一种拮抗空肠弯曲杆菌及抑制其flaA基因表达的罗伊氏乳杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，该菌株能拮抗空肠弯曲杆菌及抑制其flaA基因的表达，具有较好的耐酸、耐胆盐特性，能在体外抑制空肠弯曲杆菌生长，且对肠道上皮细胞具有较好的粘附能力，该罗伊氏乳杆菌发酵上清在体外与对照组相比使空肠弯曲杆菌flaA基因的表达量下调了11.1倍，能有限抑制空肠弯曲杆菌鞭毛的合成；该罗伊氏乳杆菌发酵上清在细胞模型中与对照组相比使空肠弯曲杆菌flaA基因的表达量下调了1.4倍。所述罗伊氏乳杆菌可用于制备预防及治疗空肠弯曲杆菌引起的疾病，可参与制成发酵乳制品等，有广泛地应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株拮抗空肠弯曲杆菌及抑制其flaA基因表达的罗伊氏乳杆菌，属于微生物

技术介绍
空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)是革兰氏阴性菌，广泛分布于自然界，可通过动物、食物、水、牛奶等传播，能定植于各种野生动物和家禽、家畜的肠道内，接触禽畜类，食入未煮熟或受污染的鸡肉、牛肉、未彻底杀菌的牛奶以及污染的水都可以引起人类感染。近些年来，空肠弯曲杆菌感染率在世界各地普遍呈上升趋势。在一些发达国家，空肠弯曲杆菌感染引起的腹泻病例数甚至超过了沙门氏菌和志贺氏菌，成为最常见的腹泻致病菌；在发展中国家，空肠弯曲杆菌是婴幼儿感染性腹泻最常见的病原菌。人感染空肠弯曲杆菌后，最常见的会引起肠胃炎、腹泻、发烧以及腹部绞痛；免疫力低下者会进一步引起一系列的并发症，例如胆囊炎、腹膜炎、脑膜炎、败血症和骨髓炎等；空肠弯曲杆菌引起的最严重的并发症是格林-巴利综合征，即GBS，它会引起轴突的损伤及不可逆的神经伤害，会导致呼吸肌麻痹而死亡。C.jejuni在宿主体内通过鉴别环境因素，调节表达或抑制自身的某些特异性基因来适应寄主体内高度竞争的肠道环境。只有这样才能存活、生长，最终施行其致病性，并大量繁殖。C.jejuni侵袭的第一步即黏附与定植，而这与其毒力因子flaA的表达密不可分，且flaA的表达还与C.jejuni侵入靶细胞有着密切的联系，若C.jejuni毒力因子flaA的表达受到抑制，其致病性将大大减弱。QuocV.Tu等2008年的研究发现C.jejuni利用MUC2作为环境诱因能抑制其flaA基因的表达；A.Mundi等2013年研究发现具有抑制C.jejuni活性的LactobacillusacidophilusStrainLa-5的发酵后的无细胞提取物在体外能抑制flaA基因的表达。但目前没有关于调控空肠弯曲杆菌flaA基因表达的研究大多在体外水平上且抑制其flaA基因表达倍数很低，对于细胞模型中乳酸菌对空肠弯曲杆菌flaA基因表达的调控作用尚不清楚，也没有在体内验证其拮抗空肠弯曲杆菌的功能。目前临床治疗C.jejuni感染的常用药物为抗生素，但抗生素的使用会带来机体及C.jejuni对抗生素的耐药性，过度使用还会导致体内药物的残留。乳酸菌是机体先天性免疫系统的重要成员，是机体维持免疫稳态不可缺少的部分。能维持肠道健康，从而达到促进生长、防治疾病的目的，其使用价值日益受到重视。目前利用乳酸菌干预并治疗消化道细菌感染已经成为国内外食品科学与生物医药研究的一个重要领域，研究表明乳酸菌能在体内外有效干预C.jejuni感染。乳酸菌干预C.jejuni感染的机理主要包括产生抗菌物质抑制C.jejuni的生长；黏附性高的乳酸菌可以通过空间位阻效应或者产生抑制物质来抑制C.jejuni对宿主细胞的黏附；乳酸菌对肠道形态的完整性具有显著的保护作用，可以减轻C.jejuni对肠道上皮细胞的感染症状；乳酸菌还可以向细胞外分泌一些具有免疫调节活性的物质，如胞外多糖和其它分泌蛋白，这些成分参与免疫调节或直接引起免疫应答，因而构成了乳酸菌发挥益生功效的物质基础，在细菌定植、免疫激活、预防癌变等方面发挥作用。目前，一些公开专利文献涉及空肠弯曲杆菌的拮抗及其用途，例如CN104870472A公开了一种特异于空肠弯曲杆菌的抗体及其片段；CN102497875A公开了一种用于降低空肠弯曲杆菌定植的抗原；CN103381220A公开了一种可以治疗鸡空肠弯曲杆菌的药物；但是，目前涉及乳酸菌拮抗空肠弯曲杆菌及抑制其毒力基因表达的专利申请文献并不多，CN102533618A公开了一种具有体外抑制空肠弯曲杆菌能力的植物乳杆菌，但该专利并没有涉及空肠弯曲杆菌的flaA基因的表达情况及在细胞模型及体内拮抗空肠弯曲杆菌中的功效。因此，筛选出一株拮抗空肠弯曲杆菌的乳酸菌，证明它在体外及细胞模型中能有效抑制空肠弯曲杆菌flaA基因的表达，且在动物模型中具有良好的缓解空肠弯曲杆菌感染的作用，并研究该乳酸菌实际用途就显得非常必要了。本专利技术人在总结现有技术的基础上，通过大量实验研究,终于完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术提供了一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)，该菌株已于2015年9月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.11447。所述罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447具有下述生物学特性：(1)菌体特征：革兰氏阳性，细长杆状，微弯成链出现，无鞭毛，无芽孢；(2)菌落特征：菌落乳白色，边缘不整齐，片状，中央凸起，表面湿润光滑；(3)生长特征：该菌株的最低生长温度为15℃，最高生长温度为40℃，在温度30-37℃下生长最佳，最适生长PH为6.5，培养18h后进入稳定期；(4)具有耐酸性，在pH3.0-9.0环境条件下生长良好，在pH2.0环境下存活良好；(5)具有胆盐耐受性，在胆盐浓度为0.1％一0.4％的范围内菌株生长良好；(6)体外抑制空肠弯曲杆菌生长；(7)对肠道上皮细胞具有较好的粘附能力；(8)罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447发酵上清在体外能显著抑制空肠弯曲杆菌flaA毒力因子的表达；(9)罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447发酵上清在体外能影响空肠弯曲杆菌鞭毛的合成；(10)罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447发酵上清在细胞模型中能显著抑制空肠弯曲杆菌flaA毒力因子的表达。本专利技术所述的罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447可用于制备抑制空肠弯曲杆菌的药物组合物或保健功能食品。所述药物组合物是由罗伊氏乳杆菌菌剂CGMCCNo.11447与在药学上可接受的载体组成的。所述在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的粘合剂、填充剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂。所述的药物组合物是胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂或口服液剂型。所述罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447可用于制备发酵食品。所述的发酵食品是使用含有罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447菌种的发酵剂生产的乳制品、果蔬制品及、豆制品。所述的乳制品是酸牛奶、酸奶油或干酪；所述的果蔬制品是黄瓜、甜菜、芹菜、胡萝卜或圆白菜制品；所述的豆制品是酱油、酸豆奶、豆豉或豆酱。本专利技术还提供一种制备罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447菌剂的方法，是将含有所述罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447生物菌液通过常规冷冻干燥工艺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，该菌株已于2015年9月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.11447。

【技术特征摘要】
1.一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)，该菌株已于2015年9月24日保藏于中国
微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北
辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.11447。
2.根据权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌，其特征在于它具有下述特性：
(1)具有耐酸性，胆盐耐受性；
(2)体外抑制空肠弯曲杆菌生长；
(3)对肠道上皮细胞具有较好的粘附能力；
(4)罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447发酵上清在体外能显著抑制空肠弯曲杆菌
flaA毒力因子的表达；
(5)罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447发酵上清在体外能影响空肠弯曲杆菌鞭毛的
合成；
(6)罗伊氏乳杆菌CGMCCNo.11447发酵上清在细胞模型中能显著抑制空肠弯曲
杆菌flaA毒力因子的表达。
3.一种制备抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，翟齐啸，田丰伟，张婷婷，赵建新，王刚，张秋香，刘小鸣，张白曦，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32