The present invention discloses the isolation of gram negative pathogens, which provides the basis for subsequent studies of gram negative pathogens and relates to the field of biotechnology. The method includes magnetic nanoparticles with streptavidin conjugated concanavalin A, and long chain biotin coupling, biotinylated concanavalin A conjugated streptavidin coated magnetic nanoparticles, and long chain streptavidin biotin mediated concanavalin A combined with magnetic nano composite particles capture gram-negative pathogenic bacteria the samples in the liquid under magnetic field will capture the gram negative pathogens and liquid samples were isolated and resuspended. Gram negative bacteria capture magnetic separation can be directly carried out further analysis, compared with the traditional bacterial magnetic separation method, the method can carry out the magnetic separation of gram negative pathogenic bacteria in the blood and the food matrix, not only improves the separation efficiency of gram negative pathogenic bacteria in the samples, but also reduce the cost.
【技术实现步骤摘要】
败血症中革兰氏阴性病原菌分离的新方法
本专利技术涉及生物
,具体是涉及基于磁性纳米粒子的革兰氏阴性病原菌分离方法。
技术介绍
败血症是严重的全身性感染疾病,病情复杂多变,病死率高。败血症患者血液中的病原菌主要包括革兰氏阴性病原菌和革兰氏阴病原菌。在治疗过程中,革兰氏阴性病原菌和革兰氏阴性病原菌细胞壁结构差别较大,选用药物也有一定差别。传统的鉴别败血症患者血液中病原菌种类的方法主要是血平板培养法,但该方法周期长,大概需要5-7天,在这一过程中很可能会使病人的病情进一步加重。另外,如若不对血液中病原菌进行分类,就只能使用广谱的抗菌素。近年来,随着人类广谱和超广谱抗生素的大量生产和应用,导致多重耐药菌、条件病原菌引起的各类感染增加,抗生素的选择范围缩小。目前全球细菌耐药形势空前严峻,细菌耐药已被列为威胁人类健康的三大难题之一。同时,广谱和超广谱抗菌素还会对肠道中的益生菌产生抑制作用,从而对健康产生一定的危害。因此,为了提高对败血症患者的治疗效果,在治疗前对患者血液中的病原菌种类进行鉴别,能够指导临床更加科学合理使用抗菌药物。因此,建立一种高效、快速检测革兰氏阴性病原菌的新方法显得尤为迫切。鉴于需要建立一种高效,快速的检测方法,基于功能化的磁性纳米粒子的分离技术在病原菌监测中得到了迅速发展。临床上应用的传统鉴别革兰氏阴性病原菌和革兰氏阴性病原菌的方法,主要是血平板培养法。该方法不但周期长,而且耗费大量的人力物力。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷,本专利技术的目的是提供一种低梯度磁场下,简便、快捷,高效的磁富集分离患者血液中的革兰氏阴性病原菌的方法。革兰氏阴性病 ...
【技术保护点】
革兰氏阴性病原菌的快速分离方法,其特征在于包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁性纳米粒子(10mg/mL),加入到8mL pH=7.4的无菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,对磁性纳米粒子进行洗涤,重复3次,将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于10mL无菌的PBS溶液中;(2)5.8mg EDC,溶于290μL无菌的PBS中,6.5mg NHSS,溶于325μL无菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中,活化1h;(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL无菌的PBS溶液中;(4)称取链酶亲和素0.5mg,溶解到100μL灭菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁珠溶液中,反应2h,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中,加入0.3%BSA封闭45min,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中,得到链酶亲和素修饰的磁珠;(5)称取10mg刀豆蛋白A,溶于400μL灭菌的PBS溶液中,1mg长链生物素,溶于100μL灭菌的PBS溶液中,然后将溶解后的长链生物素加入到溶解的刀豆蛋白A中,孵育2h,用3 ...
【技术特征摘要】
1.革兰氏阴性病原菌的快速分离方法,其特征在于包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁性纳米粒子(10mg/mL),加入到8mLpH=7.4的无菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,对磁性纳米粒子进行洗涤,重复3次,将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于10mL无菌的PBS溶液中;(2)5.8mgEDC,溶于290μL无菌的PBS中,6.5mgNHSS,溶于325μL无菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中,活化1h;(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL无菌的PBS溶液中;(4)称取链酶亲和素0.5mg,溶解到100μL灭菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁珠溶液中,反应2h,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中,加入0.3%BSA封闭45min,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中,得到链酶亲和素修饰的磁珠;(5)称取10mg刀豆蛋白A,溶于400μL灭菌的PBS溶液中,1mg长链生物素,溶于100...
【专利技术属性】
技术研发人员:许恒毅,杨国泰,刘洋,孔蕴源,孟祥玉,徐天雄,黄楠,
申请(专利权)人:南昌大学,
类型:发明
国别省市:江西,36
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