一种高通量检测含NOS终止子的转基因玉米的引物及方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学，具体公开了一种高通量的利用竞争性等位基因PCR(kompetitive allele specific PCR，KASP)方法检测含NOS终止子的转基因玉米的引物及方法。所述引物如SEQ ID No.1～4所示，为了适用于KASP反应检测，在正向引物的5’端连接荧光标签序列。利用本发明专利技术所提供的引物进行检测，一次检测样本量最高可达5376个，检测的通量要大大地优于普通PCR和TaqMan探针法荧光定量PCR；检测时，只需要扫描PCR产物的荧光信号就可以判断结果，而不需要进行电泳，简单快捷；KASP反应利用的是通用型的探针，相比TaqMan探针法荧光定量PCR，极大节省了成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，具体地说，涉及利用KASP技术检测含NOS终止子的转基因玉米的引物及方法。
技术介绍
对转基因作物及其产品的检测是转基因生物安全管理的基础。目前大部分转基因作物品种都含有NOS终止子这个外源成分，因此对NOS终止子的筛查是转基因检测当中最重要的检测项目之一。目前常用的转基因的检测方法为普通PCR技术和荧光定量PCR技术，但二者均存在不足与缺陷，限制了转基因检测的推广。普通PCR技术需要电泳以及紫外观察的过程，操作繁琐，耗时长，难以实现高通量检测。荧光定量PCR技术的不足包括：(1)检测成本昂贵。荧光定量PCR使用的荧光探针是基因特异性探针，成本很高。如果探针的效果不好，还需要重新设计探针。(2)难以实现高通量检测。一般情况下，一台荧光定量PCR仪器一次只能做96或者384个反应，能检测的样本数量有限，不适合大批量检测。(3)自动化程度不高。目前情况下，构建荧光定量PCR反应体系的过程主要依靠手工操作，容易导致实验误差和实验污染。因此，亟需开发一种高通量、低成本、简单快捷以及低错误率的转基因作物的检测方法。竞争性等位基因PCR(kompetitivealle本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高通量检测含NOS终止子的转基因玉米的引物组，其特征在于，包括：(1)NOS终止子特异性检测引物：NOS终止子正向引物：5’‑CGTTCAAACATTTGGCAATAAA‑3’；NOS终止子反向引物：5’‑AAGACCGGCAACAGGATTC‑3’；(2)内源基因zSSIIb特异性检测引物：zSSIIb正向引物：5’‑ATCTGCTCCGAAGCAAAGTC‑3’；zSSIIb反向引物：5’‑CACTCGTTCCGTTTTGCATT‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种高通量检测含NOS终止子的转基因玉米的引物组，其特征在于，包括：(1)NOS终止子特异性检测引物：NOS终止子正向引物：5’-CGTTCAAACATTTGGCAATAAA-3’；NOS终止子反向引物：5’-AAGACCGGCAACAGGATTC-3’；(2)内源基因zSSIIb特异性检测引物：zSSIIb正向引物：5’-ATCTGCTCCGAAGCAAAGTC-3’；zSSIIb反向引物：5’-CACTCGTTCCGTTTTGCATT-3’。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，包括：(1)NOS终止子特异性检测引物：连接了FAM荧光标签序列的NOS终止子正向引物：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGTTCAAACATTTGGCAATAAA-3’；NOS终止子反向引物：5’-AAGACCGGCAACAGGATTC-3’；(2)内源基因zSSIIb特异性检测引物：连接了HEX荧光标签序列的zSSIIb正向引物：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTATCTGCTCCGAAGCAAAGTC-3’；zSSIIb反向引物：5’-CACTCGTTCCGTTTTGCATT-3’。3.含有权利要求1或2所述引物组合的试剂或试剂盒。4.权利要求1或2所述的引物组合在检测含NOS终止子的转基因玉米中的应用。5.一种高通量检测含NOS终止子的转基因玉米的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨翅春，郑秀婷，熊艳文，彭佩，
申请(专利权)人：华智水稻生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43