本发明专利技术公开了能用于植物中调控基因表达的多核苷酸序列。公开了来源于高粱(Sorghum bicolor)的在植物中起作用的终止子序列。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术公开了能用于植物中调控基因表达的多核苷酸序列。公开了来源于高粱(Sorghum?bicolor)的在植物中起作用的终止子序列。【专利说明】用于植物基因表达的终止子序列相关专利申请的交叉引用本专利申请要求提交于2011年8月2日的美国临时申请N0.61 / 514，055的权益,其全部内容以引用方式并入本文。
本专利技术涉及植物分子生物学和植物基因工程领域。更具体地，其涉及用于调控植物基因表达的新型植物终止子序列及其应用。
技术介绍
植物基因工程近来的进步已打开了工程化植物以具有改善的特性或性状的新的大门。这些转基因植物在其基因组中典型地具有重组DNA构建体，其具有可操作地连接至多个调控区的蛋白质编码区，所述调控区使转基因准确的表达。转基因植物中一些帮助调控基因表达的调控元件的例子为启动子、内含子、终止子、增强子和沉默子。植物基因工程已发展至将多种性状引入商业上重要的植物中，也叫基因堆积。这是通过多基因转化实现的，其中多种基因被转化以产生可表达复合表型或多种表型的转基因植物。然而最优化地调节或控制每种转基因的表达是重要的。调控元件需要多种多样的，以避免导入相同的转基因植物重复序列，相同的转基因植物重复序列与对转基因的表达和稳定性的不可取的负面影响是相关联的(Peremarti等人(2010)Plant Mol Biol73:363-378 ；Mette 等人(1999)EMBO J18:241-248 ；Mette 等人(2000)EMBO J19:5194-5201 ；Mourrain等人(2007)Planta225:365_379、美国专利N0.7632982、美国专利N0.7491813、美国专利N0.7674950,PCT专利申请N0.PCT/US2009 / 046968)。因此，发现和表征能被用于在重要的农作物物种中表达异源性核酸的新型调控元件是重要的。各种不同的调控区能够被用于最优化地控制每种转基因的表达。调控序列位于编码区的下游，所述编码区包含用于转录终止和Y mRNA加工的所需信号，并被称为终止子序列。所述终止子序列在mRNA加工、定位、稳定性和翻译中起关键作用(Proudfoot, N, (2004) Curr.0p.Cell Biol 16:272-278 ；Gilmartin, 2005)。包含在终止子序列中的所述3'调控序列能够影响基因的表达水平。已经发现植物细胞中嵌合基因的优化表达依赖于合适的3'序列的存在(Ingelbrecht，1.L.W.等人(1989)PlantCelll:671-680)。通过基因的渗漏终止子的通读转录可导致从另一个基因的启动子的一个转基因的无益转录。转基因植物中转基因的双向、趋同转录也可由于分离的趋同基因的渗漏转录终止或来自基因组启动子而发生。趋同、重叠转录可降低转基因表达、或生成反义RNA (Bieri, S.等人(2002)Molecular BreedinglO:107-117)。这强调了发现新型和高效转录终止子的重要性。
技术实现思路
本专利技术涉及用于调控植物基因表达的调控序列。具体地，本专利技术涉及终止子序列。本专利技术提供了包含终止子序列的重组DNA构建体。本专利技术的一个实施例是分离的多核苷酸序列，所述分离的多核苷酸包含:(a)如SEQ IDNO:1 或 SEQ ID NO: 18 所示的序列；(b)与 SEQ ID NO:1 或 SEQ IDNO: 18 具有至少 95%的序列同一性的序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的序列，其中所述分离的多核苷酸序列在植物细胞中作为终止子起作用。本专利技术的另一个实施例是包含分离的多核苷酸序列的重组构建体，所述分离的多核苷酸序列包含:(a)如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:18所示的序列；(b)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:18具有至少95%的序列同一性的序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的序列，其中所述分离的多核苷酸序列在植物细胞中作为终止子起作用。这个重组构建体还可包含启动子和异源多核苷酸，其中所述启动子和异源多核苷酸可操作地连接至分离的多核苷酸序列。本专利技术的另一个实施例是在植物中表达异源多核苷酸的方法，所述方法包括以下步骤:(a)将上文所述的重组DNA构建体导入可再生的植物细胞；(b)由(a)的可再生的植物细胞再生转基因植物；以及(C)由步骤(b)的转基因植物获得子代植物，其中所述转基因植物和子代植物包含所述重组DNA构建体并且表现出所述异源多核苷酸的表达。在另一个实施例中，本专利技术涉及包含重组DNA构建体的载体、病毒、细胞、微生物、植物、或种子，所述重组DNA构建体包含本专利技术所述的终止子序列。本专利技术涵盖了包含上文所述的重组DNA构建体的再生的、成熟的和能繁殖的转基因植物、由其产生的转基因种子、Tl和后续的世代。所述转基因的植物细胞、组织、植株和种子可以包含至少一种所关注的重组DNA构建体。在另一个实施例中，包含本专利技术所述终止子序列的植物或种子是单子叶植物或种子。在另一个实施例中， 包含本专利技术所述终止子序列的植物或种子是玉米植物或种子。在另一个实施例中，任何表达异源多核苷酸的方法，其中所述植物细胞是单子叶植物细胞，例如，玉米植物细胞。【专利附图】【附图说明】和序列表根据以下的详细描述和附图以及序列表，可以更全面地理解本专利技术，以下的详细描述和附图以及序列表形成本申请的一部分。此序列表中以单个字母表示核苷酸，以三个字母表不氛基酸，如 Nucleic Acids Researchl3:3021-3030 (1985)和 BiochemicalJournal219(N0.2):345-373(1984)所描述的IUPAC-1UBMB标准中所规定，其以引用方式全文并入本文。用于核苷酸和氨基酸序列数据的符号和格式遵循37C.F.R.§ 1.822所示的规定。图1显示了 PHP31801的图谱、用于在扩增后克隆SB-GKAF终止子的载体。图2显示了 PHP34074的图谱、用于测试SB-GKAF终止子的载体。图3显示了在瞬时测定中SB-GKAF终止子相对于PINII终止子的测试结果。其显示了用PHP34074 (SB-GKAF终止子)和PHP34005 (PINII终止子)转化的BMS细胞中⑶S报告基因表达的定量分析。图4A 和图 4B 显示了 用 SB-GKAF (PHP34074)和 PINII (PHP34005)终止子构建体稳定转化的Gaspe Flint来源的玉米品系中⑶S报告基因表达的定量分析。图4A显示了在蛋白水平测定的GUS报告基因表达，图4B显示了用qRT-PCR(定量反转录-聚合酶链反应)测定的GUS报告基因表达。图5显示了采用SB-GKAF终止子和PINII终止子下游的两套引物，稳定转化的Gaspe Flint来源的玉米品系的qRT-PCR测定结果。图6A-6C 显示了克隆的 SB-GKAF 终止子(SEQIDN0:1)和 NCBI GI NO:671655 (SEQID NO:18)的1863至2322位核苷酸的比对。共有序列显示于顶部，与共有序列完全匹配的残基加框。SEQ ID NO:1 是 459bp SB-G本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含分离的多核苷酸序列的重组构建体，所述分离的多核苷酸序列包含：(a)包含如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：18中所示序列的核苷酸序列；(b)包含与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：18中所示序列具有至少95％的同一性的序列的核苷酸序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的核苷酸序列；其中所述分离的多核苷酸序列在植物细胞中作为转录终止子起作用。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：SE阿比特，R容，
申请(专利权)人：先锋国际良种公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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