本发明专利技术公开了一种抗生素－秦岭霉素及其制备方法。本发明专利技术的秦岭霉素属于内酰胺类化合物，具有如右图所示的分子结构，其产生菌分类命名为秦岭链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｑｉｎｌｉｎｇｎｅｎｓｉｓ ｓｐ．ｎｏｖ），于２００５年５月３０日保藏于“中国生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏登记号为：ＣＧＭＣＣ ＮＯ．１８３１。本发明专利技术的秦岭霉素的制备方法包括种子培养和液体发酵，发酵液经过滤后大孔吸附树脂吸附，甲醇洗脱，再经硅胶柱层析可得秦岭霉素粗结晶。经制备高效液相色谱纯化可得纯品。本发明专利技术的秦岭霉素具有广谱抗菌性，对多种病原细菌具有强烈的抑制作用，优于对照药剂青霉素。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗生素领域，具体涉及
技术介绍
β-内酰胺类抗生素是临床中常用的抗生素。它们以其抗菌谱广，抗菌效果明显，疗效确定而广泛使用。目前存在的问题是由于长期广泛使用，导致很多病菌，如金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等对现有的β-内酰胺类抗生素产生了明显的抗药性，因此迫切需要研究开发新的抗生素，特别是具有全新分子结构的抗生素。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足之处，提供一种内酰胺类抗生素，它具有全新的分子结构，而且对多种病原细菌具有很高的抑制活性。本专利技术的另一个目的是提供一种内酰胺类抗生素的制备方法。本专利技术的技术方案如下一种内酰胺类抗生素，命名为秦岭霉素，具有如下的分子结构 该抗生素的制备方法，包括下列步骤1.发酵(1)发酵菌种发酵菌种的分类命名为秦岭链霉菌(Streptomyces qinlingnensis sp.nov)，于2005年5月30日保藏于“中国生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏登记号为CGMCC NO.1381。(2)斜面培养采用高氏一号培养基(可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH值7.2～7.4)于1×105Pa下灭菌30min，接菌后在28～32℃下培养4d；(3)种子培养 培养基(葡萄糖5～10g，可溶性淀粉5～10g，牛肉膏5～10g，蛋白胨10～18g，氯化钠5～8g，蒸馏水1000ml，pH值7.2)，用250ml的三角瓶每瓶分装100ml，然后用1ml无菌水将斜面的秦岭链霉菌孢子洗下并制成孢子悬浮液，使其浓度为1×106～1×107个/ml。每瓶加1ml孢子悬浮液，置于摇床上28～32℃培养24～36h；(4)发酵 采用液体摇瓶发酵，培养基(小米10～30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15～30g，碳酸钙2～15g，氯化钠5～12g，蛋白胨5～15g，pH值7.2～7.4)于1×105Pa下灭菌30min，分装于250ml三角瓶，每瓶20～100ml。接种量10％(V/V)，摇床转速150～240r/min，28～32℃振荡培养4～5d。2发酵液处理(1)发酵液经100～200目筛网过滤后，用HPD-600大孔吸附树脂吸附，甲醇洗脱；(2)将甲醇洗脱液浓缩，进行硅胶柱层析以三氯甲烷∶甲醇＝9∶1、8∶2、7∶3、6∶4和纯甲醇五种洗脱液进行梯度洗脱，收集三氯甲烷∶甲醇＝8∶2的馏分，浓缩后放置过夜，析出一种β-内酰胺抗生素的粗结晶；(3)将上述粗结晶用制备高效液相色谱纯化，得到本专利技术的β-内酰胺抗生素的纯品。与现有技术相比，本专利技术具有下述优点1本专利技术的抗生素是国内外未报道过的新化合物，而且具有全新的分子结构。现有的β-内酰胺类抗生素包括青霉素类和头孢霉素类，前者是一个四元杂环并联一个五元杂环，后者是一个四元杂环并联一个六元杂环，二者在杂环的同一位置都有一个羧基，而本专利技术的抗生素是由一个四元环并联一个七元环组成，不含羧基，也不含其它取代基。2本专利技术的抗生素具有广谱抗菌性，抗菌活性明显优于青霉素。3本专利技术的抗生素，其生产原料廉价易得，发酵及后处理工艺相对简单。附图说明图1秦岭霉素紫外光谱2秦岭霉素红外光谱3秦岭霉素高分辨质谱4秦岭霉素1H NMR谱5秦岭霉素13C NMR谱6秦岭霉素gCOSY谱7秦岭霉素gHSQC谱8秦岭霉素Ghmbc谱图具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术作详细说明。实施例1化合物制备1发酵(1)种子培养 培养基(葡萄糖8g，可溶性淀粉8g，牛肉膏6g，蛋白胨15g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml，pH值7.2)，用250ml的三角瓶每瓶分装100ml，然后用1ml无菌水将斜面的秦岭链霉菌孢子洗下并制成孢子悬浮液，使其浓度为1×106～1×107个/ml，每瓶加1ml孢子悬浮液，置于摇床上30±1℃培养24h；(2)发酵 采用液体摇瓶发酵，培养基(小米10g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15g，碳酸钙2g，氯化钠5g，蛋白胨5g，pH值7.2)于1×105Pa下灭菌30min，分装于250ml三角瓶，每瓶50ml。接种量10％(V/V)，摇床转速210r/min，30±1℃振荡培养4d。2化合物的分离50L发酵液经200目筛网过滤，用5kg HPD-600大孔吸附树脂静态吸附3h，将吸附饱和的大孔吸附树脂装入15cm(内径)×200cm(高)的玻璃柱中，用甲醇洗脱，流速为50ml·min-1，洗脱总体积约20L；浓缩甲醇洗脱液，得到褐色油状物约50g。将所得褐色油状物上硅胶柱(粒径200～300目)进行层析，以三氯甲烷∶甲醇＝9∶1、8∶2、7∶3、6∶4和纯甲醇五种洗脱液进行梯度洗脱，收集三氯甲烷∶甲醇＝8∶2的馏分，浓缩后放置过夜，析出一种β-内酰胺抗生素的粗结晶1.65g；将该粗结晶以制备高效液相色谱纯化，得到本专利技术的β-内酰胺抗生素纯品0.546g，其中制备液相色谱条件如下色谱柱Hypersil C18，15μm，6cm(内径)×300cm(高)；流动相甲醇+水＝75+25(V/V)；流速60ml/min；检测波长230nm。3结构鉴定化合物1物态白色结晶熔点196℃；元素分析N 17.91％，C 54.78％，H 5.55％，O 21.76％；分子量154.0741；分子式C7H10N2O2；(1)化合物的UVmax为222nm，说明分子中存在内酯或内酰胺结构；从红外光谱图中可观察到内酰胺的特征吸收峰1636.38cm-1，提示化合物为一内酰胺。(2)从FAB-MS谱图上可观测到m/z 155+，309+峰，说明化合物的分子量应为154。高分辨质谱测得m/z 155+为154.1219(计算值为154.0741)，说明其分子式为C7H10N2O2，不饱和度为4。(3)化合物的1H NMR显示存在9个质子(CD3OD，400MHz，δ4.24(m，1H)，4.10(dd，J＝16.8，3Hz，1H)，3.73(d，J＝16.8Hz，1H)，3.53(m，2H)，2.30(m，1H)，1.89-2.05(m，3H))，表明还有一个活泼质子存在，因使用氘代甲醇为溶剂而未观测到。13C NMR显示了7条谱线(100MHz，δ171.9，166.4，59.8，47.0，46.3，29.4，23.3)，与分子式吻合，DEPT表明171.9和166.4是两个季碳，它们是酯或酰胺的羰基，59.8的碳是一个叔碳，其余4个均为仲碳，这样共有9个与碳相连的质子，与1HNMR结果一致。GCOSY显示4.24的质子与4.10的质子相关，而4.10的质子又与3.73的质子相关，而在gHSQC谱中4.10的质子和3.73的质子同时与47.0的碳原子相关，说明它们是两个同碳质子。4.24的质子还与2.30和2.00处的质子相关，而他们又同时与29.4的碳原子相关，说明它们也是两个同碳质子。在gHSQC谱中，4.24的质子与59.8的碳原子相关，3.53的质子与46.3的碳原子相关，而1.89-2.05处的另两个质子与23.3的碳原子相关，且3.53的质子与本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种内酰胺类抗生素，其特征在于该抗生素具有如下的分子结构：＊＊＊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姬志勤，吴文君，龙建友，师宝君，祁志军，胡兆农，
申请(专利权)人：西北农林科技大学农药研究所，
类型：发明
国别省市：61[]
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