一种荧光免疫层析法检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种荧光免疫层析法检测试剂盒及其检测方法，试剂盒包括层析试纸和检测液，层析试纸包括基板，附着于基板上的承载体，承载体包括第一区域、第二区域及第三区域，第一区域、第三区域分别位于第二区域两侧，在第一区域和第二区域相交处形成检测带，第二区域和第三区域相交处形成质控带，层析试纸还包括贴合到承载体第一区域的结合垫和贴合到结合垫的样品垫，及贴合到第三区域的吸水纸；检测液包括单克隆抗体T1、单克隆抗体T2以及稀释液。本发明专利技术的检测试剂盒灵敏度高、稳定性好，而且通用性强，在PCT、cTnI、CK‑MB、BNP等荧光免疫层析法检测中均可应用。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光免疫层析法检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及一种试剂盒，尤其涉及一种荧光免疫层析法检测试剂盒及其检测方法，属于医学免疫学中荧光免疫层析

技术介绍
免疫层析法是近几年来国外兴起的一种建立在层析技术和抗原-抗体特异性免疫反应基础上的一项新型免疫检测技术，其原理是将特异的抗体先固定于条状纤维层析材料的某一区带，当该干燥的条状纤维层析材料的一端浸入测试样品后，由于毛细管作用，待测物在层析条上移动，当移动至固定有抗体的区域时，待测物中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。荧光免疫层析法是基于免疫层析的基础上，采用荧光标记抗体，配套荧光检测仪，实现对检测结果的智能化运算，可减少人工检测的误判，提高检测灵敏度。而且，荧光免疫层析法操作简单、耗时短，只需加样即可智能读取检测结果。因而近年来该技术发展迅速，已经广泛用于小型医疗机构临床检测、分析和诊断。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种灵敏度高、稳定性好且资源利用率高的荧光免疫层析法检测试剂盒。本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种荧光免疫层析法检测试剂盒，包括层析试纸：所述层析试纸包括基板，附着于基板上的承载体，所述承载体包括第一区域、第二区域及第三区域，所述第一区域、第三区域分别位于第二区域两侧，在第一区域和第二区域相交处形成检测带，第二区域和第三区域相交处形成质控带，所述层析试纸还包括贴合到所述承载体第一区域的结合垫和贴合到所述结合垫的样品垫，及贴合到第三区域的吸水纸；检测液：所述检测液包括单克隆抗体T1、单克隆抗体T2以及稀释液。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述承载体包括但不限于硝酸纤维素膜，所述基板包括但不限于PVC板。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述吸水纸自第三区域的边缘向第二区域方向延伸预设长度。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述结合垫自第一区域的边缘向第二区域方向延伸预设长度，所述样品垫自结合垫的边缘向第一区域方向延伸预设长度。所述结合垫包括但不限于聚酯纤维，所述样品垫包括但不限于玻璃纤维膜。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述单克隆抗体T1和单克隆抗体T2为不同种的单克隆抗体。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述单克隆抗体T1和单克隆抗体T2中的任一抗体为生物素交联的单克隆抗体，抗体和生物素的交联可保证抗体的高特异性和高亲和力。生物素需进行活化，活化的生物素表面含有稳定的活性酯，之后加入需要交联的抗体，活性酯可以与抗体上的氨基缩合成为稳定的酰胺键，得到生物素标记的抗体。由于抗体的空间折叠方式和Fc端疏水性强，因此偶联反应绝大多数发生在Fc端，对抗体与抗原的结合影响不大；且生物素为小分子，不会由于空间位阻影响抗原抗体的结合。在生物素与抗体的交联过程中，当生物素表面存在活性基团时，可与抗体直接反应，不需用化学交联剂；反之，则需采用化学交联剂将抗体与生物素相偶联。其中，化学交联剂包括但不限于1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、琥珀酸酐、及戊二醛，进一步优选为零键桥交联剂EDC。EDC是生物耦合中最小的可利用试剂体系，它通过形成一个不含其它原子的键合介导两个分子之间的生物耦合，这其中一个分子中的一个原子共价的附着于另一个分子的一个原子，它们中间不会介入任何交联剂或间隔基。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述结合垫上形成有亲和素交联的示踪物质，所述示踪物质包括但不限于荧光胶乳微球。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用，比抗原与抗体间的亲和力至少高1万倍。并且，二者的结合稳定性好、专一性强，不受试剂浓度、pH环境、蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此，生物素-亲合素系统既可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离与纯化。本专利技术基于生物素与亲和素间的高亲和力，使反应即使在结合垫释放与层析流动中依然有较高的结合效率，以提高检测的灵敏度。本专利技术示踪物质包括但不限于与荧光胶乳微球，荧光胶乳微球进一步选用表面修饰的荧光胶乳微球，如羧基修饰的荧光胶乳微球等。荧光胶乳微球需要进行活化，优选采用EDC/NHS交联法对荧光胶乳微球进行活化，活化的荧光胶乳微球表面含有稳定的活性酯，之后加入需要交联的亲和素，活性酯可以与亲和素上的氨基缩合成为稳定的酰胺键，得到亲和素交联的荧光胶乳微球。由于荧光胶乳微球中含有多个荧光素分子，以放大反应信号，且每个荧光胶乳微球表面可交联有多个亲和素分子，生物素与亲和素间的高亲和力，使本专利技术的反应即使在结合垫释放与层析流动中依然有较高的结合效率，以提高检测的灵敏度。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述检测带上形成有第二抗体T3。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述第二抗体T3为羊抗兔IgG。本专利技术的第二抗体T3为识别未标记有生物素的T1或T2抗体类别的对应多抗，本专利技术未交联生物素的单克隆抗体T1或T2会在第二抗体T3处发生免疫反应。当检测液中含有待检测抗原的时候，形成的亲和素交联的示踪物质-生物素交联的单克隆抗体-待检测抗原-未交联生物素的单克隆抗体复合物结合在检测带上，可被检测仪器识别，信号强度与混合液中的待检测抗原含量成正比。本专利技术T3的包被浓度是远远过量的，不同检测项目中由于使用ID卡不同，对于不同项目可应用不同校曲换算产生的信号强度，得到该应用对象的检测浓度值。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述质控带上形成有第二抗体C1。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述第二抗体C1为羊抗鼠IgG。质控带的最优方案为选择与体系内T1或T2中标记有生物素的类别对应的二抗，因此，本专利技术选择羊抗鼠IgG，可结合未与待检测抗原形成复合物的亲和素交联的示踪物质-生物素交联的单克隆抗体T1或T2。该二抗可捕获检测液中的标记有生物素的鼠抗人抗体，间接结合亲和素标记的荧光胶乳微粒从而获得荧光信号，质控反馈检测液是否为适合该体系的检测液。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述试剂盒还包括由ID卡，所述ID卡中存储有校准曲线，还存储有质控及批号信息。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，所述试剂盒包括但不限于用于荧光免疫层析法检测PCT(降钙素原)、cTnI(心肌肌钙蛋白Ⅰ)、CK-MB(肌酸激酶MB同工酶)或BNP(B型脑钠肽)。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，当试剂盒用于荧光免疫层析法检测PCT检测时，所述单克隆抗体T1为生物素交联的鼠抗人PCT单克隆抗体，单克隆抗体T2为兔抗人PCT单克隆抗体，所述ID卡中存储有PCT校准曲线。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，当试剂盒用于荧光免疫层析法检测cTnI检测时，所述单克隆抗体T1为生物素交联的鼠抗人cTnI单克隆抗体，单克隆抗体T2为兔抗人cTnI单克隆抗体，所述ID卡中存储有cTnI校准曲线。在上述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒中，当试剂盒用于荧光免疫层析法检测CK-MB检测时，所述单克隆抗体T1为生物素本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光免疫层析法检测试剂盒，其特征在于，包括层析试纸：所述层析试纸包括基板，附着于基板上的承载体，所述承载体包括第一区域、第二区域及第三区域，所述第一区域、第三区域分别位于第二区域两侧，在第一区域和第二区域相交处形成检测带，第二区域和第三区域相交处形成质控带，所述层析试纸还包括贴合到所述承载体第一区域的结合垫和贴合到所述结合垫的样品垫，及贴合到第三区域的吸水纸；检测液：所述检测液包括单克隆抗体T1、单克隆抗体T2以及稀释液。

【技术特征摘要】
1.一种荧光免疫层析法检测试剂盒，其特征在于，包括层析试纸：所述层析试纸包括基板，附着于基板上的承载体，所述承载体包括第一区域、第二区域及第三区域，所述第一区域、第三区域分别位于第二区域两侧，在第一区域和第二区域相交处形成检测带，第二区域和第三区域相交处形成质控带，所述层析试纸还包括贴合到所述承载体第一区域的结合垫和贴合到所述结合垫的样品垫，及贴合到第三区域的吸水纸；检测液：所述检测液包括单克隆抗体T1、单克隆抗体T2以及稀释液。2.根据权利要求1所述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体T1和单克隆抗体T2为不同种的单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体T1和单克隆抗体T2中的任一抗体为生物素交联的单克隆抗体。4.根据权利要求1所述的一种荧光免疫层析法检测试剂盒，其特征在于，所述结合垫上形成有亲和素交联的示踪物质。5.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王卫华，周广亮，张闻，陈媛，陈烨，沃赛儿，周海滨，
申请(专利权)人：宁波瑞源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33