一种磁微粒电化学发光试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种磁微粒电化学发光试剂盒，属于医学检测领域。该试剂盒包括：M试剂：链霉亲和素包被的磁珠工作液；R1试剂：包含生物素标记的抗体；R2试剂：包含电化学发光剂标记的抗体；电化学发光底物液和清洗液。试剂盒采用了链霉亲和素

【技术实现步骤摘要】
一种磁微粒电化学发光试剂盒


[0001]本专利技术属于医学检测领域，具体涉及一种磁微粒电化学发光试剂盒。

技术介绍

[0002]降钙素原(Procalcitonin，PCT)是人降钙素(calcitonin，CT)的前体物质，是由116个氨基酸组成的激素原，分子量大约为12.7kD。它由神经内分泌细胞(包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞)表达，经酶切分解为(未成熟)降钙素、羧基端肽和氨基端肽。健康人血中仅含有少量的PCT，感染细菌或细菌性脓毒血症后PCT会明显升高，尤其是重症脓毒血症和感染性休克。PCT与白细胞、白细胞介素
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6(IL
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6)、肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)和C反应蛋白(CRP)这些炎症因子相比，其灵敏度和特异性更高。因此，PCT可作为脓毒血症的预后指标、抗生素选择以及疗效判断的指标，同时也是急性重症胰腺炎及其主要并发症的可靠指标。
[0003]目前临床上用于PCT检测的有多种方法，包括胶体金免疫层析法(GICA)、乳胶增强免疫比浊法(LETIA)、免疫放射分析法(IRMA)、酶联免疫荧光法(ELFA)以及化学发光免疫分析法(CLIA)。这些方法都有其各自的优点，也有各自的短处，如灵敏度不够，检测耗时长，线性范围不够宽，试剂稳定性差等。
[0004]鉴于上述不足之处，人们开发出一种新的检测技术一电化学发光免疫分析法。它是磁分离技术、电化学发光技术，免疫测定技术相结合的产物，能对各种物质进行快速分析，是目前最为先进的标记免疫测定技术。其原理包括电化学和化学发光两个过程，以电化学发光剂三联吡啶钌([Ru(bpy)3]2+
)标记抗原或抗体，以三丙胺(tripropylamine，TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。电化学发光免疫分析法灵敏度高、试剂稳定，可以用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸和药物等的检测分析。
[0005]在申请号为CN111044719A的中国专利申请中公开了一种检测肌联蛋白抗体的电化学发光试剂盒及其制法，该试剂盒包含链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的Titin抗原工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液。该方法提供了一种接近均相的反应体系，具有较高的灵敏度和特异性。但在该技术中，抗体偶联和纯化的方法繁多、操作步骤耗时较长，在这个过程中抗体的结构和性质极易发生改变而引起特异性和抗干扰能力下降。在申请号为CN102721804A的中国专利申请中，虽然提供了一种通用、便捷的基于金磁微粒的电化学发光免疫分析方法，但仍无法有效缓解由于蛋白质结构和性质的改变而导致抗体稳定性和重复性变差的缺陷。
[0006]因此，现有的电化学发光试剂盒仍存在稳定性差、灵敏度不高且抗干扰能力弱等问题。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种磁微粒电化学发光试剂盒，解决现有技术中电化学发光试剂盒稳定性差、灵敏度不高以及抗干扰能力弱等问题。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供一种磁微粒电化学发光试剂盒，包括：M试剂：链霉亲
和素包被的磁珠工作液；R1试剂：包含生物素标记的抗体；R2试剂：包含电化学发光剂标记的抗体；电化学发光底物液和清洗液。所制备试剂盒的发光体系为电化学发光，利用链霉亲和素
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生物素信号放大系统，能有效提高检测的灵敏度与线性范围。将一对抗体分别与生物素和电化学发光剂相结合，生物素和电化学发光剂与抗体相比，分子量极小，其与抗体的结合不会改变抗体的结构和性质，不会影响抗体
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抗原的亲和力，从而使本专利技术所制备的试剂盒具有较高的灵敏度。将该试剂盒应用于全自动电化学发光系统，加样、孵育、清洗、检测等步骤均可由仪器自动化实现，避免人为操作误差、大大提高工作效率、节省人力物力。
[0009]所述抗体包括抗降钙素原抗体，所述电化学发光剂包括三联吡啶钌，所述电化学发光底物包括三丙胺。
[0010]优选地，所述抗降钙素原抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段，所述抗降钙素原抗体来源于鼠、兔或羊。
[0011]优选地，所述试剂盒还包括校准品工作液和质控品工作液。
[0012]更优选地，所述校准品工作液和所述质控品工作液中含有人源或重组的降钙素原。校准品的目的在于绘制出一条校准曲线，质控品的目的在于回测验证校准结果的准确性。因此，任何可以覆盖检测范围的校准品/质控品浓度都可以使用，人源或重组降钙素原的浓度选自但不限于如下一个或更多：0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml。该试剂盒还包括校准品工作液和质控品工作液，工作液由pH为6.0～8.0，浓度为0.01～0.1mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、小牛血清、人血清、马血清中的一种配制而成，所述工作液中含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、0.1～2wt％的酪蛋白酸钠、0.05～0.5wt％的proclin 300或叠氮钠。
[0013]所述M试剂包括：浓度为0.5～1.5mg/ml的链霉亲和素偶联的磁珠和pH为6.5～7.8的磁珠缓冲液；所述磁珠缓冲液中含有0.05～2wt％的牛血清白蛋白、0.05～2wt％的聚氧乙烯山梨糖醇酯、1～10％的聚乙二醇(MW＝800)和0.05～0.5wt％的proclin300或叠氮钠。磁珠缓冲液由浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成。
[0014]优选地，所述链霉亲和素偶联的磁珠粒径为1um～4um，更优选地，所述链霉亲和素偶联的磁珠粒径为1.2um～1.8um。本领域的技术人员应当理解，本专利技术方法中所公开的磁微粒实际上不可能是单个的磁微粒，而是众多磁微粒。因此，磁微粒的粒径在统计学意义上应是一个粒径范围的分布。例如，当提及粒径为2.8um的磁微粒时，并不意味着每个单独微粒的粒径刚好是2.8um，而是允许在2.8um附近(例如
±
20％的误差)的范围之内。因此，在本专利技术的上下文中，均以一个具体的粒径来代表其范围。
[0015]所述R1试剂包括：生物素标记的抗体和pH为6.5～7.8的生物素标记的抗体缓冲液，所述生物素标记的抗体缓冲液包括用于提高试剂盒抗干扰能力和稳定性的共反应剂。
[0016]优选地，所述生物素标记的抗体缓冲液包括0.01～2wt％的牛血清白蛋白、0.01～2wt％的聚氧乙烯山梨糖醇酯、1～100mg/L的异嗜性抗体阻断剂、0.01～0.5wt％的proclin300或叠氮钠、0.02～2wt％的共反应剂。
[0017]优选地，所述的异嗜性抗体阻断剂为HBR
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1、HBR
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3、HBR
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6、HBR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁微粒电化学发光试剂盒，其特征在于，包括：M试剂：链霉亲和素包被的磁珠工作液；R1试剂：包含生物素标记的抗体；R2试剂：包含电化学发光剂标记的抗体；电化学发光底物液和清洗液。2.根据权利要求1所述的磁微粒电化学发光试剂盒，其特征在于，所述抗体包括抗降钙素原抗体，所述电化学发光剂包括三联吡啶钌，所述电化学发光底物包括三丙胺；优选地，所述抗降钙素原抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段，所述抗降钙素原抗体来源于鼠、兔或羊；优选地，所述试剂盒还包括校准品工作液和质控品工作液；更优选地，所述校准品工作液和所述质控品工作液中含有人源或重组的降钙素原。3.根据权利要求1或2所述的磁微粒电化学发光试剂盒，其特征在于，所述M试剂包括：浓度为0.5～1.5mg/ml的链霉亲和素偶联的磁珠和pH为6.5～7.8的磁珠缓冲液；优选地，所述磁珠缓冲液包括0.05～2wt%的牛血清白蛋白、0.05～2wt%的聚氧乙烯山梨糖醇酯、1～10%的聚乙二醇和0.05～0.5wt%的proclin300或叠氮钠；更优选地，所述链霉亲和素偶联的磁珠粒径为1um～4um。4.根据权利要求1或2所述的磁微粒电化学发光试剂盒，其特征在于，所述R1试剂包括：生物素标记的抗体和pH为6.5～7.8的生物素标记的抗体缓冲液，所述生物素标记的抗体缓冲液包括用于提高试剂盒抗干扰能力和稳定性的共反应剂；优选地，所述生物素标记的抗体缓冲液包括0.01～2wt%的牛血清白蛋白、0.01～2wt%的聚氧乙烯山梨糖醇酯、1~100mg/L的异嗜性抗体阻断剂、0.01～0.5wt%的proclin 300或叠氮钠、0.02～2wt%的共反应剂；优选地，所述的异嗜性抗体阻断剂为HBR
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1、HBR
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3、HBR
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6、HBR
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9、HBR
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plus中的一种或多种;更优选地，所述的异嗜性抗体阻断剂为浓度10mg/L的HBR
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plus；优选地，所述共反应剂包括酪蛋白酸钠和聚赖氨酸；更优选地，所述共反应剂包括0.02～1wt%的酪蛋白酸钠和0.1～1wt%的聚赖氨酸。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王天召，陈媛，张闻，
申请(专利权)人：宁波瑞源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：