构从外至内共有三部分，包括三层囊膜结构、桥连结构和核衣壳结构。由于WSSV颗粒形状与杆状病毒类似，所以最初认为其属于杆状病毒(Baculoviridae)。后来，国际病毒分类委员会将其划分为Nimaviridae科Whispovirus属的唯一种。Whispovirus属是一种新划分的病毒属，随着对病毒分类研究的深入，将可能会有越来越多的病毒划分到该属，其潜在病毒种包括B病毒、B1病毒、Tau病毒、Baculo-A病毒和Baculo-B病毒。WSSV囊膜蛋白在病毒侵染中的作用研究进展：WSSV的结构蛋白根据其在病毒位置的不同，通常划分三种蛋白，即囊膜蛋白、桥连蛋白和核衣壳蛋白。一般认为，病毒的囊膜蛋白由于能够直接作用于受体相关细胞而在病毒的感染过程中往往起到了相当重要的作用。因此，对于WSSV囊膜蛋白的研究已成为WSSV研究领域的热点。目前已经鉴定的WSSV囊膜蛋白共33以上，包括VP12B、VP13B、VP14、VP19、VP28、VP31、VP32、VP33、VP37、VP38A、VP39B、VP41A、VP41B、VP51A、VP51B、VP53A、VP53B、VP60A、VP68、VP90、VP110、VP124、VP180、VP187、VP281和VP466等。其中，VP28在WSSV囊膜蛋白中含量大约60％，是WSSV的主要囊膜蛋白。相对而言，对于VP28蛋白的功能性研究也较为深入。其次研究较多的为VP14、VP19和VP37。虽然关于WSSV囊膜蛋白已有了初步的研究和探索，人们发现了一些囊膜蛋白参与了WSSV的侵染过程，并在虾体内找到了相应的受体，然而，WSSV病毒较为特殊，几乎没有其他病毒与其同源，这给WSSV囊膜蛋白的结构和功能性研究造成了一定的困难。目前为止，WSSV依然有很多囊膜蛋白在病毒侵染过程中的功能尚未清楚。尝试了多种WSSV囊膜蛋白，无论是沉默受体蛋白，还是用蛋白抗体包埋WSSV病毒，抑或是直接用蛋白作为口服疫苗免疫，在WSSV经口感染中和实验中，都没有取得较为理想的结果。所以，关于WSSV蛋白和受体直接的相互作用还有待进一步研究，以期能够找到WSSV经口侵染中最为关键的囊膜蛋白，并制备相应的小分子药物以期能够封闭该蛋白，从而达到抑制WSSV经口感染的目的。VP53B和VP110是WSSV的两个囊膜蛋白，分子量大小分别为53kDa和110kDa，其功能尚未完全明确。有相关研究表明，VP53B和VP110均可与对虾虾体内的几丁质结合蛋白相结合，与此同时，VP110还与精氨酸激酶和肌动蛋白有一定的结合效果。VP53B开放阅读框为wsv115，理论分子量108kDa，在病毒颗粒上的实际分子量为53kDa。2007年Li通过iTRAQ技术证实VP53B为WSSV囊膜蛋白。蛋白质组学分析推测VP53B与离子传导通路相关。2007年Chen通过酵母双杂交的方式发现VP53B可以与PmCBP结合。而PmCBP在WSSV侵染对虾后期显著性上调，因而推测VP53B参与WSSV侵染过程。专利文献CN1831009A，公开日2006.09.13，将编码WSSV膜蛋白VP68、VP28、VP466的多核苷酸序列分别克隆到质粒载体pGEX4T-2中，转染至大肠杆菌中并诱导表达出WSSV膜蛋白的融合蛋白VP68、VP281、VP466，用纯化的融合蛋白VP68、VP281、VP466分别免疫小鼠，制备VP68、VP281、VP466的特异性多克隆抗体，通过皮下肌肉注射的抗病毒实验证明这些抗体具有抗WSSV感染的能力。总的来说，VP53B和VP110在WSSV感染中的作用还不明确，未见使用VP53B和VP110抗体制备防治对虾白斑综合征的药物，尤其是口服药物的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供VP53B和VP110及其抗体，和在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。第一方面，本专利技术提供了一种分离的多肽，所述的多肽的氨基酸序列包含SEQIDNO:1所示的序列。第二方面，本专利技术提供了所述的多肽在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。第三方面，本专利技术提供了一种特异性抗对虾白斑综合征病毒的VP53B的抗体，所述的抗体是用如上所述的多肽免疫动物而获得。作为一个优选例，所述的抗体是多克隆抗体。第四方面，本专利技术提供了所述的抗体在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。第五方面，本专利技术提供了一种防治对虾白斑综合征的药物组合物，所述的药物组合物包含如上所述的抗体。作为一个优选例，所述的药物组合物还包含特异性抗SEQIDNO:4所示的多肽的抗体。作为一个优选例，所述的药物组合物的剂型为口服剂型。第六方面，本专利技术提供了一种制备抗体的方法，所述的方法包括使用如上所述的多肽免疫动物的步骤。第七方面，本专利技术提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码如上所述的多肽。本申请中，术语“多肽”指氨基酸残基的聚合物。肽、寡肽、二聚物、多聚物等都包括在该定义中。该术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。本申请还包括多肽的类似物，所述类似物优选包括性质上保守的取代，即这些取代发生在与它们的侧链有关的一类氨基酸中。具体而言，氨基酸一般被分成四类：(1)酸性——天冬氨酸和谷氨酸；(2)碱性——赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性——丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；(4)无电荷的极性——甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。有时将苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸归为芳族氨基酸。例如，有理由预测：单独用异亮氨酸或缬氨酸取代亮氨酸、用谷氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列包含SEQIDNO:1所示的序列。2.权利要求1所述的多肽在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。3.一种特异性抗对虾白斑综合征病毒的VP53B的抗体，其特征在于，所述的抗体是用权利要求1所述的多肽免疫动物而获得。4.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述的抗体是多克隆抗体。5.权利要求3或4所述的抗体在制备防治对虾白斑综合征的药物中的应用。6.一种防治对虾白斑综合征...
【专利技术属性】
技术研发人员：王永杰，夏文旭，覃冰，姚迁会，江录志，刘昱辰，喻勇新，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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