一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。该试剂盒包括：偶联有血管内表皮生长因子受体1捕获抗体的磁微粒、吖啶酯标记的血管内表皮生长因子受体1检测抗体、血管内表皮生长因子受体1校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。本发明专利技术试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明专利技术建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

A chemiluminescent chemiluminescence detection kit for intravascular epidermal growth factor receptor 1 and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
本专利技术属于免疫检测分析
，具体是一种血管内表皮生长因子受体1的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。
技术介绍
可溶性血管内皮生长因子受体1(solublevascularendothelialgrowthfactorreceptor-1，sVEGFR-1)，也称可溶fms样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)，sVEGFR-1缺乏VEGFR-1第七个免疫球蛋白样结构域，缺乏细胞内酪氨酸激酶结构域，故其没有细胞信号转导功能，但其仍有与血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PIGF)高亲和力结合的能力。sVEGFR-l在体内主要发挥着对抗VEGF生物功能的作用，其主要表现在：（1）抗血管生成，抑制促血管生成的VEGF-VEGFR-2信号；（2）通过VEGR-1或VEGFR-2干扰VEGF介导的血管渗透性；（3）通过减弱VEGF-VEGFR-1依赖的单核细胞和巨噬细胞的活化和迁移产生抗炎作用。大量的研究也证实了VEGF的上述生物功能，如在人体内，sVEGFR-1被证明在维持角膜无血管方面发挥重要作用，在众多存在于角膜的抗血管生成的分子中(血管抑素、内皮抑素等)，sVEGFR-1发挥着抑制VEGFR的促血管生成的作用。子痫前期是妊娠妇女特有且又常见的一种疾病，在初次妊娠的妇女中发病率为7％～10％，关于其发病机制目前较公认的学说可能与胎盘浅着床、胎盘灌注减少和滋养细胞缺血缺氧有关，是妊娠妇女，产妇和围生儿发病及死亡的主要原因。其病因学机制始终是产科领域的研究热点。近来的研究发现，子痫前期乃至子痫是由于滋养细胞对子宫螺旋动脉浸润过浅、胎盘血管网络形成不良及广泛的血管内皮损伤，导致胎盘缺血、缺氧而引发的，表明该病的发生与滋养细胞、内皮细胞的生长和功能有关，sFlt-l作为血管内皮生长因子(VEGF)和PLGF的直接抑制物，在子痫前期患者中水平升高导致胎盘滋养细胞及血管生长不良，进而导致内皮细胞损伤，并引发一系列的临床症状，目前子痫前期的早期预测抑或是早期发现、早期干预的临床诊治方面仍缺乏有效的预防和治疗手段，对于sFlt-1、PLGF与子痫前期的临床诊断的相关研究已经受到广泛关注。到目前为止，用于血清中可溶性血管内皮生长因子受体1的方法主要有：酶联免疫法（ELISA）。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。该方法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测性激素结合球蛋白的方法具有十分重要的意义。本专利技术采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本专利技术建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本专利技术所提供的磁微粒化学发光方法检测血管内表皮生长因子受体1的试剂盒，采用磁微粒偶联血管内表皮生长因子受体1捕获抗体，吖啶酯标记血管内表皮生长因子受体1检测抗体。试剂盒还包括血管内表皮生长因子受体1校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。作为本专利技术进一步的方案，所述的磁微粒可直接与血管内表皮生长因子受体1捕获抗体偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记血管内表皮生长因子受体1捕获抗体。作为本专利技术进一步的方案，所述磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。作为本专利技术进一步的方案，所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。作为本专利技术进一步的方案，所述的吖啶酯标记的是血管内表皮生长因子受体1检测抗体。作为本专利技术进一步的方案，所述的吖啶酯标记血管内表皮生长因子受体1检测抗体的缓冲液是pH8.0-11.0、浓度为0.01-0.20mol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液。作为本专利技术进一步的方案，所述的捕获抗体与检测抗体均为单克隆抗体。作为本专利技术进一步的方案，所述的校准品是用含有0.5-5.0%BSA的Tris或PBS或HEPES缓冲液为基质，加入血管内表皮生长因子受体1纯品配置而成，校准品形态为液态。作为本专利技术进一步的方案，所述的血管内表皮生长因子受体1校准品溶液浓度分别为：0pg/mL、100.0pg/mL、500.0pg/mL、1000.0pg/mL、2000.0pg/mL、3500.0pg/mL。作为本专利技术进一步的方案，所述的化学发光预激发液A为H2O2和HNO3的混合液，其中H2O2的质量分数为0.01-5.0%，HNO3的浓度为0.01-1.0mol/L。作为本专利技术进一步的方案，所述的化学发光激发液B为TritonX-100和NaOH的混合液，其中TritonX-100的质量分数为0.01-2.0%，NaOH的浓度为0.05-1.0mol/L。作为本专利技术进一步的方案，所述的清洗液为：pH7.0-9.0、浓度为5.0-50.0mmol/L的Tris或HEPES或其它溶液，其中含有质量分数为0.01-0.25%的Tween-20。本专利技术的原理是将抗体-抗原反应的高度特异性与吖啶酯发光的高度灵敏性结合起来，利用吖啶酯捕捉反应产生的光子以检测产物浓度。本专利技术的优点在于采用双抗体夹心法联合磁微粒化学发光技术，测定血管内表皮生长因子受体1含量。吖啶酯作为标记物的直接化学发光具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。具体实施方式本专利技术提供一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加明确、清楚，以下对本专利技术进一步详细说明。本专利技术提供一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，其中，本专利技术所提供的磁微粒化学发光方法检测血管内表皮生长因子受体1的试剂盒，采用磁微粒偶联血管内表皮生长因子受体1捕获抗体，吖啶酯标记血管内表皮生长因子受体1检测抗体。试剂盒还包括血管内表皮生长因子受体1校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。具体地，本专利技术所述的磁颗粒偶联悬浮液由血管内表皮生长因子受体1捕获抗体偶联的磁颗粒和试剂缓冲液组成，其中血管内表皮生长因子受体1捕获抗体的浓度为0.1-2.0mg/mL。具体地，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：包括偶联有血管内表皮生长因子受体1捕获抗体的磁微粒混悬液、吖啶酯标记的血管内表皮生长因子受体1检测抗体、校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

【技术特征摘要】
1.一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：包括偶联有血管内表皮生长因子受体1捕获抗体的磁微粒混悬液、吖啶酯标记的血管内表皮生长因子受体1检测抗体、校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。2.根据权利要求1所述的一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的磁珠的内核为四氧化三铁或三氧化二铁，磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。3.根据权利要求1所述的一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的磁微粒可直接与血管内表皮生长因子受体1捕获抗体偶联，或将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记血管内表皮生长因子受体1捕获抗体。4.根据权利要求1所述的一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。5.根据权利要求1所述的一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：许殊荣，程月萍，李瑶，杜爱铭，徐兵，
申请(专利权)人：太原瑞盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14