人类野生型全长XPD基因真核表达载体制造技术

一种人类野生型全长ＸＰＤ基因真核表达载体，其特征在于人类野生型全长ＸＰＤ基因的重组载体：ｐＥＧＦＰ－Ｎ２／ＸＰＤ重组质粒，是通过以下方法构建获得的：（１）人类野生型全长ＸＰＤ基因的ｃＤＮＡ克隆；（２）ＸＰＤ基因的酶切；（３）ｐＥＧＦＰ－Ｎ２质粒的提取、酶切；（４）连接；（５）转化。本发明专利技术所提供的人类野生型全长ＸＰＤ基因经酶切和测序证实与ＧＥＮＥ　　ＢＡＮＫ上的公布的序列完全一致，该发明专利技术将为广大科研人员进一步深入研究ＸＰＤ基因的生物学特性和功能提供一个方便有效的基本材料。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种人类野生型全长ＸＰＤ基因真核表达载体，其特征在于人类野生型全长ＸＰＤ基因的重组载体：ｐＥＧＦＰ－Ｎ２／ＸＰＤ重组质粒，是通过以下方法构建获得的：（１）人类野生型全长ＸＰＤ基因的ｃＤＮＡ克隆：取人宫颈鳞癌上皮细胞，在１０％ＦＢＳ的 ＤＭＥＭ培养基中，３７℃，５％ＣＯ↓［２］的条件下培养两周后，用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取总ＲＮＡ，Ｓｕｐｅｒｓｔｃｒｉｐｔ试剂盒合成ｃＤＮＡ；（２）ＸＰＤ基因的酶切：纯化后的ＸＰＤ基因ＰＣＲ产物进行ＫｐｎⅠ和ＢｇｌⅡ的双酶切，酶 切产物经１％的琼脂糖凝胶电泳纯化并回收后用于和ｐＥＧＦＰ－Ｎ２质粒的连接反应；（３）ｐＥＧＦＰ－Ｎ２质粒的提取、酶切：提取ｐＥＧＦＰ－Ｎ２质粒后，进行ＫｐｎⅠ和ＢｇｌⅡ的双酶切，酶切产物经１％的琼脂糖凝胶电泳后，用回收试剂盒 进行大片段的回收，并存于－２０℃备用；（４）连接：ＸＰＤ片段和ｐＥＧＦＰ－Ｎ２载体片段以１－１０∶１摩尔比例，在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下，置４℃１６小时进行连接反应；（５）转化：１０ｕｌ连接产物转化２００ｕｌ感受态大肠杆菌Ｊ Ｍ－１０９，取１００ｕｌ转化产物涂布于含有终浓度为３０ｕｇ／ｍｌ卡那霉素的ＬＢ固体培养基，３７℃培养１８小时后，将单个菌落挑出，加入含３０ｕｇ／ｍｌ卡那霉素的ＬＢ液体培养基置３７℃１６小时后提取质粒，即为重组基因载体ｐＥＧＦＰ－Ｎ２／ＸＰＤ重组质粒。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张吉翔，汤雷，罗忠金，杜芳腾，朱水山，熊瑛，
申请(专利权)人：张吉翔，
类型：发明
国别省市：36[中国|江西]