A method of dual detection of small molecules and proteins based on magnetic nanoassembly, which belongs to the field of biosensor detection. The invention uses biotin and streptavidin interaction of the streptavidin and biotin were modified on the surface of the gold nanoparticles and gold nanoparticles, gold nanoparticles and surface modified molecular beacon, the existence of different content of target molecules under the conditions with the differences of content of assembling magnetic separation and free gold nanoparticles the resulting supernatant and precipitate the Raman signal changes, according to the relationship between the target concentration and the Raman signal intensity changes, can be realized respectively by biotin and streptavidin detection. The invention realizes the detection of small molecules and proteins in the same system, and has high detection sensitivity. The actual sample addition and recovery results are good, which provides a good theoretical basis for the establishment of double detection system for small molecules and proteins.
【技术实现步骤摘要】
一种基于磁性纳米组装体双重检测小分子和蛋白质的方法
本专利技术属于生物传感器检测领域,具体涉及一种基于磁性纳米组装体双重检测小分子和蛋白质的方法。
技术介绍
在生物医学研究和临床应用领域研究小分子和蛋白质的相互作用非常重要,例如生理上的小分子和蛋白质的相互作用、小分子药物和相应的蛋白质的相互作用等等,同时与信号转导、生理代谢相关的蛋白质在许多情形下通过和小分子相互作用实现相应的功能,因此对小分子和蛋白质进行检测在药物分析和临床诊断领域发挥着重要的作用。小分子和蛋白质的理化性质不同,适用的检测体系不同,一般需要单独的检测体系才能实现两种物质的分别检测。目前,小分子的检测方法主要包括高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)、气相色谱(GC)、气相色谱-质谱分析法(GC-MS)等,蛋白质的检测方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质印记(WB)、比色法、荧光法等。因此,为了提高检测效率、降低检测成本,开发在同一体系中检测小分子和蛋白质的方法显得尤为重要。拉曼光谱属于分子振动光谱,可以反映分子的特征结构,但是拉曼散射效应是个非常弱的过程,随着科学研究的进一步发展,人们发现拉曼强度可以在粗糙的金属表面实现增强,引起了科学工作者广泛的研究兴趣。除了用于分析分子的结构之外,表面增强拉曼光谱也成为了一种快速灵敏的检测技术,尤其是以贵金属纳米材料为基底,拉曼信号强度提高多个数量级,能够实现常规方法不能检测到的信号,甚至能够达到单分子检测水平,从而使得贵金属纳米粒子单体或者组装体在拉曼光谱中的研究范围不断扩大。
技术实现思路
要解决的技术问题:现有的检测小分子和蛋白质的方 ...
【技术保护点】
一种基于磁性纳米组装体双重检测小分子和蛋白质的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)磁核金壳复合纳米粒子的合成称取新合成的磁纳米粒子粉末10mg,加入100mL超纯水超声分散10min,然后在搅拌的状态下加入5mL质量浓度为0.4%的氯金酸,搅拌均匀后在超声的状态下加入3mL质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液,继续超声直到溶液颜色由浅黄色逐渐变成黑色反应终止,在外加磁场的作用下进行磁分离,去除上清,并用超纯水将沉淀物利用磁分离清洗3次,从而得到金壳包裹的磁性复合物,金壳的厚度为5nm;(2)金纳米粒子的合成金纳米粒子通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法合成,并通过紫外吸收光谱进行紫外信号的表征,通过透射电子显微镜进行表面形态和粒径的表征;(3)金纳米粒子修饰信标分子将步骤(2)合成的金纳米粒子在8000r/min的条件下离心5min,去除上清用pH7.2的0.01M PBS缓冲液将金纳米粒子进行重悬,向金纳米粒子中加入信标分子,使得其终浓度为5~10μM,在室温下孵育4h,然后在8000r/min的条件下离心5min去除上清,再用PBS缓冲液将其重悬;(4)金磁复合纳米粒子修饰链霉亲和素取5mL步骤 ...
【技术特征摘要】
1.一种基于磁性纳米组装体双重检测小分子和蛋白质的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)磁核金壳复合纳米粒子的合成称取新合成的磁纳米粒子粉末10mg,加入100mL超纯水超声分散10min,然后在搅拌的状态下加入5mL质量浓度为0.4%的氯金酸,搅拌均匀后在超声的状态下加入3mL质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液,继续超声直到溶液颜色由浅黄色逐渐变成黑色反应终止,在外加磁场的作用下进行磁分离,去除上清,并用超纯水将沉淀物利用磁分离清洗3次,从而得到金壳包裹的磁性复合物,金壳的厚度为5nm;(2)金纳米粒子的合成金纳米粒子通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法合成,并通过紫外吸收光谱进行紫外信号的表征,通过透射电子显微镜进行表面形态和粒径的表征;(3)金纳米粒子修饰信标分子将步骤(2)合成的金纳米粒子在8000r/min的条件下离心5min,去除上清用pH7.2的0.01MPBS缓冲液将金纳米粒子进行重悬,向金纳米粒子中加入信标分子,使得其终浓度为5~10μM,在室温下孵育4h,然后在8000r/min的条件下离心5min去除上清,再用PBS缓冲液将其重悬;(4)金磁复合纳米粒子修饰链霉亲和素取5mL步骤(1)合成的金磁复合纳米粒子在外加磁场的作用下吸附,去除上清用pH7.2的0.01MPBS缓冲液将纳米粒子进行重悬,并用0.1MK2CO3溶液将pH调整到8.6,然后加入500μL浓度为1mg/mL的链霉亲和素,在缓慢振荡的条件下反应30min,然后加入500μLBSA溶液使得BSA的终浓度为1%,再在振荡的条件下反应40min,通过外加磁场去除上清,并用pH7.2的0.01MPBS缓冲液将纳米粒子进行重悬,得到金磁复合纳米粒子修饰的链霉亲和素;(5)金纳米粒子修饰生物素取2mL步骤(3)制备的金纳米粒子,测得其终浓度为20nM,向其中加入生物素修饰的DNA分子,使得DNA的终浓度为40nM,将其在室温下孵育6h后,在8000r/min的条件下离心5min,得到金纳米粒子修饰的生物素;生物素修饰的DNA:5’-SH-AAAAA-Biotin-3’;(6)磁性纳米组装体的制备以及小分子蛋白质的双重检测将40μL步骤(4)制备的纳米粒子和50μL步骤(5)制备的纳米粒子混合,分别...
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