本发明专利技术涉及稳定同位素分析技术领域，是结合酯交换反应、色谱分离技术和稳定同位素分析要求而测定食用油的甘油中稳定氧同位素比值的方法。本发明专利技术首先通过酯交换反应将食用油中的甘油三酯转化成游离甘油，通过萃取技术除去脂肪酸甲酯和游离脂肪酸，然后用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪测定甘油稳定氧同位素组成的方法。该法安全、高效，操作简单，适合食用油中甘油稳定氧同位素比值的测定。
【技术实现步骤摘要】
： 本专利技术设及测定食用油的甘油中稳定氧同位素比值(记作δ?8〇)的方法。具体而言， 样品通过醋交换反应使食用油中的甘油游离出来，液液萃取除去脂肪酸甲醋，利用气相色 谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪(GC-P-IRMS)测定甘油的δ"〇,属于稳定同位素分析技术领 域。
技术介绍
： 食用油是人们日常生活中必不可少的食物，但食用油因种类、来源不同而存在较 大的营养价值和市场价格差异。我国是世界上最大的食用油生产国和消费国，食用油的消 费量逐年攀升，随着生活水平的提高，富含不饱和脂肪酸的植物油，尤其是高档植物油越来 越受到消费者青睐。然而由于我国食用油行业准入制度不完善，生产标准低，市场上食用油 质量良莽不齐，更有甚者，有些不法企业弄虚作假，W廉价食用油冒充高档植物油的现象屡 见不鲜，W动物油脂、滿水油冒充纯种植物油的情况更是当前油品监管的难题。 稳定同位素技术在食品种类、来源辨别及渗伪鉴别方面具有重要应用，国外从上 世纪开始研究不同来源油脂的稳定同位素特征。作为油脂中的主要成分，甘油的稳定碳氧 同位素特征因油脂属性(动物脂肪、植物油)和种类(橄揽油、菜巧油、亚麻油等)的不同而存 在差异，该特征已成功的被用作高档橄揽油的真实性鉴别依据。然而，食用油中甘油sis〇的 测定是稳定同位素分析领域的技术难题，运是因为其在食用油中是W甘油Ξ醋的形式存 在，测定时需提取甘油，排除其他含氧组分的干扰后方可进行稳定同位素分析:Weber等人 (13C-patern of Natural Glycerol:Origin and Practical Importance)报道了利用高 浓度氨氧化钢溶液水解油脂，酸化处理并用乙酸/石油酸混合液除去脂肪酸后用乙醇溶解 甘油，然后通过减压蒸馈提取甘油并用高效蒸馈器纯化甘油的方法；Camin等人 (Application of multielement stable isotope ratio analysis to the characterization of French,Italian,and Spanish cheeses和Correlation between multielement stable isotope ratio and geographical origin in Pereta cows'milk cheese)沿用Weber的方法处理了奶酪中的甘油，将甘油五氧化二憐干燥器中进行充分干燥 然后用高溫裂解元素分析仪-稳定同位素比值质谱仪(TC/EA-IRMS，含手动进样过程，对操 作人员的技能要求高)测定甘油的δ"0;Ρ?οηζ3等人(81化andSW〇-values of glycerol of food fats)选择甲醇溶解油脂样品，在甲醇钢存在的条件下进行醋交换，减压蒸馈除去大 部分甲醇后将剩余物溶于正己烧和水的混合液中，酸化水相并除去脂肪酸，通过乙醇提取 甘油并用减压蒸馈对之纯化，结合CHN-EA-IRMS测定了甘油δ? 8〇。由上述介绍可知，已有的运 些测定油脂中甘油Sis〇的方法，前处理过程复杂，分析时对样品纯度要求苛刻，对操作人员 的技能要求高。为克服上述方法的弊端，Jung等人（Reductive ester cleavage of a巧1 glycerides-GC-C/P-IRMS measurements of glycerol and faty alcohols)选择了结合 醋裂解和气相色谱-燃烧/裂解-稳定同位素比值质谱仪(GC-C/P-IRMS)测定甘油δ? 8〇的方 法:样品溶解在叔下基甲酸中，加入氨化侣裡化iAl化)后70°C保溫比，冷却后再加入LiA化4， 再70°C保溫化，冰浴冷却后用碳酸钟除去过量的LiAlH4,并加入乙醇/乙酸混合溶液，剧烈 振荡后取出水相并再加入乙醇，酸化该溶液并除去A1 (0H) 3，然后加入玻璃粉并用乙醇洗涂 沉淀物最后才取样测定。可W看出，运个方法的前处理过程极尽繁琐，并且氨化侣裡是危险 品(遇水易爆炸），使用和保存过程中存在一定的安全风险。 本专利技术开发了一种测定食用油中甘油δ?80的方法，结合醋交换的原理W及GC-P-IRMS的分析要求实现了甘油δ? 8〇的测定，该方法安全、高效，成本低，对操作人员的技能要求 低，可用于食用油中甘油δ?8ο的常规分析。
技术实现思路
： (1)拟解决的问题 本专利技术的目的在于针对食用油中甘油δ"〇?1定的技术难题，提供一种安全、低成本 的检测技术，为食用油的真实性鉴别提供有效分析手段。 (2)本专利技术的具体方案 本专利技术采用醋交换原理，使食用油中的甘油游离出来;酸化除去脂肪酸后将溶液 中和使抑呈中性，用乙醇溶解沉淀后直接利用GC-P-IRMSii定甘油δ"〇。 具体而言，本专利技术提供了测定食用油中甘油稳定氧同位素比值的方法，优选地，其 中所述的食用油为动物脂肪和植物油，其中植物油如葵花巧油、菜巧油、大豆油、花生油、橄 揽油、栋桐油、色拉油，也可W用于滿水油的分析。 具体实施步骤如下： a)取食用油样品溶于异辛烧中，充分震荡； b)向上述溶液中加入氨氧化钟甲醇溶液，充分震荡后静置，得到下层澄清溶液b; [001引C)酸化b溶液，加入异辛烧，除去溶液中残留的脂肪酸，得到混合溶液C; d)调整C中得到的溶液至抑为7左右，并加入无水甲醇溶液，得到甘油甲醇溶液d; [001引 e)用GC-P-IRMSii定甘油的δ"0值。 (3)有益效果： 本专利技术建立了一种该方法无需复杂前处理，操作简单，安全性高的测定食用油中 甘油δ?80的方法，有利于油脂中甘油氧同位素分布特征的研究及油脂分类鉴别技术的研究 与开发。【附图说明】： 附图1 GC-P-IRMSii定甘油別80的离子流图谱；附图扣则定甘油δ"0的准确性验证。【具体实施方式】：下面结合具体实例对本专利技术进一步说明。 实施例一：[002引1材料方法 [002引1.1仪器气相色谱仪(Trace GC)，裂解转化装置（ISOLink)，稳定同位素比值质谱仪(Del化 V Advan化ge)，上述仪器均购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司； 恒溫水浴锅(北京神泰伟业仪器设备有限公司）。电子分析天平(梅特勒-托利多国 际股份有限公司）。 1.2 试剂植物油;过饱和氨氧化钟甲醇溶液;浓盐酸。[002引 1.3色谱条件 CP-Wax毛细管色谱柱(25m*0.25mm*0.20μπι);载气为氮气;柱流速1.2mL/min;进样 口溫度270°C;升溫程序为:起始溫度120°C，保持Imin，W20°C/min升溫至220°C，保持7min; 进样体积化L分流比20:1。 1.4裂解装置工作条件 裂解装置中使用裂解管(陶瓷管，内附销管），工作溫度为1280°Cd1.5样品预处理 称取0.1?植物油并溶于8mL异辛烧中；加入4(Κ)化过饱和氨氧化钟甲醇溶液(使甘 油Ξ醋在氨氧化钟催化下与甲醇进行醋交换反应），充分振荡后静置并除去上层溶液(主要 是脂肪酸甲醋），向下层溶液中加入约TOiiL浓盐酸中和氨氧化钟并保持酸性，溶液分层再次 除去上层溶液(主要是游离脂肪酸），向下层溶液中加入SOiiL过饱和氨氧化钟甲醇溶液中和 浓盐酸，待盐沉本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定食用油的甘油中稳定氧同位素比值的方法，其包含如下步骤：(a)采用酯交换法释放食用油中的甘油；(b)液液萃取除去脂肪酸甲酯并用气相色谱‑裂解‑稳定同位素比值质谱仪(GC‑P‑IRMS)测定。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：钟其顶，王道兵，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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