一种白细胞介素２（ＩＬ－２）－白细胞介素２３（ＩＬ－２３）的融合蛋白，通过ＲＴ－ＰＣＲ合成ＩＬ－２与ＩＬ－２３ ｃＤＮＡ，经过纯化扩增酶切，将两者连接重组至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）。该重组质粒的表达产物为ＩＬ－２－ＩＬ－２３融合蛋白。它较ＩＬ－２、ＩＬ－２３单因子或双因子联合作用有更好的抗肿瘤效果，且制备方法简单。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种白细胞介素2 (IL-2)—白细胞介素23(IL-23)的融合蛋白，提供一种生 物高技术来制备白细胞介素2—白细胞介素23融合蛋白，本专利技术的另一目的是提供一种白细 胞介素2—白细胞介素23融合蛋白的高效抗肿瘤药物。
技术介绍
以往研究表明IL-2是由T细胞分泌的一种细胞因子，具有广泛的免疫活性，临床应用 可使30%的淋巴瘤、肾癌、黑色素瘤病员#效。对结肠癌及非何杰金氏淋巴病也有较好疗效， 而且能够增强免疫力。IL-23是由p19和IL-12的p40亚单位通过二硫键相连组成的异二聚 体。由活化的树突状细胞(DC)和巨噬细胞(Mcp)产生，它能促进DC对肿瘤抗原肽的提呈， 能影响T细胞的增殖，并且除了直接作用于T细胞外，IL-23还能通过DC来活化和调节T细 胞依赖的免疫应答。最重要的是，IL-23具有较强的抗肿瘤作用，IL-23因其所诱导的IFN， 的产生较少及对APC的激活作用将有望成为肿瘤治疗中一种新的、更为安全的选择。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种白细胞介素2 (IL-2) —白细胞介素23(IL-23)的融合蛋白，提供 一种制备白细胞介素2—白细胞介素23融合蛋白的生物技术。本专利技术的另一目的是提供一种 白细胞介素2—白细胞介素23融合蛋白的高效抗肿瘤药物。本专利技术的目的是通过下述方法实现的我们以IL-2功能区特异性的上下游引物，通过 RT-PCR合成包含信号肽序列及Bamffl-EcoRI两个酶切位点的IL-2 cDNA，同理以1L-23功能 区特异性的上下游引物合成无信号肽序列的包含Xhol-Xbal两个酶切位点及终止密码子TGA 的IL-23 cDNA。经过纯化酶切，连接重组至表达载体pcDNA3.1(+)。将该 pcDNA3.1(+)/IL-2-IL-23重组质粒转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO)进行表达，表达产物即为 IL-2-IL-23融合蛋白。IL-2-BL-23融合蛋白较IL-2、 IL-23单因子或双因子联合都有更多的生物学效应。具体实施例方式以下对本专利技术作详细说明一、 引物合成利用Sequce程序通过计算机分析确定转译的最佳起始区域，使其具有最小自由能，最佳碱基排列，确保两个引物之间，引物与模板之间具有 最少的配对以避免扩增不必要的序列。在IL-2上游引物中导入Bamffl酶切位 点，接着为起始密码子ATG及信号肽序列；在下游引物中导入EcoRI酶切位 点。在IL-23上游引物中导入XhoI酶切位点;下游引物中导入终止密码子TGA 及XbaI酶切位点。二、 基因克隆通过RT-PCR合成包含信号肽序列及Bamffl-EcoRJ两个酶切位点的 IL-2 cDNA，同理以IL-23功能区特异性的上下游引物合成无信号肽序列的包 含Xhol-Xbal两个酶切位点及终止密码子TGA的IL-23 cDNA，经过纯化，再 以T-A克隆进行扩增，最后将该IL-2 cDNA与IL-23 cDNA分别克隆入 pcDNA3.1 (+)表达载体，以BamHI-EcoRI和Xhol-Xbal双酶切鉴定及测序分析。三、 真核细胞表达将上述阳性克隆转染CHO细胞表达，收集表达上清，以ELISA 检测IL-2与IL-23的表达。四、 纯化及活性鉴定对表达上清进行蛋白纯化，纯化后的蛋白进行淋巴细胞增殖试验，证实该表达产物可明显增强淋巴细胞增殖，且比单独的IL-2与IL-23效果更为明显。该专利技术的优点是获得的IL-2-IL-23融合蛋白抗肿瘤效果比单独的IL-2和IL-23 好，且制备方法简单。权利要求1、一种白细胞介素2—白细胞介素23(IL-2-IL-23)的融合蛋白，其特征在于由白细胞介素2与白细胞介素23多肽序列组成。2、 如权利要求l所述的融合蛋白，其特征在于IL-2cDNA含起始密码子、信号肽序列和 双酶切位点。3、 如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于IL>23 cDNA含双酶切位点及终止密码子。4、 一种白细胞介素2—白细胞介素23融合蛋白的制备方法，其特征在于IL-2、 IL-23 基因的克隆；融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定。5、 如权利要求l所述的融合蛋白，其特征在于可应用于免疫调节及抗肿瘤药剂。全文摘要一种白细胞介素2(IL-2)-白细胞介素23(IL-23)的融合蛋白，通过RT-PCR合成IL-2与IL-23 cDNA，经过纯化扩增酶切，将两者连接重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)。该重组质粒的表达产物为IL-2-IL-23融合蛋白。它较IL-2、IL-23单因子或双因子联合作用有更好的抗肿瘤效果，且制备方法简单。文档编号C07K19/00GK101469030SQ200710173469公开日2009年7月1日 申请日期2007年12月27日 优先权日2007年12月27日专利技术者峰 李 申请人:上海汇康生物科技有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种白细胞介素２－白细胞介素２３（ＩＬ－２－ＩＬ－２３）的融合蛋白，其特征在于由白细胞介素２与白细胞介素２３多肽序列组成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李峰，
申请(专利权)人：上海汇康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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