中和抗流感结合分子及其用途制造技术

披露了包括双特异性抗体的结合分子，该双特异性抗体包括至少两个抗流感结合结构域，这些结合分子包括具有特异地结合甲型流感病毒的第一结合结构域和特异地结合乙型流感病毒的第二结合结构域的结合分子。

Neutralizing anti influenza binding molecules and their use

The disclosure of the binding molecules including bispecific antibody, the bispecific antibody comprises at least two anti influenza binding domain, these binding molecules including specifically binding to influenza A virus first binding domain and specifically binds to influenza B virus binding domain of second molecules.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】中和抗流感结合分子及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2015年6月1日提交的美国临时专利申请号62/169,272的权益，将其披露内容通过引用以其全文结合在此。对以电子方式提交的序列表的引用将与本申请一起以ASCII文本文件以电子方式提交的、名称为FLUAB_100WO1_SL.txt、创建于2016年5月31日、大小是162,315字节的序列表的内容通过引用以其全文结合在此。
本专利技术涉及具有针对甲型和乙型流感病毒的广泛中和活性的双特异性抗体并且涉及此类抗体的用途。
技术介绍
流感病毒引起年度流感流行和偶然的大流行，这对全世界公共健康构成重大威胁。季节性流感感染与每年200,000-500,000例死亡相关，特别是在幼儿、免疫功能低下的患者和老年人中。死亡率典型地在具有大流行性流感爆发的季节期间进一步增加。仍然存在对用于预防和治疗流感感染(特别是在服务不足的人群中)的强效抗病毒疗法的显著未满足的医疗需求。存在三种类型的流感病毒，甲型、乙型和丙型。大多数流感疾病是由甲型和乙型流感病毒引起的(Thompson等人(2004)JAMA，292：1333-1340；和Zhou等人(2012)ClinInfect.Dis.[临床传染病]54：1427-1436)。流感病毒甲型、乙型和丙型的总体结构是相似的，并且包括围绕中心核的病毒包膜。病毒包膜包括两种表面糖蛋白：血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)；HA介导病毒与靶细胞的结合并进入靶细胞，而NA参与后代病毒从感染细胞的释放。HA蛋白负责与宿主细胞受体的结合以及病毒和宿主细胞膜的融合，并且是保护性体液免疫反应的主要靶标。HA蛋白是三聚体结构的并且包括单一多肽前体HA0的三个相同拷贝，该多肽前体在蛋白水解成熟时裂解成含有球状头部(HA1)和茎区(HA2)的亚稳定的中间体(Wilson等人(1981)Nature[自然]，289：366-373)。膜远侧“球状头部”构成HA1结构的大部分并且包含用于病毒进入的唾液酸结合口袋和主要抗原结构域。从HA2和HA1残基组装的膜近侧“茎部”结构包含融合机器，其在晚期核内体的低pH环境中经历构象变化以便触发膜融合和渗透至细胞中。甲型流感亚型之间的序列同源性程度在HA1中(亚型之间34％-59％同源性)比在HA2区中(51％-80％同源性)低。甲型流感病毒可以基于血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中的基因变异而分类为亚型。血清学上，可以将甲型流感分为18个HA亚型，该18个HA亚型进一步分为两个不同系统发生组：组1(亚型H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17和H18)和组2(亚型H3、H4、H7、H10、H14和H15)。目前，在季节性流行病中，甲型流感H1和H3HA亚型主要与人类疾病相关，而编码H5、H7、H9和H10的病毒由于来自动物的直接传播引起分散性人类爆发。与甲型流感病毒相反，乙型流感病毒限于人类感染，并且乙型流感病毒不基于两种表面糖蛋白分为亚型。事实上，直至20世纪70年代，乙型流感病毒被分类为一个同质的组。然而，在整个20世纪70年代，乙型流感病毒开始分歧为两个抗原性可区分的世系，其在它们的第一个代表之后分别被命名为维多利亚(Victoria)和山形(Yamagata)世系，B/维多利亚/2/87和B/山形/16/88。(Biere等人，(2010)JClinMicrobiol[临床微生物学杂志]，48(4):1425-7；doi:10.1128/JCM.02116-09，电子出版2010年1月27日)。维多利亚和山形世系都促成年度流行病。尽管由乙型流感病毒引起的发病率低于与甲型H3N2流感相关的发病率，但它高于与甲型H1N1流感相关的发病率(Zhou等人(2012)ClinInfect.Dis.[临床传染病]54：1427-1436)。由流感病毒感染引发的中和抗体通常靶向可变HA1球状头部以便防止病毒受体结合且通常是毒株特异性的。中和一种或多种亚型或世系的广泛的交叉反应性抗体是罕见的。最近，已经发现一些抗体可以中和组1和2中的多种亚型甲型流感病毒(Corti等人(2011)Science[科学]333(6044):850-856，Li等人(2012)PNAS109(46):18897-18902，Dreyfus等人(2012)Science[科学]337(6100):1343-1348，以及Nakamura等人(2013)CellHostandMicrobe[宿主细胞和微生物]14:93-103)或两个世系的乙型流感病毒(Dreyfus等人(2012)Science[科学]337(6100):1343-1348和Yasugi等人(2013)PLoSPath[PLoS病原体]9(2):e1003150.doi:10.1371/journal.ppat.1003150)，尽管大多数在广泛的覆盖面的宽度、阻力特征或效力上都有局限性。已经描述了仅一种抗体结合甲型流感和乙型流感HA蛋白，尽管当进行治疗给予时，此抗体在功能上不中和乙型流感病毒或减轻疾病(Dreyfus等人(2012)Science[科学]337(6100):1343-1348)。迄今为止，没有广泛中和或抑制广谱甲型流感病毒和乙型流感病毒感染或减轻由甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的疾病的可用抗体。因此，需要鉴定防御多种流感病毒的新抗体。
技术实现思路
在一个实施例中，提供了特异地结合至甲型流感病毒和乙型流感病毒的分离的结合分子。在一个实施例中，该分离的结合分子包括第一结合结构域，该第一结合结构域能够结合至甲型流感病毒血球凝集素(HA)并中和至少一个组1亚型和至少1个组2亚型的甲型流感病毒；以及第二结合结构域，该第二结合结构域能够结合至乙型流感病毒血球凝集素(HA)并且中和处于至少两种系统发生的不同世系的乙型流感病毒。在一个实施例中，该第一结合结构域能够中和选自以下各项的一种或多种甲型流感病毒组1亚型：H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17、H18及其变体；以及选自以下各项的一种或多种甲型流感病毒组2亚型：H3、H4、H7、H10、H14和H15及其变体。在一个实施例中，该第二结合结构域能够中和处于山形和维多利亚世系两者的乙型流感病毒。在一个实施例中，结合分子的第一结合结构域包括抗甲型流感病毒抗体或其抗原结合片段。在一个实施例中，结合分子的第二结合结构域包括抗乙型流感病毒抗体或其抗原结合片段。在一个实施例中，结合分子包括抗体重链的至少一个VH和抗体轻链的至少一个VL。在更具体的实施例中，第一结合结构域包括抗体重链的至少一个VH和抗体轻链的至少一个VL。在一个实施例中，第二结合结构域包括抗体重链的至少一个VH和抗体轻链的至少一个VL。在一个实施例中，结合分子的第一结合结构域包括一组六个CDR：HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中该组六个CDR具有选自以下各项的氨基酸序列：(a)与以下各项具有至少75％一致性的氨基酸序列：SEQIDNO.:8的HCDR1、SEQIDNO.:9的HCDR2、SEQIDNO.:10的HCDR3、SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异地结合至甲型流感病毒和乙型流感病毒的分离的结合分子，该分离的结合分子包含：(a)第一结合结构域，该第一结合结构域能够结合至甲型流感病毒血球凝集素(HA)并且中和至少一个组1亚型和至少1个组2亚型的甲型流感病毒；以及(b)第二结合结构域，该第二结合结构域能够结合至乙型流感病毒血球凝集素(HA)并且中和处于至少两种系统发生的不同世系中的乙型流感病毒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.01 US 62/1692721.一种特异地结合至甲型流感病毒和乙型流感病毒的分离的结合分子，该分离的结合分子包含：(a)第一结合结构域，该第一结合结构域能够结合至甲型流感病毒血球凝集素(HA)并且中和至少一个组1亚型和至少1个组2亚型的甲型流感病毒；以及(b)第二结合结构域，该第二结合结构域能够结合至乙型流感病毒血球凝集素(HA)并且中和处于至少两种系统发生的不同世系中的乙型流感病毒。2.根据权利要求1所述的分离的结合分子，其中该第一结合结构域能够中和选自以下各项的一种或多种甲型流感病毒组1亚型：H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17、H18及其变体；以及选自以下各项的一种或多种甲型流感病毒组2亚型：H3、H4、H7、H10、H14和H15及其变体。3.根据前述权利要求中任一项所述的分离的结合分子，其中该第二结合结构域能够中和处于山形和维多利亚世系两者中的乙型流感病毒。4.根据前述权利要求中任一项所述的分离的结合分子，其中该第一结合结构域包含抗甲型流感病毒抗体或其抗原结合片段，并且该第二结合结构域包含抗乙型流感病毒抗体或其抗原结合片段。5.根据前述权利要求中任一项所述的分离的结合分子，其中该第一结合结构域包括一组六个CDR：HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中该组六个CDR具有选自以下各项的氨基酸序列：(a)氨基酸序列：SEQIDNO.:8的HCDR1、SEQIDNO.:9的HCDR2、SEQIDNO.:10的HCDR3、SEQIDNO.:3的LCDR1、SEQIDNO.:4的LCDR2和SEQIDNO.:5的LCDR3；以及(b)氨基酸序列：SEQIDNO.:18的HCDR1、SEQIDNO.:19的HCDR2、SEQIDNO.:20的HCDR3、SEQIDNO.:13的LCDR1、SEQIDNO.:14的LCDR2、SEQIDNO.:15的LCDR3。6.根据前述权利要求中任一项所述的分离的结合分子，其中该第一结合结构域包含VH和VL，该VH和VL分别与选自以下各项的VH和VL的氨基酸序列具有至少75％一致性：(a)SEQIDNO.:7的VH和SEQIDNO.:2的VL；以及(b)SEQIDNO.:17的VH和SEQIDNO.:12的VL。7.根据前述权利要求中任一项所述的分离的结合分子，其中该第二结合结构域包括一组六个CDR：HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中该组六个CDR具有选自以下各项的氨基酸序列：(a)氨基酸序列：SEQIDNO.:28的HCDR1、SEQIDNO.:29的HCDR2、SEQIDNO.:30的HCDR3、SEQIDNO.:23的LCDR1、SEQIDNO.:24的LCDR2和SEQIDNO.:25的LCDR3...

【专利技术属性】
技术研发人员：N卡勒瓦德勒莱，朱青，GJ赖尼，高翠华，S卡斯图里兰根，高长寿，
申请(专利权)人：免疫医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US