分离分子的方法技术

从起始物质中分离靶物质的方法，包括：（ａ）将起始物质与选自如下一组的一种组合物接触以在至少靶物质的一部分和所述组合物之间形成复合物，所述的组为：固体载体＊＊＊其中Ｒ↓［１］是Ｘ－ＮＲ↓［４］－＊－ＣＨ↓［２］ －Ｎ（ＣＨ↓［２］ＣＯＯ↑［－］）↓［２］Ｍ↑［＋］；Ｘ是取代或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚芳烷基，或取代或未取代的亚芳基；Ｒ↓［２］和Ｒ↓［３］独立地选自Ｒ↓［１］、烃基、取代的烃基、卤素原子、氢原子、羟基、硫醇、胺、 键合所述固体载体的硅烷醇键、键合另一个硅烷配体的键或Ｏ－Ｓｉ－Ｙ↓［１］Ｙ↓［２］Ｙ↓［３］，其中Ｙ↓［１］，Ｙ↓［２］和Ｙ↓［３］独立地选自烃基或取代的烃基；Ｒ↓［４］是烃基，取代的烃基或氢原子；Ｍ是金属离子；以及 ｎ是整数≥１；和固体载体－［－Ｘ↓［ｍ］－ＮＲ↓［４］－＊－ＣＨ↓［２］－Ｎ（ＣＨ↓［２］ＣＯＯ↑［－］）↓［２］Ｍ↑［＋］］↓［ｎ］其中Ｘ是取代的或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚芳烷基，或取代或未取代的亚芳基；　 　Ｒ↓［４］是烃基，取代的烃基或氢原子；Ｍ↑［＋］是金属离子；ｎ是整数≥１；以及ｍ是０或１。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请要求2002年10月18日提交的美国临时申请号No.60/419,614的优先权。关于联邦资助研究或开发的声明不适用。
技术介绍
本专利技术广泛地涉及组合物和将金属离子或其它靶物质与非靶物质分离的方法，所述靶物质包括但不限于多肽，核酸或内毒素。专利技术概述一方面，本专利技术包括从起始物质中分离靶物质的方法，所述方法包括将起始物质和选自如下一组的组合物接触 其中R1是 X是取代或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚芳烷基(aralkylene)，或取代或未取代的亚芳基；R2和R3独立地选自R1、烃基、取代的烃基、卤素原子、氢原子、羟基、硫醇、胺、键合所述固体载体(solid support)的硅烷醇键、键合另一个硅烷配体的键或O-Si-Y1Y2Y3，其中Y1，Y2和Y3独立地选自烃基或取代的烃基；R4是烃基，取代的烃基或氢原子；M是金属离子；以及n是整数≥1；和 其中X是取代的或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚芳烷基，或取代或未取代的亚芳基；R4是烃基，取代的烃基或氢原子；M+是金属离子；n是整数≥1；以及m是0或1；以在至少靶物质的一部分和所述组合物之间形成复合物。参考下面的附图和详细的描述，本专利技术的这些和其它方面将被更好地理解。这里所引用的每个出版物或专利申请以其全部内容并入参考。在本公开和并入的出版物之间有冲突的情况下，以本公开为准。附图简述附图说明图1提供了比较血红蛋白，碱性磷酸酶和B-半乳糖苷酶在氨丙基改性的磁性二氧化硅颗粒(图1A)、Q-琼脂糖树脂(图1B)以及DEAE树脂(图1C)上分级分离的图示。图2是利用氨丙基改性的磁性二氧化硅颗粒分级分离的FluoroTect-Green标记的萤光素酶和血红蛋白的SDS-PAGE凝胶。图3A和3B是由3-氨丙基磁性二氧化硅颗粒捕获的糖基化膜蛋白的SDS-PAGE凝胶。图4是利用3-氨丙基磁性二氧化硅颗粒分离的在无细胞表达体系中表达的膜蛋白的SDS-PAGE凝胶。图5是说明3-氨丙基改性的磁性二氧化硅颗粒捕获细菌细胞的图示。图6是利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒纯化的组氨酸标记(his-tag)RNase HI的SDS-PAGE凝胶。图7是比较利用多种金属3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分级分离血红蛋白的SDS-PAGE凝胶。图8A是利用氨丙基改性的磁性二氧化硅颗粒后，再利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分级分离的组氨酸标记RNase HI的SDS-PAGE凝胶。图8B是利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒后，再利用氨丙基改性的磁性二氧化硅颗粒分级分离的组氨酸标记萤光素酶的SDS-PAGE凝胶。图9A是显示考马斯蓝染料结合附着在镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒上的组氨酸标记萤光素酶照片。图9B是显示用增加咪唑的浓度将考马斯蓝染色的组氨酸标记萤光素酶从镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒上洗脱的图示。图9C是比较考马斯蓝染料结合附着于镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒的组氨酸标记蛋白和考马斯蓝染料结合附着于其它金属螯合树脂的组氨酸标记蛋白的照片。图10A显示镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分级分离后荧光标记的组氨酸标记萤光素酶的SDS-PAGE凝胶。图10B显示铜--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分级分离后荧光标记的组氨酸标记BSA的SDS-PAGE凝胶。图11是利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分离的tRNA的SDS-PAGE凝胶。图12是利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分离的来自无细胞表达体系的组氨酸标记蛋白的SDS-PAGE凝胶。图13是比较游离tRNA合成酶的酶活性与结合镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒的tRNA合成酶的酶活性的图示。图14显示改造的包括本专利技术用于多肽纯化和分析的固体载体的移液管头。图15是显示利用多种金属3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒从兔网织红细胞裂解物中结合和洗脱复合蛋白混合物模式的SDS-PAGE凝胶。图16A是利用铜3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒从兔网织红细胞裂解物中结合和洗脱复合蛋白混合物模式的SDS-PAGE凝胶。图16B是显示各个级分蛋白质浓度(Bradford法A595)的图示。图17A是显示利用铜3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒从CHO细胞裂解物中结合和洗脱复合蛋白混合物模式的SDS-PAGE凝胶。图17B是显示各个级分蛋白质浓度(Bradford法A595)的图示。图18A是说明利用铜3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒从麦胚细胞裂解物中结合和洗脱复合蛋白混合物模式的SDS-PAGE凝胶。图18B是显示各个级分蛋白质浓度(Bradford法A595)的图示。图19是说明在不同条件下用铜3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒序贯洗脱蛋白的SDS-PAGE凝胶。图20是说明在不同条件下用铜3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒序贯洗脱蛋白的SDS-PAGE凝胶。图21是利用铁(III)或镓(III)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分离的磷蛋白卵清蛋白SDS-PAGE凝胶。图22是利用铁(III)或镓(III)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒从兔网织红细胞裂解物中分离的磷蛋白SDS-PAGE凝胶。图23A是利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分离的在诱导后不同时间点回收的细菌裂解物的考马斯染色的组氨酸标记蛋白的图片；图23B是诱导后时间函数的细胞生长(OD600测定)和蛋白质浓度(考马斯染色蛋白A595测定)的图示；图23C是样品中纯化蛋白的SDS-PAGE凝胶。图24显示利用镍(II)3--乙酰基]氨基]-丙基磁性二氧化硅颗粒分离并用BODIPY染色的组氨酸标记蛋白的SDS-PAGE凝胶荧光图像。专利技术详述本专利技术提供了从起始物质中分离靶物质的组合物和方法。合适的靶物质包括，但不限于金属离子、多肽、核酸、全细胞和细胞膜等。本专利技术还提供适合用于本专利技术方法实施的试剂盒。本专利技术的组合物和方法在多种应用中是有用的，包括例如混合物中分子的分级分离，从液体中去除金属离子，从细胞悬液中捕获细胞，分离膜或膜蛋白和从混合物中去除不希望的污染蛋白等。如本领域的技术人员所理解的，本专利技术的组合物和方法可以单独使用或与其它组合物或方法联合使用。本专利技术的组合物和方法允许靶物质轻而易举的分离或纯化，因此它们可用于小型化、机械操作以及用于高通量分析。本专利技术组合物和方法还适用于结构和功能基因组学或蛋白质组学。本专利技术组合物包括改性固体载体，包括次氮基三乙酸(NTA)改性固体载体和金属改性固体载体。本专利技术方法使用NTA改性固体载体、金属改性固体载体或胺改性固体载体与起始物质中的靶物质如金属离子、分子、亚细胞组分或全细胞形成复合物，或者说实现靶物质如金属离子、分子、亚细胞组分或全细胞与起始物质中的非靶物质分离。适于制造本专利技术改性固体载体的合适固体载体包括，但不限于，凝胶或硬的支持材料、琼脂糖、聚丙烯酰胺、纤维素、塑料、多糖、尼龙、聚苯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·J·辛普森，托尼·约翰逊，约翰·舒尔茨，罗德里克·G·弗莱明，丽贝卡·格达特，桑查伊塔·卡尔，罗宾·赫斯特，
申请(专利权)人：普罗梅加公司，
类型：发明
国别省市：