脂肪酶的仿生亲和纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种脂肪酶的仿生亲和纯化方法，属于工业生物技术领域的。本发明专利技术包括下列步骤：（１）制备仿生亲和分离材料：首先用带氨基的基础层析介质与三氯三氮嗪进行反应，然后在５０℃与烯丙胺反应，最后在９５℃与环己胺反应，合成仿生亲和分离材料；（２）用仿生亲和分离材料纯化脂肪酶粗品：用上述制备的仿生亲和分离材料装入层析柱，得到亲和层析柱，随后将含脂肪酶的样品上至该亲和层析柱中，脂肪酶被柱中仿生亲和分离材料专一地吸附留在层析柱中，其它不能被吸附的蛋白随缓冲液流出，最后用洗脱缓冲液将脂肪酶从柱中专一洗脱下来，得到纯脂肪酶。本发明专利技术能够高效率、低成本的大规模生产高纯度的脂肪酶。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种生物
的规模化制备方法，特别是一种。
技术介绍
脂肪酶是甘油酯水解酶(EC 3.1.1.3)，能够将甘油三酯水解成为脂肪酸和甘油，底物是水溶液难以溶解的长链脂肪酰酯。在水解和合成反应中，脂肪酶都表现出良好的立体和手性选择性质，可合成多种具有重要药物经济价值的特殊酯类化合物，在合成手性医药、农药和化学中间体产品中具有广泛用途。脂肪酶一般由微生物发酵生产，发酵液中脂肪酶与微生物分泌的其它蛋白和酶混合在一起，占总蛋白的10％以下。发酵液中常常还存在其它的酶，如蛋白酶，在最终脂肪酶产品中不去除会降解脂肪酶的肽链，并会缩短脂肪酶的使用寿命和循环周期。同时，与脂肪酶共存的还可能有其它底物专一性的酶，可能增加脂肪酶催化反应副产物的含量，降低目的手性产品的产率，加大产品后续分离纯化的技术难度和生产成本。此外，其它惰性杂蛋白的存在也会降低固定化材料的脂肪酶载量、增加固相材料的用量和成本，因此需要对脂肪酶进行纯化处理。经对现有技术的文献检索发现，Gupta等在《Appl.Microbiol.Biotechnol.》(《应用微生物生物技术》，2005年67卷648-653页本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂肪酶的仿生亲和纯化方法，其特征在于，包括下列步骤：（１）制备仿生亲和分离材料首先用带氨基的基础层析介质与三氯三氮嗪进行反应，得到基础层析介质氨基二氯三氮嗪，然后在５０℃温度下与烯丙胺反应得到１－基础层折介质氨基－２－胺丙烯一氯三氮嗪，最后在９５℃温度下与环己胺反应，得到１－基础层析介质氨基－２－胺丙烯基－３－胺环己基三氮嗪，称为仿生亲和分离材料；（２）用仿生亲和分离材料纯化脂肪酶粗品用上述制备的仿生亲和分离材料装层析柱，随后将含脂肪酶的样品上至该亲和层析柱中，脂肪酶被柱中仿生亲和分离材料专一地吸附留在层析柱中，其它不能被吸附的蛋白随缓冲液流出，最后用洗脱缓冲液将脂肪酶从柱中专一洗脱下来，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣秀，唐克轩，姚红艳，董德贤，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]