一种同时检测银杏叶中三种黄酮类化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测槲皮素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷的方法，属于分析检测技术领域。所述方法包括分别制备含有检测槲皮素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷的对照品和供试品，采用高效液相色谱法，检测波长为328nm‑378nm中的任意值。本发明专利技术提供的同时检测槲皮素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷的方法为银杏制剂质量控制的主要指标提供了便利。

A method for simultaneous detection of three flavonoids in Ginkgo biloba leaves

The invention discloses a method for simultaneous detection of O beta 3 quercetin D glucose group (1 2) alpha L rhamnoside, narcissin, 3 O kaempferol phenol beta D glucose group (1 2) method alpha L rhamnoside. Which belongs to the technical field of detection. The method includes the detection of quercetin were prepared with 3 O D beta glucosyl (1 2) alpha L rhamnoside, narcissin, 3 O kaempferol phenol beta D glucose group (1 2) control alpha L rhamnoside and for the test, using high performance liquid chromatography, the detection wavelength was 328nm arbitrary value in 378nm. The present invention provides simultaneous detection of quercetin O D 3 beta glucose group (1 2) alpha L rhamnoside, narcissin, 3 O kaempferol phenol beta D glucose group (1 2) method alpha L rhamnoside provides convenience as the main indicators of the quality control of Ginkgo biloba.

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测银杏叶中三种黄酮类化合物的方法
本专利技术涉及分析检测
，具体涉及一种同时检测槲皮素、水仙苷和山奈酚的方法。
技术介绍
银杏叶为银杏科植物银杏(GinkgobilobaL.)的干燥叶，具有活血化瘀、通络止痛、敛肺平喘、化浊降脂的功效。德国Schwabe公司最早利用溶剂萃取专利技术生产标准银杏叶提取物(EGb761)并开发Teboninforte制剂。随后法国、日本开发了一系列银杏叶制剂。目前我国进口药品主要是德国Schwabe公司的金纳多和法国Beaufour-Ipsen公司的达纳康。据统计，国际上的银杏制品已达30多种，一直位居美国草药市场销售的前三位，全球银杏叶制剂的年销售额达50亿美元，已成为植物药制剂的全球冠军品种。我国银杏叶提取物及其制剂的加工始于20世纪90年代。近20年来，各级地方政府高度重视银杏产业的发展，银杏种植面积逐年扩大，产量逐年上升，已占国际市场需求量的1/6。以银杏叶为原料加工成保健功能食品和药品，在中国已形成影响力较大的医药集团，国内零售市场上可监测到的植物药类心血管用药有300多种，银杏类制剂产品占据了近30％的市场份额。可见，银杏叶生物活性物质的研究和开发，在我国已成为一个巨大的产业。但我国银杏叶药品由于剂型单一，低水平重复产品较多，缺少高端品种，缺少国际竟争力，国际市场占有也在率逐年下降。因此，根据我国银杏产业的发展现状，急需有技术突破，对银杏叶及其深加工产品进行全面质量控制，提高银杏叶产品品质，提高国际竞争力。银杏叶中含有的黄酮类成分有：银杏双黄酮(ginkgetin)、水仙苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素(isorhamnetin)等；含白果醇(ginnol)、白果酮(ginnone)、廿九烷、廿八醇、α-已烯醛、β-谷甾醇、豆甾醇及维生素等成分，这些成分被作为银杏制剂质量控制的主要指标。因此，如能同时检测出银杏叶中的多种功效成分的方法，将为开发银杏叶深加工产品以及食品药品的全面质量控制提高产品质量，提供一定的便利。为此，国内国际已有多篇文献，中国专利文献106153761A公开了同时检测银杏叶中某一种或几种成分的方法，但尚未发现同时检测“水仙苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷”的方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中尚未发现同时检测“水仙苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷”的方法的缺陷，从而提供一种同时检测槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷的方法。为此，本专利技术的技术方案如下：一种同时检测银杏叶中三种黄酮类化合物的方法，分别制备含有检测槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷的对照品溶液和供试品溶液，采用高效液相色谱法，检测波长为328nm-378nm中的任意值。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为固定相，以乙腈和磷酸水溶液的混合液为流动相，所述流动相中，磷酸水溶液的浓度为0.1-0.4％；或者，洗脱程序为梯度洗脱。所述梯度洗脱的洗脱程序为：70分钟内，乙腈占流动相比例由15％增长到50％；洗脱流速为：每分钟0.5-1.5ml；柱温为20-40℃。所述检测波长为346nm或250nm。色谱条件如下：流动相中，磷酸水溶液的浓度为0.4％；流速为每分钟1ml；柱温为30℃；洗脱程序为：。采用外标法，分别吸取对照品溶液及供试品溶液注入液相色谱仪进行测定，以峰面积或峰高计算相应成分其在供试品中的含量。所述供试品溶液按如下方法制备：步骤(1):取银杏叶，粉碎，用含有乙醇的水溶液提取，过滤，低温静置；步骤(2):取下层液，加水冷藏，过滤，浓缩滤液，放至室温，加入乙醇溶液冷藏，过滤，浓缩,滤液，重复加乙醇过滤浓缩的步骤；步骤(3):向浓缩液中加水，通过大孔吸附树脂进行吸附处理，收集流出液；步骤(4):向流出液加入药学上可接受的辅料及水，即得供试品；槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷对照品、水仙苷对照品、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷对照品的浓度均为0.01-0.1mg/ml。步骤(1)中，所述含有乙醇的水溶液的用量为银杏叶重量的5-15倍；浓缩滤液至银杏叶重量的0.1-0.5倍；步骤(2)中，加水至银杏叶重量的0.5-5倍；浓缩滤液至银杏叶重量的0.1-0.5倍；加入乙醇溶液的量为使乙醇含量至70％-90％；步骤(3)中，向浓缩液中加水至银杏叶重量的0.5-5倍。水仙苷对照品浓度＞山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷对照品浓度＞槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷对照品浓度。对照品溶液按如下方法制备：取槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷适量，称定，加甲醇制成每1ml含0.05mg、0.07mg、0.06mg、的混合溶液即得。本专利技术技术方案，具有如下优点：1.为银杏叶及其制剂质量控制指标的选取提供了便利。2.为开发银杏叶深加工产品以及食品药品的全面质量控制、提高产品质量提供了研究基础、创造了有利条件。3.符合药品质量控制办法的检测目的和要求，适用于含有银杏叶的药品在生产制造过程中样品的分析检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术专属性试验甲醇色谱图；图2是本专利技术专属性试验纯水色谱图；图3是本专利技术混合对照品色谱图；图4是本专利技术供试品色谱图；其中，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷浓度为0.04330mg/ml、水仙苷浓度为0.07722mg/ml、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷浓度为0.06029mg/ml；1为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷；2为水仙苷；3为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷。具体实施方式提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或相近似的产品，均落在本专利技术的保护范围之内。实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。本专利技术中只列举检测波长为246nm的方法学验证以及供试品测量的实验数据，本专利技术专利技术人于申请日前也做过检测波长为250nm本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测银杏叶中三种黄酮类化合物的方法，其特征在于，分别制备含有待测槲皮素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷的对照品溶液和供试品溶液，采用高效液相色谱法，检测波长为328nm‑378nm中的任意值。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测银杏叶中三种黄酮类化合物的方法，其特征在于，分别制备含有待测槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷的对照品溶液和供试品溶液，采用高效液相色谱法，检测波长为328nm-378nm中的任意值。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为固定相，以乙腈和磷酸水溶液的混合液为流动相，所述流动相中，磷酸水溶液的浓度为0.1-0.4％；或者，洗脱程序为梯度洗脱。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序为：70分钟内，乙腈占流动相比例由15％增长到50％；洗脱流速为：每分钟0.5-1.5ml；柱温为20-40℃。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，所述检测波长为346nm或250nm。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，色谱条件如下：流动相中，磷酸水溶液的浓度为0.4％；流速为每分钟1ml；柱温为30℃；洗脱程序为：。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用外标法，分别吸取对照品溶液及供试品溶液注入液相色谱仪进行测定，以峰面积或峰高计算相应成分在供试品中的含量。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液按如下方法制备：步骤(1)：取银杏叶，粉碎，用含有乙醇的水溶液提取，过滤，低温静置；步骤(2)：取下层液，加水冷藏，过滤，浓缩滤液，放至室温，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王锋，杨满辉，
申请(专利权)人：朗致集团江西医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36