本发明专利技术提出了ｐＥＴ１５ｂ－ＰＥＰ－１－ＳＯＤ１质粒及构建、ＰＥＰ－１－ＳＯＤ１融合蛋白及表达。具体如下：合成两端分别加有Ｘｈｏ Ⅰ和ＢａｍＨ Ⅰ酶切位点的上下游引物，用ＰＣＲ方法以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＳＫ－ＳＯＤ１质粒为模板，以上下游引物进行ＰＣＲ扩增；将扩增的ＳＯＤ１ ｃＤＮＡ与ｄＡＴＰ反应加“Ａ”，纯化后与ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体连接；将ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ－ＳＯＤ１质粒和ｐＥＴ１５ｂ质粒分别用Ｘｈｏ Ⅰ和ＢａｍＨ Ⅰ双酶切，回收ＳＯＤ１片段和线性化的ｐＥＴ１５ｂ片段并纯化，两者在Ｔ４ ＤＮＡ连接酶作用下发生连接得ｐＥＴ１５ｂ－ＳＯＤ１质粒；把ｐＥＴ１５ｂ－ＳＯＤ１用ＮｄｅⅠ、Ｘｈｏ Ⅰ双酶切，回收线性化的ｐＥＴ１５ｂ－ＳＯＤ１片段，将编码ＰＥＰ－１的两条寡核苷酸链复性为双链，然后与ＮｄｅⅠ、ＸｈｏⅠ双酶切消化、纯化回收后的ｐＥＴ１５ｂ－ＳＯＤ１得ｐＥＴ１５ｂ－ＰＥＰ－１－ＳＯＤ１质粒。融合蛋白的表达如下：用ｐＥＴ１５ｂ－ＰＥＰ－１－ＳＯＤ１转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），然后在培养基中发酵；用冰浴超声破菌，收集上清液，纯化融合蛋白，脱盐、除菌后，用Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管分装，－８０℃保存。
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
ｐＥＴ１５ｂ－ＰＥＰ－１－ＳＯＤ１质粒，采用ｐＥＴ１５ｂ为表达载体，ＰＥＰ－１－ＳＯＤ１基因见序列表１中的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王家宁，
申请(专利权)人：王家宁，
类型：发明
国别省市：42[中国|湖北]
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