一种用于转基因玉米多重检测的微滴PCR偶联DGGE分析方法技术

一种用于转基因玉米多重检测的微滴PCR偶联DGGE分析方法，首先，针对待测样品分别设计PCR特异性引物对，进行微滴PCR扩增，扩增产物经纯化后进行DGGE电泳，并进行SYBRGreen染色，在紫外光下显影观察，来检测转基因玉米基因组的多重DNA分子。该方法可以实现高通量分析多个DNA目标核酸分子，且灵敏度高，内标基因的稳定性也很好。因此，本发明专利技术利用微滴PCR偶联DGGE技术实现了生物基因定性、高通量检测。

【技术实现步骤摘要】
一种用于转基因玉米多重检测的微滴PCR偶联DGGE分析方法
本专利技术属于核酸分子检测
，具体涉及一种用于转基因玉米多重检测的微滴聚合酶链式反应(PCR)偶联变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析方法。
技术介绍
微滴PCR(microdroplet-basedPCR)就是PCR技术和乳化技术相结合的最先进的PCR技术，是传统PCR技术的升级换代技术，即将油相和PCR反应体系的水相混合在一起，利用“油包水”的乳化技术将PCR反应体系分隔成109个独立的微滴，每个微滴可以含有一个模板和一对引物，然后单独进行反应，提高了目标扩增的通量，同时减少了宝贵的试剂和样品的消耗，避免了普通多重PCR不同引物和模板间的相互干扰，产生扩增效率的不一致和非特异性产物的出现。变性梯度凝胶电泳又称DGGE，该方法在20世纪80年代初由勒曼等专利技术，起初主要用于医学上。DGGE技术是在普通的聚丙烯酰胺凝胶基础上，加入变性剂(尿素和去离子甲酰胺)梯度，使得长度相同但序列组成成分不同的DNA片段分离，形成易于观察的清晰条带。每一段DNA都是由特定序列的碱基组成，这种特定序列组成决定了双链DNA的解链行为和解链区本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于转基因玉米定性、高通量多重检测的引物组，该引物组包括转基因玉米BT176、TC1507和MON863的特异性引物对，具体引物序列如下：玉米品系 引物序列(5’to3’)BT176： 正向引物：CGCCCGCCGCCGCGGCGGCGGGGCGGGGGCGTGGGTTTCTGGCAGCTGGACT；反向引物：TGGGCGTGGTATCGACTTTATAG；MON863： 正向引物：CGCCCGCCGCCGCGGCGGCGGGGCGGGGGCTTGGTTCGGAGAGCACTTGTTGG；反向引物：ACTGTCGGCAGAGGCATCTTGAA；TC1507： 正向引物：CGCCCGCCG...

【技术特征摘要】
1.一种用于转基因玉米定性、高通量多重检测的引物组，该引物组包括转基因玉米BT176、TC1507和MON863的特异性引物对，具体引物序列如下：玉米品系引物序列(5’to3’)BT176：正向引物：CGCCCGCCGCCGCGGCGGCGGGGCGGGGGCGTGGGTTTCTGGCAGCTGGACT；反向引物：TGGGCGTGGTATCGACTTTATAG；MON863：正向引物：CGCCCGCCGCCGCGGCGGCGGGGCGGGGGCTTGGTTCGGAGAGCACTTGTTGG；反向引物：ACTGTCGGCAGAGGCATCTTGAA；TC1507：正向引物：CGCCCGCCGCCGCGGCGGCGGGGCGGGGGCCACCCACCGGAACAAAATGTAAC；反向引物：GCCTTGACTTAATCGCACCCATC。2.一种用于转基因玉米多重检测的微滴PCR偶联DGGE分析方法，包括以下步骤：1)提取待测样品DNA；2)制备微滴水油乳化剂制备：25℃下，取微滴PCR水相在1.5分钟内逐滴加入到微滴PCR油相中，混合后形成水油乳化剂体系，每微升的水油乳化剂体系包含3×106到1×107个微滴，微滴的直径为1～8μm；所述微滴PCR水相组分及各组分终浓度为：正向引物300-500nM，反向引物300-500nM，10×PCRBuffer，BSA8-12g/l，dNTPs0.1-0.3mM，TaKaRaTaq4-6U，PCR模板≤109molecules(1.66fmol)；所述微滴PCR油相组分及各组分体积浓度为：Span804.5％、Tween800.4％、TritonX-1000.05％、矿物油95.5％；3)微滴PCR扩增反应将水油乳化剂体系分装到PCR管中进行微滴PCR扩增反应，反应程序为：94℃预变性5min，进入PCR反应循环：94℃变性30s，61-65℃退火30-60s，72℃延伸30s...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐雪明，赵凯，赵笑，范小瑞，杜亚楠，史斌，赵桓震，赵斌安，潘磊，张琪，张晓霞，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31