检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物及探针、试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物及探针、试剂盒，分别针对空肠弯曲菌的mapA基因、沙门氏菌的fimY基因、单增李斯特菌的hly基因设计引物和探针。实验结果表明，上述特异性的引物及探针能够同时扩增空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌三种菌，且扩增时没有交叉污染，检测的灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物及探针、试剂盒
本专利技术涉及生物检测
，特别是涉及一种检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物及探针、试剂盒。
技术介绍
我们日常生活所食用的商品在生产、加工、包装、储存、运输、销售、烹调等各环节都存在一些非故意的污染，主要包括：生物性污染、化学性污染以及放射性污染三类。其中生物性污染发病最为迅速且具有一定的传染性。对于食源性疾病，66％以上由细菌引起的，沙门氏菌、空肠弯曲菌和单增李斯特氏菌是三种人畜共患病的病原体，传染性比较强，能够尽早发现传播源并且切断才是有效的途径。沙门氏菌(Salmonella)是一群形态、培养、生化反应和抗原构造相类似的革兰氏阴性杆菌，种类繁多，分布广泛。沙门氏菌病的主要是通过蛋、家禽和肉类产品传播，易感人群主要是小孩、老年人及免疫缺陷个体，能够引起肠热症、肠炎症、败血症以及慢性肠炎。空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)是抗原构造与肠道杆菌一样具有o、h和k抗原的革兰氏阴性杆菌，主要寄生在多种动物如牛、羊、狗及禽类的生殖道或肠道内，通过分娩或排泄物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，包括：用于扩增空肠弯曲菌的上游引物mapA‑F，所述上游引物mapA‑F针对空肠弯曲菌的mapA基因设计；用于扩增空肠弯曲菌的下游引物mapA‑R，所述下游引物mapA‑R针对空肠弯曲菌的mapA基因设计；用于检测空肠弯曲菌的探针probe‑1，所述探针probe‑1针对空肠弯曲菌的mapA基因设计，所述探针probe‑1的两端分别结合有第一荧光报告基团和第一荧光淬灭基团；用于扩增沙门氏菌的上游引物fimY‑F，所述上游引物fimY‑F针对沙门氏菌的fimY基因设计；用于扩增沙门氏菌的下游引物fimY...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，包括：用于扩增空肠弯曲菌的上游引物mapA-F，所述上游引物mapA-F针对空肠弯曲菌的mapA基因设计；用于扩增空肠弯曲菌的下游引物mapA-R，所述下游引物mapA-R针对空肠弯曲菌的mapA基因设计；用于检测空肠弯曲菌的探针probe-1，所述探针probe-1针对空肠弯曲菌的mapA基因设计，所述探针probe-1的两端分别结合有第一荧光报告基团和第一荧光淬灭基团；用于扩增沙门氏菌的上游引物fimY-F，所述上游引物fimY-F针对沙门氏菌的fimY基因设计；用于扩增沙门氏菌的下游引物fimY-R，所述下游引物fimY-R针对沙门氏菌的fimY基因设计；用于检测沙门氏菌的探针probe-2，所述探针probe-2针对沙门氏菌的fimY基因设计，所述探针probe-2的两端分别结合有第二荧光报告基团和第二荧光淬灭基团；用于扩增单增李斯特菌的上游引物hly-F，所述上游引物hly-F针对单增李斯特菌的hly基因设计；用于扩增单增李斯特菌的下游引物hly-R，所述下游引物hly-R针对单增李斯特菌的hly基因设计；用于检测单增李斯特菌的探针probe-3，所述探针probe-3针对单增李斯特菌的hly基因设计，所述探针probe-3的两端分别结合有第三荧光报告基团和第三荧光淬灭基团；所述第一荧光报告基团、所述第二荧光报告基团以及所述第三荧光报告基团各不相同。2.根据权利要求1所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，所述上游引物mapA-F的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述下游引物mapA-R的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述上游引物fimY-F的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，所述下游引物fimY-R的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示；所述上游引物hly-F的核苷酸序列如SEQIDNo.7所示，所述下游引物hly-R的核苷酸序列如SEQIDNo.8所示。3.根据权利要求1所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，所述探针probe-1的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；所述探针probe-2的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；所述探针probe-3的核苷酸序列如SEQIDNo.9所示。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭毅彬，马柳安，郑林，李泓彦，周娇娇，
申请(专利权)人：深圳市草履虫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44