一种检测肉类食品中抗生素残留的方法技术

一种检测肉类食品中抗生素残留的方法，包括以下步骤：(1)利用粉碎机将待测的肉类食品制成匀浆液，将匀浆液置于离心管中，依次加入破乳剂、正己烷、以及磷酸盐缓冲溶液，超声提取，离心后，得到待净化液；(2)将待净化液转移至固相萃取柱中，进行净化，收集洗脱液。在水浴中用氮气吹至近干，加入乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)用液相色谱-串联质谱法测定和确证，外标法定量。根据本发明专利技术的检测肉类食品中抗生素残留的方法，能够有效提高检测结果的准确性，为食品安全提供有益保障。

【技术实现步骤摘要】
一种检测肉类食品中抗生素残留的方法
本专利技术涉及一种检测肉类食品中抗生素残留的方法。
技术介绍
抗生素广泛应用于治疗动物的多种细菌性感染疾病。抗生素类药物主要是通过注射、口服、饮水等方式进入动物体内。在休药期结束前注射部位的肌肉和奶中会残留超量的抗生素。兽医在临床用药时，将不同的抗生素联合起来使用，也容易造成抗生素类药物在动物体内残留，导致肉类食品污染。有些抗生素类还被作为饲料添加剂，用来预防动物细菌性疾病和促进动物生长而被长期使用。如土霉素添加剂、金霉素添加剂等经口腔进入动物体内，短时间不能完全排出，极易在体内蓄积，造成肉类食品中的抗生素药物残留。由于抗生素的广泛使用，使得细菌的耐药性不断增加，食用含抗生素残留的肉类食品后，人体内细菌的耐药性增加。同时，动物体内的耐药性菌株的耐药性也可能转移到人体细菌中，从而对人类产生极大的危害。因此，对肉类食品进行抗生素残留检测对保证食品安全具有重要意义。目前，对肉类食品中的抗生素残留检测主要有酶联免疫法和高效液相色谱法。这些检测方法都涉及到样品前处理步骤，需要从肉类食品中提取出抗生素。由于肉类食品中含有蛋白质、脂肪、糖类等成分，萃取时有机相与水相的界面不清，乳化状态很严重。采用常规的化学试剂并不能完全萃取出其中的抗生素成分，从而造成检测结果的准确度不高。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述
技术介绍
中存在的某些和某个问题，提供一种检测肉类食品中抗生素残留的方法。根据本专利技术的检测肉类食品中抗生素残留的方法，包括以下步骤：(1)利用粉碎机将待测的肉类食品制成匀浆液，称取3-5g的匀浆液于离心管中，加入0.5-1g的破乳剂，超声振荡15-30分钟后，加入30-50mL正己烷，分散均匀后，加入50-100mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10-20分钟，离心后，弃去上层正己烷，移取10mL下层清液，加10mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，待净化；(2)将步骤(1)中的待净化液转移至固相萃取柱中，依次用10mL水，10mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用10mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)用液相色谱-串联质谱法测定和确证，外标法定量。破乳剂是一种表面活性物质，它能使乳化状的液体结构破坏，以达到乳化液中各相分离开来的目的。破乳剂可以是化学破乳剂，例如聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚或聚氧乙烯聚氧丙烯十八醇醚；也可以是生物破乳剂，例如含芽孢杆菌的生物破乳剂。化学破乳剂成本低、保质期长。生物破乳剂需冷冻保存，但破乳效果通常要高于化学破乳剂。在本专利技术的检测方法中，在样品前处理步骤中，加入一定量的破乳剂来消除乳化现象，促使肉类食品中的蛋白质、脂肪、糖类与抗生素有效分离，提高样品中抗生素的溶出率。再与合适的萃取剂配合，在合适的pH值条件下，高收率地提取出肉类食品中的抗生素。从而在源头上保证了最终检测结果的准确性。根据本专利技术的检测肉类食品中抗生素残留的方法，能够有效提高检测结果的准确性，为食品安全提供有益保障。具体实施方式下面通过具体实施例详细描述本专利技术的检测肉类食品中抗生素残留的方法。本领域技术人员应当理解，下面描述的实施例仅是对本专利技术的示例性说明，而非用于对其作出任何限制。以经初步筛查(例如微生物抑制试纸法)含有抗生素的猪肉为样品，检测其8种大环内酯类抗生素药物(螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素)残留的具体含量，来介绍本专利技术的实施过程和效果。1.样品液A制备1.1提取步骤利用粉碎机将待测的猪肉制成匀浆液，称取5g的匀浆液于离心管中，加入1g的聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚，超声振荡30分钟后，加入50mL正己烷，分散均匀后，加入100mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取15分钟，经7000r/min离心10分钟后，弃去上层浑浊液，移取10mL下层清液，加10mL磷酸盐缓冲溶液混匀后待净化。1.2纯化步骤将步骤1.1中的待净化液转移至HLB固相萃取柱中，依次用10mL水，10mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用10mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5.0mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过0.22微米的微孔滤膜后滤液待测。上述步骤中，磷酸盐缓冲溶液浓度为0.1mol/L，制备过程为：溶解12.2g磷酸二氢钠于950mL水中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，最后用水稀释至1L。甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为3:7。乙腈水溶液中乙腈与水体积比为2:8。2.样品液B制备为了对比，在上述制备样品液A的步骤1.1中不加入聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚，其它步骤完全与样品液A相同。3.标准液制备准确称取适量各标准物质(螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素)分别置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为500mg/L的储备液。用乙腈水溶液将储备液逐级稀释得到阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素浓度为5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L及螺旋霉素、替米考星浓度为150μg/L、300μg/L、750μg/L、1500μg/L、3000μg/L的系列混合标准工作液。4.液相色谱-质谱检测4.1液相色谱的工作条件a)色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm(i.d.)，5μm。b)流动相：A：乙腈，B：0.2％甲酸溶液，梯度洗脱，梯度条件见表1。c)柱温：30℃。d)进样量：10μL。表1梯度洗脱程序表4.2串联质谱工作条件a)电离方式：电喷雾电离，正离子模式；b)喷雾电压：3.0kV；c)雾化温度：300℃；d)毛细管温度：350℃；e)鞘气压力：50Arb(1Arb＝1psi)；f)辅助气压力：20Arb(1Arb＝0.3L/min)；g)碰撞气、鞘气和辅助气：氩气(99.999％)；h)扫描模式：多反应监测(MRM)模式，8种大环内酯类抗生素的质谱参数见表2。表2质谱参数*定量离子4.3测定步骤先对混合标准工作液按浓度由低到高进行检测，以定量离子峰面积对质量浓度作图，做出标准曲线回归方程。再对样品液进行检测，得到的离子峰面积与标准曲线对照得到各抗生素的浓度。样品液检测次数为5次，取平均值为结果。如果样品液中有组分的响应值超过标准曲线的线性范围，则稀释后再进样测定。测试结果如表3所示。表3样品液中8种大环内酯类抗生素含量检测结果上述结果显示，样品液A中检测出的各种抗生素含量均大于样品液B中的含量，特别对于在样品B中未检出的阿奇霉素和罗红霉素，却在样品液A检测出微小含量。从而表明，在样品液的提取过程中，加入一定量的破乳剂进行破乳处理，抗生素的提取率能够提高10％以上，大大提高了肉类食品中抗生素残留检测的准确度。上述实施例以经初步筛查含有抗生素的猪肉为样品进行检测，仅为了更好地理解本专利技术。本领域技术人员应该理解，本专利技术的检测方法可以适用于未经初步筛查的各类肉类食品，例如各种兽类、禽类、鱼类等食品的检测。检测项目也不限于大环内酯类抗生素，也可以是检测其它种类的抗生素。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测肉类食品中抗生素残留的方法，包括以下步骤：(1)利用粉碎机将待测的肉类食品制成匀浆液，称取3‑5g的匀浆液于离心管中，加入0.5‑1g的破乳剂，超声振荡15‑30分钟后，加入30‑50mL正己烷，分散均匀后，加入50‑100mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10‑20分钟，离心后，弃去上层正己烷，移取10mL下层清液，加10mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，待净化；(2)将步骤(1)中的待净化液转移至固相萃取柱中，依次用10mL水，10mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用10mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)用液相色谱‑串联质谱法测定和确证，外标法定量。

【技术特征摘要】
1.一种检测肉类食品中抗生素残留的方法，包括以下步骤：(1)利用粉碎机将待测的肉类食品制成匀浆液，称取3-5g的匀浆液于离心管中，加入0.5-1g的破乳剂，超声振荡15-30分钟后，加入30-50mL正己烷，分散均匀后，加入50-100mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10-20分钟，离心后，弃去上层正己烷，移取10mL下层清液，加10mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，待净化；(2)将步骤(1)中的待净化液转移至固相萃取柱中，依次用10mL水，10mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用10mL甲醇洗脱，收集洗脱液；在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；上述步骤中，磷酸盐缓冲溶液浓度为0.1mol...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵林萍，常伟，鲁龙，苗银萍，曾小宇，李慧英，王盼，
申请(专利权)人：郑州中道生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41