本发明专利技术涉及结合ＭＨＣ Ⅰ类和ＭＨＣ Ⅱ类分子的肽。这些肽在不同的治疗和诊断情况下是有用的。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
相关申请本申请是1998年4月17日提交的申请号09/062,422的部分继续申请，申请号09/062,422为1997年9月15日提交的申请号08/937,263的部分继续申请，而后者又是1996年10月3日提交的申请号08/725,182现在的美国专利＿＿＿号的部分继续申请。所有这些申请均被引入作为参考。专利技术的领域本专利技术涉及来自癌症相关抗原的HLA结合肽。这些肽结合Ⅰ类和Ⅱ类MHC分子。背景和现有技术现已完全确认许多病理学状态，如感染、癌症、自身免疫病等都是以某些分子的不适当表达为特征的。因此这些分子可作为特定病理学或异常状态的“标志物”。这些分子除了可作为诊断“靶标”，即诊断这些异常状态所必需鉴定的物质外，它们还可作为用来产生诊断和/或治疗剂的反应物。其一个绝非限制性的实例是利用癌症标志物来产生特异性针对一种特定标志物的抗体。还有另一非限制性的实例是利用与MHC分子形成复合物的肽来产生针对异常细胞的溶细胞性T细胞。当然，此类物质的制备必需有用于产生这些物质的反应物来源。从细胞进行纯化是进行该工作的一种辛苦而不可靠的方法。另一种优选的方法是分离编码一特定标志物的核酸分子，随后用分离的编码分子来表达目的分子。目前，两种策略已被用于如在人类肿瘤中检测此类抗原。这些被称作遗传学方法和生物化学方法。遗传学方法由例如dePlaen等，美国国家科学院进展(Proc.Natl.Sci.USA)85:2275(1988)举例说明，其被引入作为参考。在该方法中，将获自一种肿瘤的一个cDNA文库的数百份质粒集合体转染到受体细胞，例如COS细胞，或者测试了该特异性抗原表达的抗原阴性的肿瘤细胞系变体中。生物化学方法由例如引入作为参考的O.Mandelboim等，自然(Nature)369:69(1994)举例说明，其基于对结合于肿瘤细胞MHC-Ⅰ类分子的肽的酸洗脱，及随后的反相高效液相色谱(HPLC)。抗原性肽在它们结合抗原加工有缺陷的突变细胞系上的空MHC-Ⅰ类分子后被识别，并诱导同细胞毒性T淋巴细胞的特异性反应。这些反应包括CTL增殖的诱导、TNF的释放以及靶细胞的裂解，可在MTT检测法或51Cr释放检测法中测定。这两种对抗原进行分子确定的方法具有下述缺点第一，它们非常麻烦，耗时而且昂贵；第二，它们依赖于具有预定特异性的细胞毒性T细胞系(CTLs)的建立。这两种用于抗原的鉴定和分子确定的已知方法有其固有的问题，这一点已通过以下事实得到了最好的证实迄今为止这两种方法在人体肿瘤中只成功确定了很少的几种新抗原。见例如van der Bruggen等，科学(Science)254:1643-1647(1991)；Brichard等，实验医学杂志(J.Exp.Med.)178:489-495(1993)；Coulie等，实验医学杂志180:35-42(1994)；Kawakami等，美国国家科学院进展(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)91:3515-3519(1994)。此外，所述方法学有赖于目的癌症类型已建立的永生细胞系的可用性。建立来自特定癌症类型的细胞系是很难的，如Oettgen等，北美免疫学和过敏症临床(Immunol.Allerg.Clin.North.Am.)10:607-637(1990)所示。还已知一些上皮细胞癌在体外对CTL的易感性极低，防碍了常规检测。这些问题促使本领域来发展用于鉴定癌症相关抗原的其他方法。Sahin等，美国国家科学院进展92:11810-11913(1995)描述了一个关键的方法，其引入作为参考。还可见美国专利5,698,396号以及1996年1月3日提交的申请号08/479,328。所有这三篇文献均引入作为参考。总之，该方法涉及cDNA文库在原核宿主中的表达。(文库均得自肿瘤标本)。然后，为了检测那些引发高滴度体液应答的抗原，用已吸附并稀释的血清对表达文库进行免疫筛选。该方法被称为SEREX方法(通过重组表达克隆进行的抗原血清学鉴定(“Serological identification of antigens by RecombinantExpression Cloning”))。该方法学已被用来证实以前鉴定的肿瘤相关抗原的表达，以及检测新抗原。见上面参考的专利申请和Sahin等，同上，以及Crew等，欧洲分子生物学组织杂志(EMBO J)144:2333-2340(1995)。SEREX方法已被用于食管癌标本，而且目前已经鉴定出一种抗原，并分离和克隆了其编码核酸分子。这是几个专利申请的主题，其中一些被引入作为参考。已发现该抗原和其截断形式同癌症患者血清中的抗体发生反应。还发现源自该分子的肽同MHC分子结合，激发溶细胞性T细胞和辅助性T细胞的应答。在随后的公开中可以看到本专利技术的这些特征。附图简述附图说明图1显示NY-ESO-1抗原的RNA在各种类型组织中的表达模式。图2显示NY-ESO-1 mRNA的RNA印迹(Northem Blot)杂交分析，其在睾丸和细胞系SK-MEL-19中可检测到，而在其它各种细胞和组织样品中未检测到。图3显示对推导的NY-ESO-1氨基酸序列进行修饰的潜在位点。图4是NY-ESO-1的亲水性曲线图，其显示在氨基末端的亲水区和靠近羧基端较长的疏水片段。图5显示利用各种HLA-A2阳性、NY-ESO-1阳性、双阳性或双阴性的细胞进行的CTL裂解研究的结果。图6提供资料确定HLA-A2为提呈SEQ ID NO:1衍生肽的提呈分子。实施例1利用众所周知的方法从快速冷冻的高分化或中分化的食管鳞状细胞癌标本中提取总RNA。关于此类方法见例如Chomzynski，分析生物化学杂志(J.Analyt.Biochem.)162:156-159(1987)。按照制造商的说明利用此RNA制备一个随后被转染到λZAP噬菌体载体中的cDNA文库。然后将λZAP文库转染到大肠杆菌中，产生1.6×106个初级分离菌。然后利用Sahin等，美国国家科学院进展92:11810-11813(1995)的SEREX方法，其被引入作为参考。简言之，通过将自体血清和不含有食管癌细胞cDNA克隆的λZAP所转染的大肠杆菌的裂解液相合并，从血清中去除抗大肠杆菌内源性分子的抗体。然后将清理过的血清稀释，并同含有噬菌斑的硝酸纤维素膜混合。将噬斑室温孵育过夜。随后进行洗涤，然后将滤膜同碱性磷酸酶结合的山羊抗人FCγ二抗进行孵育，并通过同5-溴-4-氯-吲哚磷酸盐和氮蓝四唑一起孵育来显色。发现了一共13个阳性克隆。实施例2鉴定后，通过稀释克隆和用人血清检测将反应性克隆亚克隆至单克隆化。然后利用制造商的说明，对这些克隆进行纯化，体外切割，并转换成pBK-CMV质粒的形式。然后利用EcoRⅠ-XbaⅠ限制性作图评价插入的DNA来确定不同的插入子。鉴定出8个不同的插入子，大小从大约500到大约1300个碱基对。利用ABI PRISM自动测序仪对克隆进行测序。表1总结了结果。一个基因由4个重叠的克隆代表，另一个由3个重叠的克隆代表，而其余的6个基因都只由一个克隆代表。同源性检索揭示被称为NY-ESO-2、3、6、7的克隆是已知的。见Elisei等，内分泌研究杂志(J.Endocrin.I本文档来自技高网...
【技术保护点】
与ＭＨＣ Ⅱ类ＨＬＡ－ＤＲ５３分子结合的分离的多肽，其包括至少１８个，不超过２５个氨基酸，所述的多肽具有至少一个ＨＬＡ－ＤＲ５３结合基元，所述的基元由４个氨基酸组成，其中第一个氨基酸为Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ或Ｌｅｕ，而第四个氨基酸为Ａｌａ或Ｓｅｒ。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：伊丽莎白斯托克特，埃尔克贾格尔，陈耀桢，马修斯坎伦，克努特亚历山大，劳埃德J奥尔德，阿利格里，格尔德里特，简W德里奥特，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究院，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。