脊尾白虾的雌核发育诱导方法技术

本发明专利技术涉及一种脊尾白虾的雌核发育诱导方法，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取1ml卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；所述电刺激缓冲液为甘露醇缓冲液，具体成分为：0.05 mmol/L CaCl

Method for inducing female nucleus of shrimp tail white shrimp

The invention relates to a carincauda gynogenesis induction method, using the method of electrical stimulation, electrical stimulation before the egg into the electrical stimulation buffer balance 2min, adjust the electric pulse parameters, with Straw draw 1ml eggs into electric cup, can carry out electrical stimulation treatment; the stimulation of buffer the mannitol buffer, specific components: 0.05 mmol/L CaCl

【技术实现步骤摘要】
脊尾白虾的雌核发育诱导方法
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种脊尾白虾的雌核发育诱导方法。
技术介绍
人工诱导雌核发育有利于快速建立纯系，因此对于遗传育种及基础生物学的研究具有重要意义。在海产经济贝类方面，该领域的研究相对滞后，目前仅在近十种海洋经济贝类中进行了人工诱导雌核发育的研究。这些研究主要是通过使用各种辐射或化学方法灭活精子，从而诱导卵子的雌核发育。研究中常用的同源精子灭活法难以排除外源精子基因组的干扰，所以近年来有学者尝试采用异源精子诱导来消除这种干扰，如在栉孔扇贝和盘鲍等贝类中的研究。然而，异源精子诱导依赖于物种的特异性，且受多种环境因素的影响，如精卵的不同成熟度等，另外卵子的激动也往往不同步，而且如果灭活不充分的话，其实仍有精子污染的问题，因此限制了其在雌核发育中的应用。与传统的同源或异源精子诱导法相比，电刺激诱导法在整个过程中不需要精子的参与，能彻底排除外源精子基因组的干扰，是理想的诱导方法。该方法已在兔、猪、鼠和牛等哺乳动物中被广泛应用并取得了很大的成功。其机制是采用电刺激的方式，使卵母细胞膜上形成可逆微孔，缓冲液中的钙离子顺细胞内外的浓度梯度而进入卵胞质，引发钙库释放钙离子或者胞质钙离子的迅速转移，从而模拟正常受精时钙离子规律性的波动现象启动卵子发育。但迄今为止，该方法在海洋生物雌核发育研究中，尚无报道。本研究首次尝试采用电刺激法诱导脊尾白虾雌核发育，对其诱导参数及雌核发育过程中的细胞学机制进行初步探索，旨在建立电刺激诱导脊尾白虾雌核发育的技术方法。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术旨在建立电刺激诱导脊尾白虾雌核发育的技术方法。一种脊尾白虾的雌核发育诱导方法，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取1ml卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；所述电刺激缓冲液为甘露醇缓冲液，具体成分为：0.05mmol/LCaCl2，0.1mmol/LMgCl2，0.5mmol/LHepes，1%BSA，0.27mmol/L甘露醇；所述电脉冲仪参数为场强1.1kv/cm，电容3µF，2次电脉冲。所述电刺激时的卵子密度为4.5×104个/ml。电刺激后卵子及胚胎的培养方法为：经电刺激后的卵子被放入直径15cm培养皿中，用高温蒸煮的过滤海水培养，水温保持20℃，培养密度为每个培养皿中每升约2×105个卵子；培养初期每半小时轻轻搅动海水一次，以后每3~4h搅动一次，以促进其孵化。电刺激处理后2小时统计各组的卵裂率，24小时统计胚胎存活率；卵裂率或雌核发育诱导率=发生卵裂和排放极体的卵数/观察总卵数×100%；胚胎存活率=上浮的原肠胚数量/发生卵裂的总卵数×100%。本专利技术的方法简单有效，经电刺激诱导后，脊尾白虾的卵裂率可达到28%以上，胚胎存活率可达到98%以上。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。亲本的暂养与精卵的收集脊尾白虾取回后暂养于14℃循环海水中，雌雄个体分开暂养。投喂饵料。暂养期间每天升温1℃，至16~17℃恒温待产。采用光照刺激法获得卵子，待卵子产出后，先用300目筛绢过滤卵子，然后用500目的筛绢过滤收集卵子，稀释后显微镜下观察定量卵子的密度。根据实验需要调整卵子的密度。脊尾白虾卵子的电刺激处理卵子雌核发育的诱导：采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取1ml卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理。所述电刺激缓冲液为甘露醇缓冲液，具体成分为：0.05mmol/LCaCl2，0.1mmol/LMgCl2，0.5mmol/LHepes，1%BSA，0.27mmol/L甘露醇。所述电脉冲仪参数为场强1.1kv/cm，电容3µF，2次电脉冲。所述电刺激时的卵子密度为4.5×104个/ml。电刺激后卵子及胚胎的培养经电刺激后的卵子被放入直径15cm培养皿中，用高温蒸煮的过滤海水培养，水温保持20℃，培养密度为每个培养皿中每升约2×105个卵子；培养初期每半小时轻轻搅动海水一次，以后每3~4h搅动一次，以促进其孵化。电刺激处理后2小时统计各组的卵裂率，24小时统计胚胎存活率。卵裂率或雌核发育诱导率=发生卵裂和排放极体的卵数/观察总卵数×100%胚胎存活率=上浮的原肠胚数量/发生卵裂的总卵数×100%经统计，上述电刺激诱导后，脊尾白虾的卵裂率为28.45%，胚胎存活率为98.41%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脊尾白虾的雌核发育诱导方法，其特征在于，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡 2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取 1ml 卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；所述电刺激缓冲液为甘露醇缓冲液，具体成分为：0.05 mmol/L CaCl

【技术特征摘要】
1.一种脊尾白虾的雌核发育诱导方法，其特征在于，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取1ml卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；所述电刺激缓冲液为甘露醇缓冲液，具体成分为：0.05mmol/LCaCl2，0.1mmol/LMgCl2，0.5mmol/LHepes，1%BSA，0.27mmol/L甘露醇；所述电脉冲仪参数为场强1.1kv/cm，电容3µF，2次电脉冲。2.根据权利要求1所述的脊尾白虾的雌核发育诱导方法，其特征在于，所述电刺激时的卵子密度为4.5×104个/ml。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37