选择治疗性分子的方法技术

本公开内容提供采用钙波动测定法和/或序列评分计算鉴定对于给药是安全的分子的方法。本公开内容还包括采用钙波动测定法、序列评分方法、体内耐受性测定法或其任何组合选择或鉴定具有可耐受的体内神经毒性的分子的方法。

Methods of choosing therapeutic molecules

The present disclosure provides a method for identifying molecules that are safe for drug delivery by using a calcium wave determination and / or sequence score. This disclosure also includes methods of selecting and identifying molecules with tolerable neurotoxicity in vivo by means of calcium fluctuation, sequence scoring, in vivo tolerance test or any combination.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】选择治疗性分子的方法早期申请的引用本申请是要求2015年2月4日提交的美国临时申请号62/112,058、2015年5月4日提交的美国临时申请号62/156,684和2016年1月15日提交的美国临时申请号62/279,610的权益的PCT申请，其所有通过引用以其整体结合到本文中。通过EFS-WEB电子提交的序列表的引用本申请中提交的电子提交序列表(名称：3338.035PC03SL.txt，大小：339,610字节；创建日期：2016年2月4日)的内容通过引用以其整体结合到本文中。专利
本专利技术涉及用于选择毒副作用降低的治疗性分子的方法。所述方法可在给予实验室动物之前在体外或在计算机上使用以筛选分子，或所述方法可体内用于实验室动物。专利技术背景在特异性靶向治疗学领域中，一些治疗性分子例如通过与蛋白质的非特异性相互作用、刺激不需要的免疫应答或在组织中蓄积而引起毒副作用。当将治疗性分子给予受试者时，一个重大顾虑是分子的潜在神经毒性。暴露于神经毒性分子可导致脑和外周神经系统损伤，造成长期的生理问题。因此，当给予时，治疗性分子不仅仅在治疗需要的疾病或病症中有效，而且还有可接受的毒性(例如神经毒性)是重要的。最有效的治疗性分子的确定通常包括合成大量经设计靶向细胞中的某一因子的分子并针对活性和毒性测试该大量的分子。虽然可进行动物研究以测定毒性，但进行动物研究(其中由于待测试的大量分子具有有毒性质所致，大量动物死亡)在伦理上或经济上都不可取。因此，需要测定治疗性分子的毒性(例如神经毒性)而不需要动物试验的改进方法。专利技术概述本公开内容提供测试或测定分子的体内急性神经毒性的方法，所述方法包括在与分子接触的神经元细胞中体外测量胞内游离钙浓度的波动(“钙波动”)。本公开内容还提供用于选择具有可耐受的体内急性神经毒性的分子的方法，所述方法包括体外测量与分子接触的体外神经元细胞中的钙波动，其中所述分子显示与对照相当的钙波动水平。涉及测量钙波动的本公开内容的上述方法可进一步包括计算分子(例如包含核苷酸序列的多核苷酸)的序列评分，其中序列评分通过下式(I)计算：(核苷酸序列中C核苷酸或其类似物的数目-核苷酸序列中G核苷酸或其类似物的数目)/核苷酸序列的总核苷酸长度(I)。本专利技术还提供测定包含核苷酸序列的分子的体内急性神经毒性的方法，所述方法包括计算序列评分，其中序列评分通过下式(I)计算：(核苷酸序列中C核苷酸或其类似物的数目-核苷酸序列中G核苷酸或其类似物的数目)/核苷酸序列的总核苷酸长度(I)。本专利技术还提供选择包含具有可耐受的体内急性神经毒性的核苷酸序列的分子的方法，所述方法包括应用下式(I)计算序列评分：(核苷酸序列中C核苷酸或其类似物的数目-核苷酸序列中G核苷酸或其类似物的数目)/核苷酸序列的总核苷酸长度(I)，其中核苷酸序列具有大于或等于0.2的序列评分。在其它实施方案中，本公开内容提供选择具有可耐受的体内急性神经毒性的分子的方法，所述方法包括测量体内耐受性。本专利技术提供其中体内耐受性被分成5个耐受性类别之一的方法。本专利技术还提供可为以下的耐受性类别：1)活动过度；2)活动和觉醒降低；3)运动功能障碍和/或共济失调；4)姿势和呼吸异常；和5)震颤和/或抽搐。在一个实施方案中，可通过将分子注射入哺乳动物脑中，并将以0-20的标度在耐受性类别中将哺乳动物的耐受性分级，来测量体内耐受性。本专利技术的上述方法可进一步包括测量神经元细胞培养物中的微管蛋白强度、靶蛋白的表达或分子的行为表现。本专利技术还提供用于将按照上述方法测试的分子给予需要治疗疾病或病况的受试者的方法。在某些实施方案中，所述分子包括蛋白质、肽、小分子、多核苷酸(例如反义寡核苷酸)或其任何组合。实施方案E1.一种测试或测定分子的体内急性神经毒性的方法，所述方法包括体外测量与分子接触的神经元细胞中的钙波动。E2.实施方案1的方法，其中将所述分子的钙波动与未暴露于所述分子的神经元细胞(“对照细胞”)的钙波动进行比较。E3.实施方案2的方法，其中对照细胞是溶媒对照细胞。E4.实施方案3的方法，其中与溶媒对照细胞中的钙波动相比，与所述分子接触的神经元细胞中的钙波动为约70%或更高、约75%或更高、约80%或更高、约85%或更高、约90%或更高、约95%或更高、约96%或更高、约97%或更高、约98%或更高、约99%或更高、约100%或更高、约120%或更高、约140%或更高、约160%或更高、约180%或更高、约200%或更高、约220%或更高、约240%或更高或约250%或更高。E5.一种选择或鉴定具有可耐受的体内急性神经毒性的分子的方法，所述方法包括体外测量与分子接触的神经元细胞中的钙波动，其中与所述分子接触的神经元细胞显示水平相当于或高于溶媒对照细胞的水平的钙波动。E6.实施方案5的方法，其中与溶媒对照细胞中的钙波动相比，与分子接触的神经元细胞中的钙波动为约70%或更高、约75%或更高、约80%或更高、约85%或更高、约90%或更高、约95%或更高、约96%或更高、约97%或更高、约98%或更高、约99%或更高、约100%或更高、约120%或更高、约140%或更高、约160%或更高、约180%或更高、约200%或更高、约220%或更高、约240%或更高或约250%或更高。E7.实施方案1-6中任一个的方法，其中神经元细胞自哺乳动物原代皮质神经元制备。E8.实施方案中任一个的方法，其中所述分子包括小分子、多核苷酸、蛋白质、肽或其任何组合。E9.实施方案8的方法，其中所述蛋白质包括抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、细胞因子、细胞表面受体、激素、生长因子或其任何组合。E10.实施方案1-9中任一个的方法，其中钙波动为AMPA受体依赖性钙波动。E11.实施方案1-10中任一个的方法，其中钙波动在Mg2+离子存在下测量。E12.实施方案11的方法，其中Mg2+离子的浓度为至少约0.5mM、至少约0.6mM、至少约0.7mM、至少约0.8mM、至少约0.9mM、至少约1mM、至少约1.5mM、至少约2.0mM、至少约2.5mM、至少约3.0mM、至少约4mM、至少约5mM或至少约10mM。E13.实施方案1-12中的一个的方法，其中钙波动通过测量钙染料的荧光来测定。E14.实施方案1-13中的一个的方法，所述方法进一步包括将所述分子给予需要治疗疾病或病况的受试者。E15.实施方案14的方法，其中疾病或病况选自病毒感染、神经病症(例如阿尔茨海默氏痴呆(Alzheimer'sdisease)、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、拳击运动员痴呆(慢性创伤性脑病和其它创伤性脑损伤)、连锁于染色体17的额颞痴呆合并帕金森综合征(FTDP-17)、Lytico-Bodig病(关岛型帕金森综合征-痴呆复合征)、缠结主导型痴呆(tangle-predominantdementia)、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅毒性脑病、半侧巨脑症(Hemimegalencephaly)、结节性脑硬化、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatzdisease)、皮克病(Pick'sdisease)、皮质基底神经节变性、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、脂褐质沉积症、额颞痴本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测试或测定分子的体内急性神经毒性的方法，所述方法包括体外测量与所述分子接触的神经元细胞中的钙波动。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.04 US 62/112058;2015.05.04 US 62/156684;201.一种测试或测定分子的体内急性神经毒性的方法，所述方法包括体外测量与所述分子接触的神经元细胞中的钙波动。2.权利要求1的方法，其中与溶媒对照细胞中的钙波动相比，与所述分子接触的神经元细胞中的钙波动为约70%或更高、约75%或更高、约80%或更高、约85%或更高、约90%或更高、约95%或更高、约96%或更高、约97%或更高、约98%或更高、约99%或更高、约100%或更高、约120%或更高、约140%或更高、约160%或更高、约180%或更高、约200%或更高、约220%或更高、约240%或更高或约250%或更高。3.一种选择或鉴定具有可耐受的体内急性神经毒性的分子的方法，所述方法包括体外测量与所述分子接触的神经元细胞中的钙波动，其中与所述分子接触的神经元细胞显示水平相当于或高于溶媒对照细胞的水平的钙波动。4.权利要求3的方法，其中与溶媒对照细胞中的钙波动相比，与所述分子接触的神经元细胞中的钙波动为约70%或更高、约75%或更高、约80%或更高、约85%或更高、约90%或更高、约95%或更高、约96%或更高、约97%或更高、约98%或更高、约99%或更高、约100%或更高、约120%或更高、约140%或更高、约160%或更高、约180%或更高、约200%或更高、约220%或更高、约240%或更高或约250%或更高。5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述分子包括小分子、多核苷酸、蛋白质、肽或其任何组合。6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述钙波动为AMPA受体依赖性钙波动。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述钙波动在Mg2+离子存在下测量。8.权利要求1或3的方法，其中所述分子包括多核苷酸，所述方法还包括计算序列评...

【专利技术属性】
技术研发人员：RE奥尔森，AM卡卡斯，P哈格多恩，AM赫格，NF尼尔森，李东，JM布朗，SE默瑟，ML詹森，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，罗氏有限公司哥本哈根创新中心，
类型：发明
国别省市：美国,US