一种早代鉴定转基因玉米纯合体的方法技术

本发明专利技术公开了早代鉴定转基因玉米纯合体的方法，包括以下步骤：A1、提取T1代转基因玉米DNA；A2、选择参照基因、设计目的基因和参照基因的PCR引物；A3、使用普通PCR方法对阳性T1代转基因植株进行预检测；A4、证明基因特异扩增，获得基因扩增效率；A5、计算目的基因在各T1代植株中的相对含量；A6、检出转基因玉米纯合体，当目的基因相对含量约等于1时，该植株为纯合体；当基因相对含量约等于0.5时，该植株为杂合体。仅通过简单的普通PCR和荧光定量PCR等操作，同时对T1代阳性植株中参考基因与目的基因Ct比值进行分析，即能对单拷贝转基因玉米在T1代高效、简易地鉴定出纯合体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农业育种
，尤其涉及的是一种早代鉴定转基因玉米纯合体的简易方法。
技术介绍
玉米已成为全球种植面积最大的粮、经、饲三元谷类作物，随着分子生物学和生物技术的发展，玉米转基因技术已经成为研究玉米基因功能和创制高抗、优质、高产玉米新品种的重要手段之一。而鉴定目的基因纯合的玉米转化体是玉米转基因技术中一个必不可少的环节。由于转基因沉默现象的存在，人们往往选择目的基因以单拷贝或低拷贝形式插入 的转基因TO代进行下一步的纯合体筛选。常规的方法是对TO代(转基因当代)转化体自交获得Tl代转基因植株，然后对每个独立分离的Tl代转基因植株产生的T2代个体进行转基因分离比率的研究。通常采用PCR方法鉴定出T2代不再分离的转基因株系(即不再出现不含目的基因植株的株系)，被鉴定为纯合的转基因株系，此方法不仅工作量大、而且成本高、周期长，不利于快速获得纯合的转基因株系和转基因玉米新品种的育成。2009年刘楠等建立了一种利用4个PCR引物的多重PCR反应来鉴定转基因玉米纯合体的方法，用该方法鉴定玉米转基因纯合体的前提条件是目的基因在玉米基因组DNA中插入位点序列已知。而弄清楚某个外源目的基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种早代鉴定转基因玉米纯合体的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、提取T1代转基因玉米DNA；A2、选择参照基因、设计目的基因和参照基因的PCR引物；A3、使用普通PCR方法对阳性T1代转基因植株进行预检测；A4、证明基因特异扩增，获得基因扩增效率；A5、计算目的基因在各T1代植株中的相对含量；A6、检出转基因玉米纯合体，当目的基因相对含量约等于1时，该植株为纯合体；当基因相对含量约等于0.5时，该植株为杂合体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈亚欧，潘光堂，彭焕伟，葛飞，张志明，林海建，江舟，赵茂俊，杨珊，罗旭，张兵，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：