没有被非常规病毒污染的糖神经鞘脂混合物的制备与纯化方法技术

本发明专利技术是关于一种神经节苷脂混合物的制备方法，不含有非常规的、有生命危险的病毒污染物，不改变混合物对中枢和外周神经系统的生物和药理特性。（*该技术在2010年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术是关于一种特异性神经节苷脂混合物的制备方法和通过这样一种方法制得的产品，即是通过选择性地消除含有非常规的、有生命危险的病毒污染物，而不改变混合物对于中枢和外周神经系统作用的生物和药理特性。含唾液酸的神经节苷脂、糖神经鞘脂是哺乳动物所有细胞膜的正常组分，并且在神经组织中较丰富(Ando S.∶Neurochem.Int.5∶507，1983)。四种神经节苷脂，GM1、GD1a、GD1b和GT1b(根据Svennerholml.，J.Neurochem，10∶613，1963命名)构成了哺乳动物脑的神经节苷脂总含量的80-90%。尤其神经节苷脂存在于血浆膜的外层，这就告诉我们它们在许多生物活性上和在通过细胞膜传递信息上(Fishman et al.Science 194∶906，1976)起着重要作用，例如作为“传感器”和/或各种分子的受体。因此，它们在调节神经元的形成和中枢及外周神经系统修复方面起着关键性作用。的确，有充分的文献证明，如通过神经元培养基体外研究所揭示的，通过特异性膜机理和通过与神经营养因子相互作用神经节苷脂较好地影响外周神经系统(PNS)和中枢神经系统(CNS)因损害而引起的功能性修复(Doherty P.et al.，J.Neuroohem.44∶1259，1985;skaper S.et al.，Molecular Neurobiology，3∶173，1989)。特别是，如已经报导的在体内服用神经节苷脂可促进PNS在病理条件下神经再生和功能性修复如所描述的，对于创伤型神经病(Ceccarelli B.et al.，Adv.Exp.Med.Biol.71∶275，Plenum Press，New York，1976;Gorio A.et al.，Brain Res.7∶236，1980;Gario A.et al.，Neuroscience 8∶417，1983)、代谢型神经病(Norido F.et al.，Exp.Neurol.83∶221，1984)和中毒型神经病(Di Gregorio F.et al.，Cancer Chemother.，Pharmacol.26∶31，1990)有积极的作用。对于CNS，已大量报导了通过单涎神经节苷脂对于不同动物品种的各种神经元系统的局部缺血型(Cuello A.C.et al.，Brain Res.376∶373，1986;Karpiak S.E.et al.，CRC Critical Rev.in Neurobiology，vol.5，Issue 3，1990)，创伤型损害(Tof-fano G.et al，Brain J.，Dev.Brain RES.，296∶233，1984)和神经元中毒型损害(JOhns son J.Dev.Brain Res.，16∶171，1984)所诱导的修复有积极作用。最近发现神经节苷脂可以抑制由谷氨酸盐诱导的蛋白激酶C的易位和激活(Vaccarino F.et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，84∶8707，1987)。这种作用在局部缺血损伤情况下十分重要，有报导兴奋性氨基酸，如谷氨酸盐，起着决定性作用，这种氨基酸可触发导致神经元坏死的连锁反应(Cascade of events)。这一机理对损害周围地区存活的神经元较为有利，其可阻止退化变性并可响应局部营养因子来加速修复生长。通过神经节苷脂的临床应用已充分证实了试验研究的结果。十多年来，神经节苷脂作为治疗剂已在几乎所有类型的外周神经病上使用，这些包括从因机械损伤引起的到由于毒素和缺损引起的，以及从感染和炎症的疾病到代谢的机能障碍等引起的各种外围神经病。已经证实这些药物在单一一种和多种神经病、感觉运动原紊乱和影响自主神经系统疾病，例如许多神经病影响颅神经，例如Bell′s麻庳，三叉神经痛和带状疱疹引起的神经痛有同等的效应。神经节苷脂，特别是单涎神经节苷脂可广泛应用于CNS脉管或创伤型和这种疾病的后遗症(大脑的局部缺血、颅和脊柱外伤)中与急性损伤有关的所有疾病。它们已证实CNS的修复活性还支持了它们用于慢性神经变性疾病，如帕金森氏症(Parkinson′s diseas)和阿尔茨海默氏病(Alz-heimer′s diseae)。它们天生是内源性药物(endocoids)、是神经元膜的天然组分，这一事实说明它们是极好的，以及即使在大剂量的延长治疗中，也没有出现在一些常规治疗外周神经病经常发生的副作用。通常，合适的神经节苷脂混合物，例如下列一种配方GM1从18%到24%，GD1a从36%到44%，GD1b从12%到18%，GT1b从16%到22%，或单一一种神经节苷脂成分，特别是单涎神经节苷脂GM1具有如所描述的那些生物活性。这些神经节苷脂，如合适混合物或单一成分，特别是单涎神经节苷脂GM1是从哺乳动物脑中提取出来的，因此有必要给出它们特殊的生物功能和它们先前描述的对于外周和中枢神经系统治疗上的应用，使用纯化方法保证最终产品绝对纯，并且没有生物和化学污染物。很久以来，人们了解到在研究水平提取神经节苷脂是可能的(Tettamanti et al.，Biochim.e Biophys.Acta，296∶160，1973;Trams et al.，Biochim.e Biophys.Acta，60∶350，1962;Bogoch et al.，British J.Pharm.，18∶625，1962;Wiegandt et al.，Angew Chem.80∶89，1968;U.S.Patent No.3，436，413;和C.A.60，9851C，9895d)，但以前的方法还没有开发一种能消除和破坏与非常规病毒有关的成分的方法。当时之所以这样的一个原因，是这种影响用来提取脑所属的哺乳动物种属的这些疾病尚不知道。另一个原因是没有获得用作特异性识别潜在危险成分的试剂，而今，通过由分子生物技术的科学革命中，发现的最新获得的知识为基础发展起来的特殊方法，可以制备出这种有用试剂。有时可以产生一种疾病的情况，其中致病因子或多种因子无法被识别。一种这种疾病情况是被称作牛的海绵状脑病(BSE)，在1986年在英国首次报导(Wells G.et al.，Vet.Record，419，1986)。此名称是由于有病的动物脑组织出现海绵状而得名的。当用显微镜对组织切片分析发现，主要损伤包含大量的神经元液泡。所有迹象表明这样一个事实，即BSE属于一组中枢神经系统变性脑病，该病结果总是致死，并由一组非常规传染因子引起的(Fraser et al.，Vet.Record 123∶472，1988;Hope et al.，Nature 336∶390，1988)。这一组还包括羊和山羊的瘙痒病，折磨被捕获的鹿的慢性消瘦病，养貂场中貂传染的脑病，和二种人的疾病(two human diseases);库鲁病(Kuru)和克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jacob)。这些疾病引起的脑组织病理损伤在所有情本文档来自技高网...

【技术保护点】
神经节苷脂混合物的制备方法，其包括：ａ）用丙酮将含神经节苷脂组织脱脂得一丙酮沉淀物；ｂ）将所述丙酮沉淀物悬浮于能够将亲水性物质与疏水性物质分离的第一溶剂混合物中；ｃ）过滤将所述分离混合物得第一液相；ｄ）将所述第一液相沉淀得第 一原料；ｅ）溶解所述第一原料，并将溶解的第一原料于约ＰＨ１２加热；ｆ）在能够将亲水性物质与疏水性物质分离的第二溶剂混合物中，将所述加热溶解的第一种原料进行第二次分离；ｇ）分离所述的第二次分离混合物，除去有机相并保留水相；ｈ） 将所述水相沉淀生成第二原料；ｉ）溶解所述第二原料，并将其冷却得第三原料；ｊ）将所述第三原料溶于碱中；ｋ）将所述第三原料中和；和ｌ）将所述中和溶解的第三原料，通过能截断约１０ｋｄ分子量的膜进行透析，生成神经节苷脂混合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗朗切斯科德拉瓦莱，兰弗兰科卡列加罗，西尔瓦那洛朗齐，
申请(专利权)人：菲迪安股份公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]