淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法，采用HPLC‑MS/MS法，同时测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量；所述方法包括：(1)建立16种化学成分的标准曲线；(2)获得淫羊藿提取物中各16种化学成分的多反应离子色谱图；(3)确定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量；本发明专利技术的方法具有灵敏度高，可靠性强，高效快速的特点，通过测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量，可以更有效地对淫羊藿提取物进行质量控制，从而保证淫羊藿提取物的临床疗效。

Determination of 16 chemical components in Epimedium extract

The invention discloses a method for the determination of 16 kinds of chemical composition content of Epimedium extract, using HPLC MS/MS method for simultaneous determination of 16 kinds of chemical constituents in Epimedium extract; the method comprises the following steps: (1) establishing a standard curve of 16 chemical constituents; (2) to obtain multiple reaction ion chromatogram of Epimedium extract in all 16 kinds of chemical components; (3) to determine the content of 16 kinds of chemical constituents in Epimedium extract; the method of the invention has the advantages of high sensitivity, strong reliability, high efficient and fast characteristics, through the determination of 16 kinds of chemical composition content of Epimedium extract, can control the quality of Epimedium extract is more effective, so as to ensure the the clinical curative effect of Epimedium extract.

【技术实现步骤摘要】
淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法
本专利技术涉及中药质量分析领域，特别涉及淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法。
技术介绍
淫羊藿EpimediiHerba来源于小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属EpimediumL.植物，是中国传统补益类中药，有悠久的用药历史。《中国药典》2015年版收载了4种淫羊藿，即淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.、箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.、朝鲜淫羊EpimediumkoreanumNakai.的干燥叶。本品味辛、甘，性温，归肝、肾经，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用。淫羊藿中含有黄酮类、木脂素类、苯酚苷类、生物碱类、多糖类等多种化学成分，其主要药效成分为黄酮类化合物。现代药理研究表明，淫羊藿具有增强免疫力、改善心血管系统功能、抗炎、抗肿瘤、促进骨细胞增殖等药理作用，具有广阔的用药前景。但淫羊藿药材中总黄酮的含量较低；随着中药提取技术的日益发展，淫羊藿提取物作为淫羊藿药材的加工产物，逐渐成为众多中药制剂的重要原料。目前，淫羊藿提取物的质量控制多采用高效液相色谱法、紫外分光光度法等方法对淫羊藿提取物中单一或者少量成分的含量进行测定；一方面，上述的检测方法灵敏度、专属性低，另一方面，淫羊藿提取物所含化学成分繁多，仅控制一个或者少量成分并不能有效地对其进行质量控制，因此需要一种全新的淫羊藿提取物中化学成分含量的测定方法，以能够更加可信、更加全面的对淫羊藿提取物进行质量控制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法，以实现更加可信、更加全面的的对淫羊藿提取物进行质量控制。具体技术方案如下：一种淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法，采用HPLC-MS/MS法，同时测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量；所述16种化学成分包括：宝霍苷II、宝霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金丝桃苷、绿原酸、木兰花碱、新绿原酸、隐绿原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，所述方法包括：(1)建立16种化学成分的标准曲线分别精密称定对照品宝霍苷II、宝霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金丝桃苷、绿原酸、木兰花碱、新绿原酸、隐绿原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，用体积分数为70-100％的甲醇溶解，制成具有已知浓度的各对照品储备溶液；然后分别精密吸取16种对照品储备溶液并将其混合，用体积分数为70-100％的甲醇稀释，配制成分别具有已知浓度的16种化学成分的对照品混合储备液；用体积分数为70-100％的甲醇将所述对照品混合储备液稀释成一系列分别具有不同已知浓度的16种化学成分的对照品混合溶液；在相同的预设色谱条件和质谱条件下，将V1体积的各浓度的对照品混合溶液分别注入高效液相色谱-质谱联用仪中，获得各对照品在不同浓度下的多反应离子色谱图；以各对照品的色谱峰峰面积Y为纵坐标，以各对照品的浓度X为横坐标，通过线性回归运算得到各化学成分的标准曲线；(2)获得淫羊藿提取物中各16种化学成分的多反应离子色谱图将质量M的淫羊藿提取物，用体积分数70-100％的甲醇溶解至体积V2，取上清液过滤后作为供试品溶液；在与以上(1)步骤中相同的预设色谱条件和质谱条件下，取体积V1供试品溶液注入高效液相色谱-质谱联用仪中，获得淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图；(3)确定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量根据淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图的峰面积，及各化学成分的标准曲线，确定淫羊藿提取物中各化学成分的含量。在本专利技术的一种具体实施方式中，所述确定淫羊藿提取物中各化学成分的含量，包括：从各化学成分的标准曲线中分别确定淫羊藿提取物中各化学成分的峰面积对应的浓度C浓，并按照下列公式分别计算出供试品中16种化学成分含量；在本专利技术的一种具体实施方式中，通过线性回归运算得到各化学成分的标准曲线，具体为：采用加权最小二乘法进行线性回归运算得到标准曲线，权重系数为1/X。在本专利技术的一种具体实施方式中，预设的色谱条件包括：色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶的固定相；流动相：A相为0.05％-0.5％甲酸-水，B相为乙腈；梯度洗脱；柱温：25-35℃；流速：0.3-1.0mL/分钟；进样量：2-10μL。在本专利技术的一种具体实施方式中，预设的色谱条件包括：色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶的固定相；流动相：A相为0.1％甲酸-水，B相为乙腈；梯度洗脱；柱温：30℃；流速：0.3mL/分钟；进样量：5μL；洗脱程序为：0-4min，20％-50％B；4-5min，50％-60％B；5-15min，60％-70％B。在本专利技术的一种具体实施方式中，预设的质谱条件包括：离子化方式：电喷雾离子化；多反应离子监测模式，负离子扫描；干燥气体温度：330-370℃；干燥气体流速：7-15L/min；喷雾气压力：17-22psi；干燥气体和雾化气体：氮气。在本专利技术的一种具体实施方式中，预设的质谱条件包括：离子化方式：电喷雾离子化；多反应离子监测模式，负离子扫描；干燥气体温度：350℃；干燥气体流速：9L/min；喷雾气压力：20psi；干燥气体和雾化气体：氮气。在本专利技术的一种具体实施方式中，质谱参数如下：在本专利技术的一种具体实施方式中，淫羊藿提取物由以下方法获得：将淫羊藿叶在体积分数为50-90％的乙醇，优选为70％的乙醇中加热回流提取0.5-2小时，乙醇与淫羊藿叶的重量比为(14-20)：1；回流提取次数1-4次；合并提取液，减压干燥，得淫羊藿提取物。在本专利技术的一种具体实施方式中，体积分数为70-100％的甲醇具体为甲醇。本专利技术采用HPLC-MS/MS法同时测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量，具有灵敏度高，可靠性强，高效快速的特点，通过测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量，可以更有效地对淫羊藿提取物进行质量控制，从而保证淫羊藿提取物的临床疗效。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1中的A图为16种化学成分对照品在一定浓度下的多反应离子色谱图；图1中的B图为淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图；图1中，各数字标号分别代表：1.木兰花碱；2.新绿原酸；3.绿原酸；4.隐绿原酸；5.紫云英苷；6.槲皮苷；7.金丝桃苷；8.宝霍苷II；9.宝霍苷I；10.淫羊藿次苷I；11.朝霍定B；12.箭霍苷B；13.朝霍定C；14.朝霍定A；15.箭霍苷A；16.淫羊藿苷。具体实施方式本专利技术采用HPLC-MS/MS法(高效液相色谱-串联质谱法)同时测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量。下面将结合具体实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技本文档来自技高网...

【技术保护点】
淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法，其特征在于，采用HPLC‑MS/MS法，同时测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量；所述16种化学成分包括：宝霍苷II、宝霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金丝桃苷、绿原酸、木兰花碱、新绿原酸、隐绿原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，所述方法包括：(1)建立16种化学成分的标准曲线分别精密称定对照品宝霍苷II、宝霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金丝桃苷、绿原酸、木兰花碱、新绿原酸、隐绿原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，用体积分数为70‑100％的甲醇溶解，制成具有已知浓度的各对照品储备溶液；然后分别精密吸取16种对照品储备溶液并将其混合，用体积分数为70‑100％的甲醇稀释，配制成分别具有已知浓度的16种化学成分的对照品混合储备液；用体积分数为70‑100％的甲醇将所述对照品混合储备液稀释成一系列分别具有不同已知浓度的16种化学成分的对照品混合溶液；在相同的预设色谱条件和质谱条件下，将V1体积的各浓度的对照品混合溶液分别注入高效液相色谱‑质谱联用仪中，获得各对照品在不同浓度下的多反应离子色谱图；以各对照品的色谱峰峰面积Y为纵坐标，以各对照品的浓度X为横坐标，通过线性回归运算得到各化学成分的标准曲线；(2)获得淫羊藿提取物中各16种化学成分的多反应离子色谱图将质量M的淫羊藿提取物，用体积分数70‑100％的甲醇溶解至体积V2，取上清液过滤后作为供试品溶液；在与以上(1)步骤中相同的预设色谱条件和质谱条件下，取体积V1供试品溶液注入高效液相色谱‑质谱联用仪中，获得淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图；(3)确定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量根据淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图的峰面积，及各化学成分的标准曲线，确定淫羊藿提取物中各化学成分的含量。...

【技术特征摘要】
1.淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法，其特征在于，采用HPLC-MS/MS法，同时测定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量；所述16种化学成分包括：宝霍苷II、宝霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金丝桃苷、绿原酸、木兰花碱、新绿原酸、隐绿原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，所述方法包括：(1)建立16种化学成分的标准曲线分别精密称定对照品宝霍苷II、宝霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金丝桃苷、绿原酸、木兰花碱、新绿原酸、隐绿原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，用体积分数为70-100％的甲醇溶解，制成具有已知浓度的各对照品储备溶液；然后分别精密吸取16种对照品储备溶液并将其混合，用体积分数为70-100％的甲醇稀释，配制成分别具有已知浓度的16种化学成分的对照品混合储备液；用体积分数为70-100％的甲醇将所述对照品混合储备液稀释成一系列分别具有不同已知浓度的16种化学成分的对照品混合溶液；在相同的预设色谱条件和质谱条件下，将V1体积的各浓度的对照品混合溶液分别注入高效液相色谱-质谱联用仪中，获得各对照品在不同浓度下的多反应离子色谱图；以各对照品的色谱峰峰面积Y为纵坐标，以各对照品的浓度X为横坐标，通过线性回归运算得到各化学成分的标准曲线；(2)获得淫羊藿提取物中各16种化学成分的多反应离子色谱图将质量M的淫羊藿提取物，用体积分数70-100％的甲醇溶解至体积V2，取上清液过滤后作为供试品溶液；在与以上(1)步骤中相同的预设色谱条件和质谱条件下，取体积V1供试品溶液注入高效液相色谱-质谱联用仪中，获得淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图；(3)确定淫羊藿提取物中16种化学成分的含量根据淫羊藿提取物中各化学成分的多反应离子色谱图的峰面积，及各化学成分的标准曲线，确定淫羊藿提取物中各化学成分的含量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述确定淫羊藿提取物中各化学成分的含量，包括：从各化学成...

【专利技术属性】
技术研发人员：何俊，孙梦洁，欧阳慧子，常艳旭，高秀梅，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津,12