重组人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的构建、表达与纯化方法技术

本发明专利技术涉及医药生物工程技术领域，是包括涉及编码人甲状旁腺激素小肽的ｃＤＮＡ，和利用其表达载体制备人甲状旁腺激素的方法。本发明专利技术将化学合成的重组人甲状旁腺激素（１－３４）基因用ＰＣＲ扩增后，克隆至表达载体ｐＥＴ－３５ｂ（＋），使重组人甲状旁腺激素（１－３４）融合于纤维素结合结构域（ＣＢＤ↓［ｃｌｏｓ］）的羧基端，并得到高效表达。融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后，经Ｆａｃｔｏｒ　　Ｘａ裂解释放出ｒｈＰＴＨ（１－３４），再通过纤维素树脂亲和层析、Ｃ４反向高效液相色谱纯化得到ｒｈＰＴＨ（１－３４）纯品。每升培养液可获取３ｍｇ高纯度的ｒｈＰＴＨ（１－３４）。经质谱测定，所得样品的分子量为４１１７．０道尔顿，与ｒｈＰＴＨ（１－３４）理论分子量一致。本发明专利技术极大程度上丰富了该多肽在医药生物工程技术领域的研究和开发。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药生物工程
，是包括涉及编码人甲状旁腺激素小肽的cDNA，和利用其表达载体制备人甲状旁腺激素的方法。
技术介绍
甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)是由甲状旁腺的主细胞合成并分泌的一种直链多肽。最初合成的是含115个氨基酸的前甲状旁腺素原(prepro-PTH)，在粗面内质网内去掉N-端25个氨基酸残基形成甲状旁腺素原(pro-PTH)，后者再在高尔基体内从N-端去掉一个六肽，形成含84个氨基酸的PTH。PTH是调节血钙水平的重要激素，其分泌主要受血钙浓度的调节，血钙浓度的轻微降低直接刺激甲状旁腺分泌PTH，血钙浓度升高时PTH分泌则减少。PTH可刺激骨吸收，使钙、磷从骨骼中释放入血；促进肾小管对钙重吸收、抑制磷重吸收，促进25-(OH)D3在肾脏内向1，25-(OH)2D3转化；而1，25-(OH)2D3促进肠道对钙、磷的重吸收，以上作用的共同结果是升高血钙及降低血磷。另一方面，除促进破骨细胞骨吸收之外，PTH还能引起成骨细胞数目的增加，刺激骨形成，这一特点使得PTH作为骨质疏松症治疗及预防性药物受到关注。PTH的受体结合区从Hi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的构建、表达与纯化方法，其特征在于：ａ．重组人甲状旁腺激素的构建：以下述基因序列为模板，ＣＣＧＣＧＧＧＴＡＴＴＧＡＧＧＧＴＣＧＣＴＣＣＧＴＴＴＣＴＧＡＡＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＴＧＣＡＣＡＡＣＣＴＧＧＧ ＴＡＡＡＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＣＧＴＧＴＴＧＡＡＴＧＧＣＴＧＣＧＴＡＡＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＡＣＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＡＣＴＣＧＡＧ，实线处分别为ＳａｃⅡ、ＸｈｏⅠ的酶切位点，虚线处序列编码ＦａｃｔｏｒＸａ识别位点Ｉ ｌｅ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ↓，以ＧＧＡＣＴＧＣＣＧＣＧＧＧＴＡＴＴＧＡＧＧＧＴＣＧＣＴＣＣＧＴＴＴＣ为上游...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘建宁，孙自勇，张菁，陈均勇，陈新园，
申请(专利权)人：南京大学生物制药工程研究中心，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]