新颖的鞘脂和其制备方法技术

本发明专利技术提供了制备新鞘脂和其它第二代的鞘氨醇母体化合物的方法，该方法包括培养合适的真菌，从这些真菌收集菌丝体和从菌丝体中分离鞘脂。该鞘氨醇骨架物料抑制蛋白激酶Ｃ，具有抗炎或抗肿瘤作用；此外，这些鞘氨醇母体物料对作物具有抗致病微生物的保护作用。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鞘脂制备方法。而且，本专利技术的某些鞘脂具有大量已报道过的存在于海星细胞毒脑苷脂的稀有支链多不饱和鞘氨醇部份(见Kenneth L.Rinehart等人“Ophidi acerebrosidesCytotoxicGlycosphingolipids Containing a Novel Sphingosine from a Sea Star”，J.Org.Chem.，1994(59)，第144-147页)。鞘氨醇和鞘脂对哺乳动物细胞产生很多作用(由S.Spiegel和S.Milstein论述，见J.Membrane Biol.146，225(1995))并用作蛋白激酶C的抑制剂(美国专利4,937,232)，因此，这些鞘氨醇和鞘脂对于和癌症、类风湿性关节炎、糖尿病并发症、中枢神经系统紊乱等的一些疾症具有药用价值。此外，鞘磷酸肌醇酯(inositolsphingophospholipids)和氨基乙基磷酸N-脂酰基鞘氨酯(ceramideaminoethylphosphonate)代表已被在卵菌亚纲的真菌上描述并证实生物活性的两类鞘脂。来自疫霉(Phytophthora capsici)的鞘磷酸肌醇酯对于胡椒作物具有保护作用以对抗由疫霉(P.capsici)引起的致病机理(见European Joural ofBiochemistry，1990(191)，第203-209页)。据报道来自疫霉(Phytophthora infestans)的氨基乙基磷酸N-脂酰基鞘氨酯能引发作物组织中植物抗毒素的聚积(见Physiologicai and Molecular PlantPathdogy，1986(28)，第215-225页)，该反应往往与激活抗病机理有关。本专利技术涉及的是以前没有记述过的新鞘脂。本专利技术的制备鞘脂的方法是新颖的，并且比起从海星中分离那些鞘脂或通过繁多的全合成步骤(例如Richard R.Schmidt等人所述，见“Sphingosines-an Oxa-Cope Rearrangement Route for Their Synthesis”，Synthesis，第868-876页(1995年7月))来讲，明显要更方便。本专利技术用真菌作为所需鞘脂的方便的来源，优选卵菌亚纲真菌，分离所需的鞘脂后，如果需要，可将该鞘脂适宜地改性为子体鞘脂，从而在水解条件下，除去母体鞘脂的原来的首基和/或脂肪酸部分以制得N-脂酰基鞘氨醇或鞘氨醇磷酸乙醇胺(Sphingosinephosphorylethandamine)。然后，可使用本领域普通技术人员公知的技术将该母体鞘脂、N-脂酰基鞘氨醇或鞘氨醇磷酰基乙醇胺改性以制得各种鞘氨醇骨架的子体化合物。根据F.K.Sparrow所著“The Present Status of Classification ofBiflagellate Fungi”(见John Wiley(纽约)出版，E.B.Gareth Jones所编的Recent Adrances in Aquatic Mycology的第213-222页(1976))，可将卵菌亚纲真菌下分为六个等级Eurychasmales、水霉目、链壶菌目、霜霉目、Thranstochytrials和网粘菌目。这些卵菌亚纲真菌可使用各种天然的或化学成分确定的，固体或液体的生成介质(例如O.K.Ribeiro在A.R.G-antner Verlag(德国瓦杜兹)出版的“A Source Book of the Genus Phytophthora”中所述的那些)来培养。那些天然介质的实例是V-8汁介质、利马豆介质、马铃薯葡萄糖介质、燕麦粒介质、豌豆汁介质、改性胡萝卜介质、红肾形豆粉介质、谷物粉介质、芸苔种子提取液介质和黑麦种子提取液介质。化学成分确定的介质的实例包括Ribeiro在同一参考文献中所述的那些(79-99页)。本专利技术的实施方案之一是制备下式新鞘脂及其对映异构体和结构同分异构体的方法 其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多基，所有这些既可以是直链又可以是支链；X是支链或直链的烷基、烯基或多烯基；该方法包括的步骤为(i)培养合适的真菌，(ii)从所述的真菌中收集菌丝体，和(iii)从所述的菌丝体中分离鞘脂。在优选的实施方案中，制备式(I)鞘脂的方法包括在步骤(i)中培养合适的卵菌亚纲真菌，该式(I)中X是(C10-C20)烷基、(C10-C20)烯基、或(C10-C20)多烯基，且所有这些基团既可以是直链，又可以是支链的。在更优选的实施方案中，制备式(I)鞘脂的方法中X是(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有这些基团既可以是直链，又可以是支链的。在最优选的实施方案中，制备式(I)鞘脂的方法中X是支链的(C14-C18)三烯基或直链的(C11-C15)烯基，以及R8a是直链的(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基。以下实施例用以说明本专利技术，但是这些实施方案的范围并不局限于此。实施例1从腐霉(Pythinm ultimum)分离和鉴定鞘脂将从美国式培养收集(American Type Culture Collection)得到的腐霉(Pythinm ultimum)(ATCC 26083)保存在马铃薯葡萄糖琼脂中(Difco Laboratories)。用直径7mm的菌丝体接种棒取自马铃薯葡萄糖琼脂培养基的培养物生长边缘，接种到直径9cm，装有20ml液体天冬酰胺-蔗糖培养基(Erwin，D.D.Katznelson，K.，(1971)CanadianJournal of Microbiology 7，第15页)的培养皿中。将培养皿在25℃用转动摇床以60转/分钟摇动培养48小时。然后，通过用玻璃纤维滤器过滤收集菌丝体，水洗并冷冻干燥。如实施例4所述提取和分离如式(IA)所示的来自腐霉(Pythinmultimum)的主要鞘脂。以本领域普通技术人员公知的方法通过质谱分析和核磁共振测定式(IA)鞘脂的结构。在该鞘脂的脂肪酸成分中发现多相性。式(IA)鞘脂 实施例2从疫霉(Phytophthora infestans)分离和鉴定鞘脂将疫霉(Phytophthora infestans)(A1菌株)保存在豌豆汁培养基或黑麦A琼脂中(见C.E.Caten和J.L.Jinks，(1968)，Canadian Journalof Botany 46，第329页)。通过把283g冻豌豆放入1升蒸馏水中高压灭菌，剧烈搅拌高压灭菌了的豌豆并用沙罩过滤制得豌豆汁培养基。将20g琼脂加入滤液后再次高压灭菌，而后倒入培养皿。用直径7mm的菌丝体接种捧取自豌豆汁培养或黑麦A琼脂的培养物的生长边缘，接种到直径9cm，装有20ml液体天冬酰胺-蔗糖培养基中。将培养皿在25℃用转动摇床以60转/分钟摇动培养20天。然后，在玻璃纤维滤器上过滤以收集菌丝，水洗并冷冻干燥。如实施例4所述，提取和分离如式(IB)所示的来自疫霉(Phytophthora infestans)的主要鞘脂。在该鞘脂的脂肪酸成分中发现多相性。以本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备通式（Ⅰ）鞘脂及其对映异构体和结构同分异构体的方法，＊＊＊ （Ⅰ）其中Ｒ↑［４ａ］是Ｃ（Ｏ）Ｒ↑［８ａ］；Ｒ↑［８ａ］是（Ｃ↓［１３］－Ｃ↓［２３］）烷基、（Ｃ↓［１３］－Ｃ↓［２３］）链烯基或（Ｃ↓［１３］－Ｃ↓［２３ ］）多烯基，所有这些基团既可以是直链又可以是支链的；Ｘ是支链或直链的烷基、烯基或多烯基；该方法包括的步骤为：（ｉ）培养合适的真菌，（ｉｉ）从所述的真菌收集菌丝体，和（ｉｉｉ）从所述的菌丝体中分离鞘脂。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特阿瑟莫罗，戴维汉密尔顿扬，小罗纳德罗斯，
申请(专利权)人：陶氏益农有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]