埃坡霉素C、其制备方法以及作为细胞抑制剂和植物保护剂的应用技术

本发明专利技术涉及式（Ⅰ）的埃坡霉素Ｃ（Ｒ＝氢）及其制备方法，以及其在制备治疗剂和植物保护剂中的应用，所述治疗剂特别是细胞抑制剂。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及埃坡霉素C、D、E和F，其制备方法，以及在制备治疗性组合物和用于植物保护之组合物中的应用。
技术实现思路
埃坡霉素C和D根据一个实施方案，本专利技术涉及埃坡霉素(C和D)，它们是如下得到的(a)在吸附树脂存在下以本领域已知的方式培养Sorangiumcellulosum DSM 6773，(b)从培养物中取出吸附树脂，并用水/甲醇混合物洗涤，(c)用甲醇淋洗经洗涤的吸附树脂，然后浓缩洗脱液，得到粗提物，(d)用乙酸乙酯提取上述得到的浓缩物，浓缩提取物，并在甲醇和己烷之间分配，(e)浓缩甲醇相，得到残液，该浓缩物在Sephadex柱上进行分步提取，(f)得到包含所用微生物之代谢产物的提取部分，(g)在C18反相柱上用甲醇/水混合物对上述得到的部分进行色谱分离，并顺序得到-包含埃坡霉素A的第一部分，-包含埃坡霉素B的第二部分，-包含第一种其它埃坡霉素的第三部分，-包含第二种其它埃坡霉素的第四部分；然后分离(h1)上述第三部分中的第一种其它埃坡霉素；和(h2)上述第四部分中的第二种其它埃坡霉素。本专利技术还涉及经验式为C26H39NO5S的埃坡霉素(C)，其特征在于具有如表1所示的1H-和13C-NMR光谱。本专利技术还涉及以下式的埃坡霉素C 埃坡霉素CR＝H。本专利技术还涉及经验式为C27H41NO5S的埃坡霉素(D)，其特征在于具有如表1所示的1H-和13C-NMR光谱。本专利技术还涉及以下式的埃坡霉素D 埃坡霉素DR＝CH3。埃坡霉素C和D可用于制备下式1的化合物，其衍生化过程可参考WO-A-97/19086中描述的衍生法。 在上式1中R＝H，C1-4-烷基；R1、R2、R3、R4、R5＝H，C1-6-烷基，C1-6-酰基苄氧基，C1-4-三烷基甲硅烷基，苄基，苯基，C1-6-烷氧基，C6-烷基-、羟基-和卤素-取代的苄基或苯基；R1-R5基团中的两个也可合并形成基团-(CH2)n-(其中n＝1-6)，基团中包含的烷基或酰基是直链或支链基团；Y和Z可相同或不同，分别是氢，卤素，如F、Cl、Br或I，假卤素，如-NCO、-NCS、或-N3，OH，O-(C1-6)-酰基，O-(C1-6)-烷基，O-苄氧基；Y和Z也可是环氧化物中的O原子，但不要求保护埃坡霉素A和B，或者形成C＝C双键中的一个C-C键。因此，12，13-双键可选择性地进行-氢化，例如经催化或用二亚胺，所得到的式1化合物中Y＝Z＝H；或者-环氧化，例如用二甲基二环氧乙烷或过酸，得到的式1化合物中Y与Z＝-O-，或者-转化为二卤化物、二假卤化物或二叠氮化物，得到的式1化合物中Y和Z＝卤素、假卤素或N3。埃坡霉素E和F根据另一个实施方案，本专利技术涉及埃坡霉素A的生物转化体，该生物转化体是如下得到的(a)在吸附树脂存在下按本领域已知的方式培养Sorangiumcellulosum DSM 6773，取出吸附树脂，如果需要，用埃坡霉素A的甲醇溶液处理全部或部分经分离的培养物；(b)用埃坡霉素A处理的培养物进行温育，然后用吸附树脂处理；(c)从培养物中分离吸附树脂，用甲醇淋洗，浓缩洗脱液，得到粗提物；(d)在乙酸乙酯和水之间分配上述粗提物，分离出乙酸乙酯相，并浓缩至油状；(e)在以下条件对上述油状物进行反相色谱分离柱材料Nucleosil 100 C-18 7μm柱尺寸250×16mm洗脱剂甲醇/水＝60∶40流速10ml/min并分离出含有生物转化体的部分，该部分可在254nm处通过UV消光来检测，其Rt值为20min，然后分离所述生物转化体。本专利技术还涉及该类型之埃坡霉素A的生物转化体，其是在步骤(a)中培养物培养3或4或更多天时分离该培养物而得到的。本专利技术还涉及该类型之埃坡霉素A的生物转化体，其是在步骤(b)中进行温育1或2或更多天而得到的。本专利技术还涉及经验式为C26N39NO7S的化合物，其特征在于具有以下1H-NMR光谱(300MHz，CDCl3)δ＝2.38(2-Ha)，2.51(2-Hb)，4.17(3-H)，3.19(6-H)，3.74(7-H)，1.30-1.70(8-H，9-H2，10-H2，11-H2)，2.89(12-H)，3.00(13-H)，1.88(14-Ha)，2.07(14-Hb)，5.40(15-H)，6.57(17-H)，7.08(19-H)，4.85(21-H2)，1.05(22-H3)，1.32(23-H3)，1.17(24-H3)，0.97(25-H3)，2.04(27-H3)。本专利技术还涉及下式的化合物(埃坡霉素E) 埃坡霉素ER＝H。根据再一个实施方案，本专利技术涉及埃坡霉素B的生物转化体，该生物转化体是如下得到的(a)在吸附树脂存在下按本领域已知的方式培养Sorangiumcellulosum DSM 6773，与吸附树脂分离，如果需要，用埃坡霉素B的甲醇溶液处理全部或部分经分离的培养物；(b)用埃坡霉素B处理的培养物进行温育，然后用吸附树脂处理；(c)从培养物中分离吸附树脂，用甲醇淋洗，浓缩洗脱液，得到粗提物；(d)在乙酸乙酯和水之间分配上述粗提物，分出乙酸乙酯相，并浓缩至油状；(e)在以下条件对上述油状物进行反相色谱分离柱材料Nucleosil 100 C-18 7μm柱尺寸250×16mm洗脱剂甲醇/水＝60∶40流速10ml/min并分离出含有生物转化体的部分，该部分可在254nm处通过UV消光来检测，其Rt值为24.5min，然后分离所述生物转化体。本专利技术还涉及该类型之埃坡霉素B的生物转化体，其是在步骤(a)中培养物培养3或4或更多天时分离该培养物而得到的。本专利技术还涉及该类型之埃坡霉素B的生物转化体，其是在步骤(b)中进行温育1或2或更多天而得到的。本专利技术还涉及经验式为C27N41NO7S的化合物，其特征在于具有以下1H-NMR光谱(300MHz，CDCl3)δ＝2.37(2-Ha)，2.52(2-Hb)，4.20(3-H)，3.27(6-H)，3.74(7-H)，1.30-1.70(8-H，9-H2，10-H2，11-H2)，2.78(13-H)，1.91(14-H)，2.06(14-Hb)，5.42(15-H)，6.58(17-H)，7.10(19-H)，4.89(21-H2)，1.05(22-H3)，1.26(23-H3)，1.14(24-H3)，0.98(25-H3)，1.35(26-H3)，2.06(27-H3)。本专利技术还涉及下式的化合物(埃坡霉素F) 埃坡霉素FR＝CH3。制备和组合物根据本专利技术的化合物或埃坡霉素可通过上述方法得到。本专利技术还涉及用于在农业、林业和/或园艺中保护植物的组合物，该组合物由上述埃坡霉素C、D、E和F中的一种或多种组成或者由一种或多种上述埃坡霉素以及一种或多种常规载体和/或稀释剂组成。本专利技术最后涉及治疗性组合物，该组合物由一种或多种上述化合物或者一种或多种上述化合物与一种或多种常规载体和/或稀释剂组成。具体而言，这些组合物具有细胞毒性活性和/或产生免疫抑制作用和/或用于控制恶性肿瘤，它们特别优选用作细胞抑制剂。附图说明图1显示发酵结束时XAD洗脱液的HPLC分析。图2显示在温育48小时后分析，加入埃坡霉素A和B后，发酵液中富含埃坡霉素E和F。图3显示埃坡霉素A本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式的埃坡霉素Ｃ：＊＊＊埃坡霉素Ｃ：Ｒ＝Ｈ。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：汉斯赖兴巴赫，格哈德赫夫勒，克劳斯格特，海因里希施泰因梅茨，
申请(专利权)人：生物技术研究有限公司GBF，
类型：发明
国别省市：DE[德国]