高纯度磷脂的制造方法以及以该方法得到的高纯度鞘磷脂和缩醛磷脂型甘油磷脂技术

本发明专利技术在于提供一种以简单的操作收率良好地从生物材料制造高纯度鞘磷脂和高纯度缩醛磷脂型甘油磷脂的方法。该高纯度磷脂的制造方法包括：（Ａ）以特定的混合溶剂对从生物材料中提取的干燥总脂质进行提取处理，分离为不溶部分和可溶部分的工序；（Ｂ）以特定的混合溶剂对上述（Ａ）工序中得到的不溶部分进行洗净处理，得到粗制鞘磷脂的工序；（Ｃ）以水溶性酮类溶剂对上述（Ａ）工序中得到的可溶部分进行洗净处理而得到粗制缩醛磷脂型甘油磷脂的工序；（Ｄ）使酶与上述（Ｂ）工序中得到的粗制鞘磷脂作用，得到纯度９０％以上的鞘磷脂的工序；和（Ｅ）使酶与上述（Ｃ）工序中得到的粗制缩醛磷脂型甘油磷脂作用，得到纯度４０％以上的缩醛磷脂型甘油磷脂的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及以简单的操作从生物材料中，优选从家禽类中，收率良好地制造作为 功能性食品原料、医药品原料、化妆品原料等有用的高纯度鞘磷脂，特别是人型的鞘磷脂和 高纯度缩醛磷脂型甘油磷脂的方法，以及以该方法得到的高纯度鞘磷脂和高纯度缩醛磷脂 型甘油磷脂。
技术介绍
脂质是指在分子中具有长链脂肪酸或类似的烃链、存在于生物体内或生物由来的 物质。这种脂质能够分类为简单脂质和复合脂质。简单脂质由C、H和0构成，一般可溶于 丙酮，简单脂质的三酰甘油在动物体中作为能量的储存体存在于脂肪组织中。另一方面，复 合脂质为含有磷酸的P或碱的N等的脂质群。因此，复合脂质包括疏水性部分(脂肪酸部 分)和亲水性部分(磷酸或碱的部分)，显示两亲性，一般而言，相对于上述简单脂质可溶于 丙酮，复合脂质不溶于丙酮。这样的复合脂质是生物膜的构成成分。上述复合脂质能够大致分为(1)甘油磷脂；(2)鞘磷脂(sphingophospholipids)(包括鞘磷脂(sphingomyelin)、神经 酰胺氨乙基膦酸等)；C3)鞘糖脂(包括脑苷脂、硫苷脂、神经节苷脂等)以及(4)甘油糖脂 (有存在于微生物或高等植物中的与二酰甘油结合各种糖类的物质等)。另外，上述(2)鞘 氨醇磷脂和( 鞘糖脂总称为鞘脂。上述甘油磷脂是骨架上具有甘油磷酸的磷脂的总称，有磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷 脂酰乙胺醇、双磷脂酰甘油等。该甘油磷脂中，大多为非极性部分为脂肪酸的酯的甘油磷 脂，也有乙烯基醚键的缩醛磷脂型的甘油磷脂。该甘油磷脂作为生物膜的构成成分是重要的，其中缩醛磷脂型的甘油磷脂由于乙 烯基醚键的自由基敏感度较高，因此作为具有抗氧化性的磷脂，近年颇受关注。最近，有报 道指出缩醛磷脂型的甘油磷脂通过不同于作为细胞膜的抗氧化性成分的α-生育酚(维生 素Ε)的机制，有助于含有胆固醇的磷脂膜的氧化稳定性(例如，参考非专利文献1)，另外， 指出缩醛磷脂型的甘油磷脂不仅参与细胞膜或脂蛋白的抗氧化性，而且对细胞的信号转导 系统有重要的作用(例如，参考非专利文献2)。这样的缩醛磷脂型的甘油磷脂防止痴呆症中的脑的神经细胞死亡的作用备受期 待，但是实际情况是仍没有发现能够安全且大量地获得的供给源。另一方面，鞘磷脂是具有鞘氨醇等的长链碱的脂质的总称，如上所述主要包括鞘 糖脂和鞘磷脂。鞘糖脂除含有糖和长链脂肪酸之外，还含有长链碱的鞘氨醇或植物鞘氨醇 及其它。最简单的鞘糖脂为脑苷脂，还有在其上带有硫酸基的硫脑苷脂、带有数分子中性糖 的神经酰胺低聚己糖苷(七，彡κ才'JK )、带有唾液酸的神经节苷脂等。可以 认为这些物质存在于细胞表层，参与认知机制。鞘磷脂分为神经酰胺1-磷酸的衍生物和神经酰胺1-膦酸的衍生物，前者中已知有鞘磷脂，后者中已知有神经酰胺氨基乙基膦酸(七，彡F ν -J T > ( -fe 7 F T 7工子卟水7水 > 酸))。近年来，发现这些鞘脂的分解代谢物的神经酰胺、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸等参与 细胞内的信号传导，备受关注。另外，发现鞘脂与胆固醇等一同参与被称为“筏(raft) ”的 膜微结构域的形成，该微结构域作为信号转导的场所发挥重要作用，因而其受关注程度更 加提高。这样的鞘脂过去从牛脑中提取、利用，但从安全性的问题，目前利用谷物或真菌由 来的鞘脂。但是，构成这些谷物或真菌由来的鞘脂的鞘氨醇碱组成和哺乳动物由来的组成 不同，因此存在生物利用度低于人型的鞘脂的问题。但是，为了从食品、动物组织等的总脂质中制造出相对大量的鞘磷脂，以使用硅酸 等的柱色谱法进行梯度洗脱而制造，或用溶剂分馏法梯度分馏制造。每一种都需要复杂的 步骤。在溶剂分馏法中比较常见是向总脂质中添加丙酮使复合脂质(磷脂)沉淀(不溶部 分)，将以酯洗净不溶部分而除去甘油磷酯的物质作为粗鞘脂馏分的方法。该馏分中不仅含 有鞘磷脂还含有脑苷脂等的鞘糖脂。另一方面，已知鸡皮的磷脂中大量含有人型鞘磷脂和缩醛磷脂型甘油磷脂。非专利文献1 "J. Lipid Res. ”，第 44 卷，第 164 171 页(2003 年)非专利文献2“J. Mol. Neurosci. ”，第 16 卷，263 272 页；discussion 279 284 页(2001年)
技术实现思路
专利技术所要解决的问题基于这样的事实，本专利技术的目的在于提供一种以简单的操作收率良好地从生物材 料制造高纯度鞘磷脂，特别是人型鞘磷脂和高纯度缩醛磷脂型甘油磷脂的方法。解决问题的方法为了实现上述目的，本专利技术的专利技术人进行了深入的研究，其结果发现，通过对生物 材料实施特定的工序，能够实现该目的，基于该知识而完成了本专利技术。S卩，本专利技术在于提供(1) 一种高纯度磷脂的制造方法，其特征在于，包括(A)以脂肪族烃类溶剂和水 溶性酮类溶剂的混合溶剂对从生物材料中提取的干燥总脂质进行提取处理，分离为以鞘磷 脂为主体的不溶部分和可溶部分的工序；(B)以脂肪族烃类溶剂和水溶性酮类溶剂的混合 溶剂对上述(A)工序中得到的以鞘磷脂为主体的不溶部分进行洗净处理，得到粗制鞘磷脂 的工序；(C)对上述㈧工序中得到的可溶部分进行溶剂除去处理之后，以水溶性酮类溶剂 进行洗净处理而得到粗制缩醛磷脂型甘油磷脂的工序；(D)使甘油磷脂水解酶磷脂酶与上 述(B)工序中得到的粗制鞘磷脂作用，对混合存在的甘油磷脂群进行水解处理之后，利用 溶剂萃取法得到纯度90%以上的鞘磷脂的工序；和(E)使甘油磷脂水解酶磷脂酶与上述 (C)工序中得到的粗制缩醛磷脂型甘油磷脂作用，对混合存在的甘油磷脂群进行水解处理 之后，利用溶剂萃取法得到纯度40%以上的缩醛磷脂型甘油磷脂的工序；(2)如上述(1)项所述的高纯度磷脂的制造方法，其中，生物材料为家禽类；(3)如上述( 项所述的高纯度磷脂的制造方法，其中，家禽类为产蛋废鸡和/或种鸡废鸡；(4)如上述C3)项所述的高纯度磷脂的制造方法，其中，产蛋废鸡由经过强制换羽 处理的产蛋鸡得到；(5)如上述(1) (4)项中任一项所述的高纯度磷脂的制造方法，其中，脂肪族烃 类溶剂为正己烷；(6)如上述(1) ( 项中任一项所述的高纯度磷脂的制造方法，其中，水溶性酮 类溶剂为丙酮；(7)以上述(1) (6)项中任一项所述的制造方法得到的、纯度为90%以上的高 纯度鞘磷脂；(8)以上述(1) (6)项中任一项所述的制造方法得到的、纯度为40%以上的高 纯度缩醛磷脂型甘油磷脂；(9)如上述(8)项所述的高纯度缩醛磷脂型甘油磷脂为纯度90%以上的缩醛磷脂 型磷脂酰胆碱；以及(10)如上述(8)项所述的高纯度缩醛磷脂型甘油磷脂为纯度90%以上的缩醛磷 脂型磷脂酰乙醇胺。专利技术的效果 根据本专利技术，能够提供以简单的操作从生物材料中，优选从家禽类中，收率良好地 制造作为功能性食品原料、医药品原料、化妆品原料等有用的高纯度鞘磷脂，特别是人型鞘 磷脂和高纯度缩醛磷脂型甘油磷脂的方法，以及以该方法得到的高纯度鞘磷脂和高纯度缩 醛磷脂型甘油磷脂。附图说明图1-1是实施例中从鸡皮提取总脂质的流程图。图1-2是实施例中从鸡胸肉提取总脂质的流程图。图2是实施例中从鸡皮总脂质提取粗制缩醛磷脂和粗制鞘磷脂的流程图。图3是实施例中鸡皮由来的磷脂类的HPLC图谱。图4是实施例中从粗制鞘磷脂制造精制鞘磷脂的流本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高纯度磷脂的制造方法，其特征在于，包括：（Ａ）以脂肪族烃类溶剂和水溶性酮类溶剂的混合溶剂对从生物材料中提取的干燥总脂质进行提取处理，分离为以鞘磷脂为主体的不溶部分和可溶部分的工序；（Ｂ）以脂肪族烃类溶剂和水溶性酮类溶剂的混合溶剂对所述（Ａ）工序中得到的以鞘磷脂为主体的不溶部分进行洗净处理，得到粗制鞘磷脂的工序；（Ｃ）对所述（Ａ）工序中得到的可溶部分进行溶剂除去处理之后，以水溶性酮类溶剂进行洗净处理而得到粗制缩醛磷脂型甘油磷脂的工序；（Ｄ）使甘油磷脂水解酶磷脂酶与所述（Ｂ）工序中得到的粗制鞘磷脂作用，对混合存在的甘油磷脂群进行水解处理之后，利用溶剂萃取法得到纯度９０％以上的鞘磷脂的工序；和（Ｅ）使甘油磷脂水解酶磷脂酶与所述（Ｃ）工序中得到的粗制缩醛磷脂型甘油磷脂作用，对混合存在的甘油磷脂群进行水解处理之后，利用溶剂萃取法得到纯度４０％以上的缩醛磷脂型甘油磷脂的工序。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：名达义刚，
申请(专利权)人：有限会社梅田事务所，
类型：发明
国别省市：JP