确定质粒药物是否具有生物活性的方法、装置及其应用制造方法及图纸

本发明专利技术提出了确定质粒药物生物活性的方法和装置，所述质粒药物表达HGF，该方法包括：(1)将待测质粒药物引入哺乳动物细胞中，所述待测质粒携带表达HGF的核酸分子；(2)在适于HGF表达的条件下，对步骤(1)中所得到的所述哺乳动物细胞进行培养，并收集培养物的上清液；(3)使步骤(2)中所得到的上清液与HUVEC细胞接触，并确定在所述接触前后，所述HUVEC细胞的增殖活性变化；以及(4)基于所述HUVEC细胞的增殖活性变化，确定所述待测质粒药物是否具有生物活性，其中，在所述接触后，所述HUVEC细胞的增殖活性得到显著提高是所述待测质粒药物具有生物活性的指示。上述方法能够客观、准确、可重复性高地确定表达HGF质粒药物的生物活性。

Methods, devices and applications to determine whether plasmid drugs have biological activity

The invention provides a method and apparatus for determining plasmid biological activity of drugs, the drug HGF expression plasmid, the method comprises the following steps: (1) to be tested plasmid drugs into mammalian cells, the expression of nucleic acid molecules to be tested plasmid carrying HGF; (2) the expression of HGF in suitable conditions of step (1) the mammalian cells have been cultured, and collect the culture supernatant; (3) to step (2) was obtained by contact with HUVEC cells, and to determine the contact in the before and after the change of the proliferative activity of HUVEC cells; and (4) changes in proliferation activity the HUVEC cell based on the measured to determine whether the drug was biologically active, the contact in the post, the proliferative activity of HUVEC cells was significantly increased in the sample is a plasmid of biologically active drugs. The above methods can be objective, accurate and repeatable to determine the biological activity of HGF plasmid.

【技术实现步骤摘要】
确定质粒药物是否具有生物活性的方法、装置及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及确定质粒药物是否具有生物活性的方法、装置及确定质粒药物生产工艺的方法。
技术介绍
质粒药物主要是采用E.coli原核表达系统生产的DNA重组制品。质粒药物可根据市场的需要，灵活设计目标蛋白的表达序列到质粒药物的载体上，进而表达所需要的目标蛋白。质粒药物具有靶向性强，副作用小的优势，具有光明的临床应用前景。然而如何快速、准确地确定工业产出的质粒药物的生物活性，对控制质粒药物产品的质量具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出了一种能够客观、准确、快速、可重复性高地确定质粒药物生物活性的方法和装置。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种确定质粒药物具有生物活性的方法，所述质粒药物表达HGF。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：(1)将待测质粒药物引入哺乳动物细胞中，所述待测质粒携带表达HGF的核酸分子；(2)在适于HGF表达的条件下，对步骤(1)中所得到的所述哺乳动物细胞进行培养，并收集培养物的上清本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种确定质粒药物是否具有生物活性的方法，所述质粒药物表达HGF，其特征在于，所述方法包括：(1)将待测质粒药物引入哺乳动物细胞中，所述待测质粒携带表达HGF的核酸分子；(2)在适于HGF表达的条件下，对步骤(1)中所得到的所述哺乳动物细胞进行培养，并收集培养物的上清液；(3)使步骤(2)中所得到的上清液与HUVEC细胞接触，并确定在所述接触前后，所述HUVEC细胞的增殖活性变化；以及(4)基于所述HUVEC细胞的增殖活性变化，确定所述待测质粒药物是否具有生物活性，其中，在所述接触后，所述HUVEC细胞的增殖活性得到显著提高是所述待测质粒药物具有生物活性的指示。

【技术特征摘要】
1.一种确定质粒药物是否具有生物活性的方法，所述质粒药物表达HGF，其特征在于，所述方法包括：(1)将待测质粒药物引入哺乳动物细胞中，所述待测质粒携带表达HGF的核酸分子；(2)在适于HGF表达的条件下，对步骤(1)中所得到的所述哺乳动物细胞进行培养，并收集培养物的上清液；(3)使步骤(2)中所得到的上清液与HUVEC细胞接触，并确定在所述接触前后，所述HUVEC细胞的增殖活性变化；以及(4)基于所述HUVEC细胞的增殖活性变化，确定所述待测质粒药物是否具有生物活性，其中，在所述接触后，所述HUVEC细胞的增殖活性得到显著提高是所述待测质粒药物具有生物活性的指示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，通过电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法将待测质粒药物引入哺乳动物细胞中，优选脂质体介导法。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞是CHO细胞，并且在步骤(1)中，所述CHO细胞预先接种于6孔板，所述CHO细胞的接种密度是1*106/孔。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，进行所述培养48h。5.根据权利要求要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述上清液与HUVEC细胞接触之前，预先将所述上清液进行稀释，所述稀释的倍数是4～16倍，优选16倍，任选地，在步骤(3)中，所述HUVEC细胞预先接种于96孔板并进行培养24h,所述HUVEC细胞的接种密度是5000/孔，任选地，在步骤(3)中，所述HUVEC细胞为10代以内细胞，任选地，在步骤(3)中，所述接触是在37摄氏度、5％CO2的条件下进行72h。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HUVEC细胞的增殖活性是通过检测HUVEC细胞的ATP响应值确定的，任选地，利用CellTiter-GloLuminescence试剂盒检测HUVEC细胞的ATP响应值。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，进一步包括：预先将含有不同浓度HGF的HGF标准品与HUVEC细胞接触，并检测接触后HUVEC细胞的ATP响应值；基于ATP响应值确定HUVEC细胞活性的EC50值、R2和RSD％，其中，HGF标准品中HGF的浓度是500ng/ml、125ng/ml、31.25ng/ml、7.8125ng/ml、1.953ng/ml、0.488ng/ml、0.122ng/ml、0.030ng/ml；EC50值在1.0～3.0ng/ml,R2大于0.95，RSD％小于15％是所述HUVEC细胞适用于检测的标准。8.一种确定质粒药物是否具有生物活性的方法，所述质粒药物表达HGF，其特征在于，包括：a.CHO细胞复苏、传代，接种于6孔培养板，1×106细胞/孔；将携带表达HGF的核酸分子的质粒进行基因转染，48h后收集上清，-80℃冻存备用；b.HUVEC细胞复苏、传代6～10代，所述HUVEC细胞的培养基为包含5％FBS、1％P/S和1％ECGS的ECM培养液；c.将所述HUVEC细胞接种于96孔板，所述HUVEC细胞的培养基为包含0.5％FBS和1％P/S的ECM培养液，细胞密度为5×104个/ml，每孔100μl细胞悬浮液中包含500...

【专利技术属性】
技术研发人员：许勇，王学海，周昌茂，马铮，黄璐，马梵辛，肖强，刘哲，
申请(专利权)人：湖北生物医药产业技术研究院有限公司，武汉珂美立德生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42