本发明专利技术涉及ａｎｎｅｘｉｎ Ａ３与癌症的铂类化疗药物耐药性的相关性，涉及通过改变细胞中的ａｎｎｅｘｉｎ Ａ３表达而提高／降低癌症的铂类化疗药物耐药性的方法、还涉及用于检测和／或预后癌症对铂类化疗药物的耐药性的检测或诊断方法，以及可以用于这些方法中的药剂、包含该药剂的药物组合物和所述药剂用于制备药物的用途及所述药剂的筛选方法。此外，本发明专利技术还涉及用于治疗癌症患者的方法。在本发明专利技术中，所述癌症是能够用铂类化疗药物治疗的癌症，更优选所述癌症是卵巢癌。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一般地涉及化疗药物耐药性领域，更具体地本专利技术涉及annexin A3与癌症的铂类化疗药物耐药性的相关性，涉及通过改变细胞中的annexin A3表达而提高/降低癌症的铂类化疗药物耐药性的方法、以及可以用于该方法中改变细胞中的annexin A3表达的药剂、包含该药剂的药物组合物和所述药剂用于制备改变癌症耐药性的药物的用途及所述药剂的筛选方法。此外，本专利技术还涉及用于检测和/或预后癌症对铂类化疗药物的耐药性的检测或诊断方法、药剂、药物组合物及试剂盒。本专利技术还涉及用于治疗癌症患者的方法。在本专利技术中，所述癌症是能够用铂类化疗药物治疗的癌症，更优选所述癌症是卵巢癌。
技术介绍
卵巢癌是妇科肿瘤首位致死性疾病，晚期患者的5年生存率始终徘徊在15％-20％，肿瘤细胞对于化疗药物产生耐药性是造成这一状况的主要原因之一。铂类与DNA结合形成交叉键，从而破坏DNA的功能不能再复制，高浓度时也能抑制RNA及蛋白质的合成，是目前最常用的治疗卵巢癌的一线化疗药物，也是治疗其它实体肿瘤包括乳腺癌、肺癌、睾丸肿瘤、头颈癌、骨肉瘤、黑色素瘤、食管癌等的常用药物。在铂类治疗这些实体肿瘤时，均出现了耐药现象，即治疗初期对于肿瘤控制良好而治疗后期便出现复发或治疗初期就无反应。临床就卵巢癌对于铂类药物耐药已有明确的认识和定义，然而，有关顺铂耐药机制的阐明却远远不足。虽然目前从基因水平对于肿瘤耐药机制的认识已经相当深入，如MDR-1，LRP-1，MRP-1，GST-pi等已成为众所周知的耐药相关基因。但多数研究的结果表明，多种耐药相关基因在卵巢癌中的表达并不能良好地预测肿瘤的耐药和预后，mRNA的丰度与其相应的蛋白水平具有不一致性可能是主要原因之一。DNA是遗传信息的承载者，蛋白质才是功能的执行者。因此，需要在蛋白质水平进行高通量的技术来进一步探讨耐药机制，蛋白质组学技术为耐药基因的功能研究提供了可能性。蛋白质组学技术是近年发展起来的一种新兴技术，已经广泛应用于基础研究的各个领域，总体上看，蛋白质组学研究主要包含以下几个方面1.表达蛋白质组学；2.功能蛋白质组学；3.结构蛋白质组学。目前蛋白质组学技术在卵巢肿瘤的应用主要集中于恶性肿瘤的早期诊断和筛选肿瘤标志物方面，而至今尚无关于卵巢癌耐药标志物的研究。从临床组织入手直接研究铂类耐药机制，存在异质性、影响因素复杂、实验技术水平有限、阳性结果易丢失等诸多困难。因此，以细胞系为研究对象，逐步延伸到临床，提供了一种科学的研究思路。Annexin家族(I～XIII)是一群依赖Ca2+的磷脂结合蛋白，具有非EF手型Ca2+结合位点，在调节细胞生长和细胞信号转导途径中起到一定的作用。Annexin A3是annexin家族中唯一具有酶活性的成员，具有抑制磷脂酶A2和抗凝的功能，它还可以切断inositol1，2-cyclic phosphate形成inositol 1-phosphate，在控制细胞增殖方面发挥作用。虽然它广泛存在于动植物的各个组织器官，但在分化的最后阶段annexin A3却在中性粒细胞中优势表达。在未受到刺激中性粒细胞中，它分布在胞浆，并且含量高达胞浆总蛋白的1％。在一定Ca2+浓度下，annexin A3能够结合到囊泡的磷脂酰丝氨酸上，介导吞噬体与溶酶体的融合和颗粒消失等膜与膜之间的作用。另外，它能够促进从人中性粒细胞中分离的特异性颗粒的集聚。最近，有研究证明annexin A3是一种新的促血管生成因子，它可以通过激活HIF-1导致VEGF的增加，为抗肿瘤生长和血管生成提供了新的作用靶标。至今，annexin A3与肿瘤化疗耐药的相关性尚无研究报道。为了克服耐药相关基因在癌症中的表达并不能良好地预测肿瘤的耐药和预后，基础研究与临床治疗相分离的缺点，本申请的专利技术人在蛋白质水平首次鉴定了蛋白annexin A3与癌症(尤其是卵巢癌)的铂类化疗药物耐药性相关，并在临床进一步得到验证，由此使得可以通过检测annexin A3的表达量预测临床癌症患者的化疗耐药，及早发现耐药，改变治疗方案，提高5年生存率，并使得可以通过改变耐药的临床癌症患者肿瘤的annexin A3的表达量来改变铂类药物对此类患者的治疗效果。此外，本专利技术中提出的正、反义annexin A3的真核表达质粒和表达annexin A3融合蛋白的真核表达质粒构建，为研究annexin A3的功能提供了有利的工具。再者，本专利技术还提供了卵巢癌耐顺铂细胞系SKOV3/CDDP-P的诱导方法，模拟临床治疗卵巢癌的剂量和方式，为进一步研究临床耐药提供了良好的细胞模型。
技术实现思路
因此，本专利技术一方面涉及，调节癌症的铂类化疗药物耐药性的方法，包括改变癌症细胞中annexin A3的表达，其中优选地，所述癌症是卵巢癌，所述铂类化疗药物是顺铂或卡铂。本专利技术的此方法可以用于体外调节癌细胞的耐药性或者可以用于体内调节癌症患者的耐药性。在本专利技术此方法的一个实施方案中，通过提高癌细胞中的annexin A3表达而提高癌细胞对铂类化疗药物的耐受性，优选地，通过在癌细胞中表达annexin A3基因而提高细胞中的annexin A3表达，再优选地其中通过使用表达正义annexin A3基因的质粒来提高所述细胞中的annexin A3的含量。因此，本专利技术也涉及编码annexin A3蛋白的多核苷酸，包含该多核苷酸的DNA构建体及表达载体，并涉及它们在制备提高癌症的铂类化疗药物耐药性的药物中的用途。在本专利技术中，annexin A3蛋白不仅包括天然的annexin A3蛋白也包括人工合成(例如通过遗传工程的方法)的annexin A3蛋白，例如含有annexin A3的融合蛋白。在本专利技术此方法的另一实施方案中，通过减少和/或抑制癌细胞中的annexin A3表达而降低癌症对铂类化疗药物的耐受性，优选地，通过在癌细胞中表达annexin A3的反义核酸和/或特异于annexin A3的核酶而减少和/或抑制细胞中的annexin A3表达，再优选地其中通过使用表达反义annexin A3的DNA构建体或表达载体来降低细胞中的annexin A3的含量。因此，本专利技术也涉及减少和/或抑制癌细胞中的annexin A3表达的药剂，例如抑制annexin A3表达的反义核苷酸和特异切割annexinA3 mRNA的核酶；本专利技术还涉及这些药剂在制备降低癌症的铂类化疗药物耐药性的药物中的用途。一个实施方案中，根据本专利技术的反义核苷酸，其包含能够特异结合annexin A3多核苷酸序列或其互补序列的任何序列的全部或部分的核苷酸序列，优选地所述反义核苷酸含有与annexin A3多核苷酸的一或多个部分互补、更优选地基本上互补、甚至更优选地完全互补的序列区域，更优选地，所述反义核苷酸包含与全长annexin A3多核苷酸完全互补的DNA序列，优选地，所述反义核苷酸是DNA或者RNA或者其衍生物，最优选地，所述反义核苷酸包含在能够表达其的表达质粒，优选真核表达质粒中。一个实施方案中，根据本专利技术的能够特异切割annexin A3 mRNA的核酶具有与一或多个annexin A3 RNA区域互补的特异底物结合位点，并且它在该底物结合位点中或周围具有赋予该分子RNA切割活性的核本文档来自技高网...
【技术保护点】
调节癌症的铂类化疗药物耐药性的方法，包括改变癌症细胞中ａｎｎｅｘｉｎＡ３的表达，其中所述癌症优选是卵巢癌，更优选上皮样卵巢癌，所述铂类化疗药物优选是顺铂或卡铂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：潘凌亚，闫雪冬，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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