一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法技术

本发明专利技术适用于禽肉药物残留检测技术领域，提供了一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，包括以下步骤：A、配制标准储备液；B、样液提取；C、样液衍生化、萃取处理；D、固相萃取净化；E、将步骤D中得到的样液进行液相色谱分析，分析条件如下：色谱柱：CN柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈+异丙醇+冰乙酸+0.05％庚烷磺酸钠溶液，体积比为10：10：0.1：80；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；柱温：30℃；F、用标准曲线计算待测物质浓度。本发明专利技术从色谱分析条件的检测波长、色谱柱、流动相等五个方面通过试验对比，得出优化测定方案，检出限达到5.0ng/mL且加标回收效果理想。

A method for determination of nitrofuran residues in poultry meat

【技术实现步骤摘要】
一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法
本专利技术涉及禽肉药物残留检测
，尤其涉及一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法。
技术介绍
硝基呋喃类药物是人工合成的具有5-硝基基本结构的广谱抗菌药物，因其具有广谱抗菌作用和促生长作用曾广泛应用于畜禽和水产品等养殖行业中疾病的预防和治疗，它主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因等4种。其中呋喃唑酮和呋喃它酮价格便宜，疗效确切，广泛应用于家畜、家禽的痢疾、肠炎的预防和治疗。呋喃西林主要用于家禽白痢疾和兔球虫病的预防和治疗，但由于毒性较大，一般用作外用消毒药物。呋喃妥因主要用于水产养殖中疾病的预防和治疗。经过长期研究表明硝基呋喃类药物及其代谢物具有很大的危害，主要具有潜在致癌和诱导有机体产生突变的物质。呋喃类药物的半衰期很短，在动物体内数小时内可降解，但其代谢产物能与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物，残留时间达数周之久，甚至在蒸煮、烘烤、蜜碎和微波加热过程中也无法有效降解。因此检测硝基呋喃类药物的代谢产物，才能起到较好的监控作用。欧盟2377/90/EEC已全面禁止硝基呋喃类抗菌药物作为生长剂和杀菌剂用在动物饲料中，欧盟要求以代谢物为目标分析物，检测硝基呋喃原药残留。硝基呋喃类代谢产物分别是3-氨基-2-嗯唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-嗯唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)、1-氨基-乙内酰脲(AHD)。由于硝基呋喃类药物的慢性毒性和世界各国对其的禁用，其在体内的残留分析研究成为热点，该类药物的单残留检测发展比较迅速，文献报道的呋喃类药物残留的分析方法中的HPLC、SPE-HPLC、LC-MS等方法因其测定成分单一，或者检测灵敏度不高等缺点而不能满足检测一种基质是否同时含有四种药物的需要，故发展用一种方法可同时检测在同一基质中的四种药物则非常必要。目前，硝基呋喃类代谢物残留检测方法主要有液相色谱—质谱法和液相色谱—串联质谱法等。庞国芳用0.2mol/L盐酸水解禽肉组织中与蛋白结合的硝基呋喃代谢物，用2-硝基苯甲醛37℃衍生16小时。上清液调pH＝7.4后，用EN固相萃取柱净化，乙酸乙酯洗脱，流动相定容。检出限AMOZ，AOZ为5μg/kg，SEM、AHD分别为10μg/kg和5μg/kg；RosaDraisci报道采用高效液相-二极管阵列检测了鸡蛋中的呋喃西林、呋喃它酮，又用液相-质谱技术对其进行验证；蒋原报道采用高效液相色谱-电喷雾多级质谱同时快速、准确测定了蜂蜜中硝基呋喃代谢物。方法是硝基呋喃代谢物在酸性条件下经过邻硝基苯甲醛衍生化，加标样品平均回收率达到64％～79％，检测线限到10μg/kg。综上可知，现有技术在实际使用上显然存在不便与缺陷，所以有必要加以改进。
技术实现思路
针对上述的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，其从液相色谱分析条件的检测波长、色谱柱、流动相、流速、柱温五个方面通过试验对比，得出优化测定方案，检出限达到5.0ng/mL且加标回收效果理想。为了实现上述目的，本专利技术提供一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，包括以下步骤：A、配制标准储备液；称取呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物标准品各10mg，加甲醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，-18℃下保存；B、样液提取；称取样品置于离心管中，加入固体提取剂和液体提取剂，混合后离心取上清液，重复提取一次，合并上清液；C、样液衍生化、萃取处理；D、固相萃取净化；将C18-CN混合净化柱依次用5mL甲醇、5mL水活化后，加入5％的甲醇水溶解液以1mL/min的速度过柱，待样液全部过完后用5mL水淋洗柱子并抽干，弃去流出液，用2mL甲醇洗脱，接收全部洗脱液40℃下氮气吹干；残留物用1.0mL的乙腈溶解，振荡混匀，用0.22μm的滤膜过滤；E、将步骤D中得到的样液进行液相色谱分析，分析条件如下：色谱柱：CN柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈+异丙醇+冰乙酸+0.05％庚烷磺酸钠溶液，体积比为10：10：0.1：80；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；进样量：20μL；柱温：30℃；F、用标准曲线计算待测物质浓度。根据本专利技术的禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，所述固体提取剂为酸性氧化铝和硅胶的混合粉末。根据本专利技术的禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，所述液体提取剂为三氯乙酸-甲醇溶液。根据本专利技术的禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，所述衍生化试剂具体为：吸取100μL2-氯苯甲醛溶解于5mL冰乙酸和20mL甲醇的混合液中。本专利技术提供一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，该方法首先需配制待测物质的标准储备液作为对比分析基础，然后对样品进行样液提取，并对提取的样液进行衍生化、萃取处理，上述步骤完成后，将样液与标准储备液进行液相色谱分析，通过标准储备液所得色谱图的标准曲线得到回归方程，通过回归方程计算样品的待测物质浓度。本专利技术对比现有技术，在前处理中进行了衍生化处理，使分析物在紫外区响应更加灵敏，并确立了液相色谱分析最佳分析条件：乙腈：异丙醇：冰乙酸：0.05％庚烷磺酸钠溶液的体积比为10:10:0.1:80；流速为1.0mL/min；检测波长：280nm。结果表明，该方法操作简单、提取快捷、准确性高、重复性强，适用于禽肉中硝基呋喃类药物残留量的分析测定。附图说明图1是硝基呋喃代谢物标准溶液色谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供了一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法。该方法具体分析过程包括如下步骤：步骤一、配制标准储备液。准确称取呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物标准品各10mg，加甲醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，-18℃下保存、备用。步骤二、样液提取。称取样品置于离心管中，加入固体提取剂和液体提取剂，混合后离心取上清液，重复提取一次，合并上清液。以10g样品为例，将样品置于离心管中，加入固体提取剂及液体提取剂，提取剂添加量依样品重量而定，此处固体提取剂和液体提取剂的添加量分别为7g和10mL，将样品与提取剂漩涡混合后于40℃水浴中超声30min，然后于6000r/min转速下离心10min，取上清液，残渣中再加入10mL液体提取剂，重复提取一次，合并上清液。步骤三、样液衍生化、萃取处理。上清液中加入衍生化试剂，于恒温水浴中超声处理，取出冷却至室温；然后调节pH至7.0，并用乙酸乙酯进行萃取，重复操作一次，合并乙酸乙酯层于水浴中减压旋转蒸发至干，然后加入甲醇水溶液溶解残渣。具体的，以10g样品的上清液为例，加入衍生化试剂0.5mL，于40℃恒温水浴中超声60min，取出冷却至室温，用NaOH调节pH至为7.0，加入15mL乙酸乙酯萃取，4000r/min离心10min，取出乙酸乙酯层于梨形瓶中，再加入15mL乙酸乙酯，重复操作一次，合并乙酸乙酯层并于35℃水浴中减压旋转蒸发至干，加入5mL5％的甲醇水溶液溶解残渣。步骤四、固相萃取净化。将C18-CN混合净化柱依次用5mL甲醇、5mL水活化后，加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、配制标准储备液；称取呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物标准品各10mg，加甲醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，‑18℃下保存；B、样液提取；称取样品置于离心管中，加入固体提取剂和液体提取剂，混合后离心取上清液，重复提取一次，合并上清液；C、样液衍生化、萃取处理；D、固相萃取净化；将C18‑CN混合净化柱依次用5mL甲醇、5mL水活化后，加入5％的甲醇水溶解液以1mL/min的速度过柱，待样液全部过完后用5mL水淋洗柱子并抽干，弃去流出液，用2mL甲醇洗脱，接收全部洗脱液40℃下氮气吹干；残留物用1.0mL的乙腈溶解，振荡混匀，用0.22μm的滤膜过滤；E、将步骤D中得到的样液进行液相色谱分析，分析条件如下：色谱柱：CN柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈+异丙醇+冰乙酸+0.05％庚烷磺酸钠溶液，体积比为10：10：0.1：80；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；进样量：20μL；柱温：30℃；F、用标准曲线计算待测物质浓度。

【技术特征摘要】
1.一种禽肉中硝基呋喃类药物残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、配制标准储备液；称取呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物标准品各10mg，加甲醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，-18℃下保存；B、样液提取；称取样品置于离心管中，加入固体提取剂和液体提取剂，混合后离心取上清液，重复提取一次，合并上清液；C、样液衍生化、萃取处理；D、固相萃取净化；将C18-CN混合净化柱依次用5mL甲醇、5mL水活化后，加入5％的甲醇水溶解液以1mL/min的速度过柱，待样液全部过完后用5mL水淋洗柱子并抽干，弃去流出液，用2mL甲醇洗脱，接收全部洗脱液40℃下氮气吹干；残留物用1.0mL的乙腈溶解，振荡混匀，用0.22μm的滤膜过滤；E、将步骤D...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜雅红，王兆全，王向阳，尹宝华，
申请(专利权)人：昌邑市检验检测中心，
类型：发明
国别省市：山东,37