【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学发光免疫分析，具体涉及一种用于电化学发光检测的链霉亲和素磁珠的预处理方法。
技术介绍
1、电化学发光免疫分析技术以磁珠为固相载体连接特异性的免疫复合物，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，通过电极作用，标记在抗体上的三联吡啶钌发生氧化还原反应，产生特异性的电化学发光信号，最终实现特异性抗原的定量检测。
2、根据磁珠与免疫复合物结合的顺序，电化学发光试剂可以设计成两种形式。第一种形式先完成磁珠与抗体的结合，包被抗体的磁珠作为固相试剂，参与下一步的抗原抗体反应，这也是目前化学发光试剂普遍采用的形式。这种形式的试剂存在免疫反应受空间位阻影响、固相试剂稳定性差两大弊端。另一种形式通过引入生物素-链霉亲和素体系，将传统的固相试剂设计成链霉亲和素磁珠和生物素标记抗体两个独立的组分，检测的第一步由生物素标记的抗体与抗原完成免疫反应，第二步再添加链霉亲和素磁珠捕获免疫复合物，既能提高免疫反应效率，又能提高试剂稳定性。
3、目前市面上已经有很多磁珠厂家提供商品化的链霉亲和素磁珠，但这些链霉亲和素磁珠作为独立的试剂组分用于上述反应体系的电化学发光检测试剂仍有许多问题待解决。首先是磁珠表面未经封闭处理，容易产生非特异性吸附，检测结果易受血红蛋白、胆红素、甘油三酯等内源性干扰物影响；其次电化学发光反应在测量池内进行，电极表面容易有磁珠残留，导致检测背景升高甚至对后面的样本检测造成交叉污染；另外，链霉亲和素磁珠和生物素抗体的结合也受空间位阻的影响，影响反应信号值，最终影响检测灵敏度。
4、专利cn112
5、目前为止，没有经济可行的方案能够同时解决链霉亲和素磁珠应用于电化学发光免疫检测试剂的内源性干扰、测量池交叉污染和灵敏度受限这三个问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于电化学发光免疫分析的封闭剂及其用途，解决链霉亲和素磁珠应用于电化学发光免疫检测试剂的内源性干扰、测量池交叉污染和灵敏度受限的问题。
2、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
3、一种链霉亲和素磁珠的预处理方法，所述预处理方法包括如下步骤：
4、s1：将链霉亲和素磁珠用封闭液清洗，再用封闭液将磁珠稀释后孵育；
5、s2：将封闭后的链霉亲和素磁珠用试剂缓冲液清洗，最终用试剂缓冲液将链霉亲和素磁珠稀释后配成固相试剂。
6、进一步地，所述封闭液组分包括缓冲液、表面活性剂、大分子蛋白混合物和小分子氨基酸。
7、进一步地，所述封闭液组分为50mm tris、0.5％酪蛋白酸钠、0.1％甘氨酸、0.02％.十二烷基氨基丙酸钠，所述封闭液的ph为8.0。
8、进一步地，所述孵育条件为：37℃孵育3小时。
9、进一步地，所述试剂缓冲液包括缓冲液、蛋白、表面活性剂和防腐剂。
10、进一步地，所述试剂缓冲液还包括盐溶液。
11、进一步地，所述盐溶液为氯化钠或者氯化镁。
12、进一步地，所述试剂缓冲液中的缓冲液为10-50mm的磷酸盐缓冲液，所述蛋白为bsa，所述表面活性剂为吐温20，所述防腐剂为pc300，所述试剂缓冲液的ph为6.5-7.5。
13、进一步地，所述步骤s1中链霉亲和素磁珠用封闭液清洗3次；所述步骤s2中将封闭后的链霉亲和素磁珠用试剂缓冲液清洗3次，所述固相试剂为含链霉亲和素磁珠的液体混合物。
14、上述任一种链霉亲和素磁珠的预处理方法在电化学发光检测中的应用。
15、商品化的链霉亲和素磁珠通常都没有经过封闭，或没有针对性地为了应用于电化学发光试剂进行磁珠预处理方法的筛选，导致包被在磁珠表面的链霉亲和素形态异常，使得链霉亲和素和生物素结合的位点一部分被遮挡，从而导致链霉亲和素磁珠和生物素抗体结合的过程受空间位阻影响，降低了试剂灵敏度。另外，链霉亲和素磁珠一般由羧基磁珠或甲苯磺酰基磁珠和链霉亲和素化学偶联得到，羧基或甲苯磺酰基通过烷烃链与磁珠表面聚苯乙烯连接，没有封闭的磁珠表面通常表现出疏水性，导致磁珠表面容易产生非特异性吸附，检测结果易受血红蛋白等内源性干扰物影响，同时非特异性吸附也可能发生在磁珠与电极之间，导致磁珠残留在电极表面造成测量池交叉污染。
16、本专利技术通过在封闭液中同时添加大分子蛋白和小分子氨基酸，使磁珠表面链霉亲和素维持正确的形态，充分暴露出生物素结合的位点。另外，封闭液中还添加了表面活性剂，改变磁珠表面的疏水性，同时表面活性剂还能够起到洗涤剂的作用，去除非特异性吸附，降低内源性干扰物对检测结果的影响，减少电极表面的磁珠残留。为了更好的支撑起磁珠表面的链霉亲和素，使其生物素结合位点完全暴露出来，本专利技术选择了包含多种分子量组成的蛋白混合物，即酪蛋白酸钠。酪蛋白酸钠包含相对分子量75～375kda的多种大分子蛋白，不同分子量的蛋白可以有效填充链霉亲和素磁珠表面的空隙。同时，酪蛋白酸钠还与表面活性剂有类似的性质，能够在一定程度上减少磁珠表面的非特异性吸附。
17、本专利技术的有益效果为：
18、1、本专利技术提供的一种链霉亲和素磁珠的预处理方法，对多种商品化的链霉亲和素磁珠进行改良，通过对商品化的链霉亲和素磁珠进行封闭，改变其表面空间位阻，使表面链霉亲和素维持正确的形态，充分暴露出生物素结合的位点，提高检测信号值，同时也提高了其应用于电化学发光检测试剂的灵敏度。
19、2、本专利技术提供的一种链霉亲和素磁珠的预处理方法，通过对商品化的链霉亲和素磁珠进行封闭处理，改变磁珠表面电荷和疏水性，去除非特异性吸附，消除内源性干扰和测量池交叉污染。
20、3、本专利技术提供的一种链霉亲和素磁珠的预处理方法，操作简便，非常适于在电化学发光检测中推广应用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述预处理方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述封闭液组分包括缓冲液、表面活性剂、大分子蛋白混合物和小分子氨基酸。
3.根据权利要求2所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述封闭液组分为50mM Tris、0.5%酪蛋白酸钠、0.1%甘氨酸和0.02%.十二烷基氨基丙酸钠，所述封闭液的pH为8.0。
4.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述孵育条件为：37℃孵育3小时。
5.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述试剂缓冲液包括缓冲液、蛋白、表面活性剂和防腐剂。
6.根据权利要求5所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述试剂缓冲液还包括盐溶液。
7.根据权利要求6所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述盐溶液为氯化钠或者氯化镁。
8.根据权利要求5所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述试剂缓冲液中的缓冲液为1
9.根据权利要求5所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述步骤S1中链霉亲和素磁珠用封闭液清洗3次；
10.根据权利要求1-9任一项链霉亲和素磁珠的预处理方法在电化学发光检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述预处理方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述封闭液组分包括缓冲液、表面活性剂、大分子蛋白混合物和小分子氨基酸。
3.根据权利要求2所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述封闭液组分为50mm tris、0.5%酪蛋白酸钠、0.1%甘氨酸和0.02%.十二烷基氨基丙酸钠，所述封闭液的ph为8.0。
4.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述孵育条件为：37℃孵育3小时。
5.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的预处理方法，其特征在于，所述试剂缓冲液包括缓冲液、蛋白、表面活性剂和防腐剂。...
【专利技术属性】
技术研发人员：王超儿，陈媛，张闻，燕茹凤，徐启宇，
申请(专利权)人：宁波瑞源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。