HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞，该细胞是HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR‑HC2修饰的T细胞，所述HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR‑HC2由Ibalizumab scFv、VRC01 scFv、CD8α的铰链区和跨膜区、4‑1BB的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成，scFv的VH和VL之间通过(G4S)×3 Linker连接，不同scFv之间通过(G4S)×5 Linker连接。本发明专利技术的双靶点嵌合抗原受体biCAR‑HC2可以同时靶向HIV‑1的靶细胞受体CD4分子和HIV‑1的囊膜蛋白Env。

T cells modified by double targeting chimeric antigen receptor in the latent Library of HIV virus and its preparation and Application

The invention discloses a HIV virus latent base T cells to chimeric antigen receptor double target, the cells are T cells to biCAR chimeric antigen receptor HC2 modified HIV virus latent library double target signal domain, hinge region of the HIV virus latent library double targeting chimeric antigen receptor biCAR HC2 by Ibalizumab scFv, VRC01 scFv, CD8 alpha and transmembrane region, 4 1BB intracellular signaling domain and intracellular CD3 zeta series, between scFv and VL by VH (G4S) * 3 through Linker connection between different scFv (G4S) * 5 Linker connection. The invention of the double target biCAR HC2 chimeric antigen receptor can also target HIV 1 receptor CD4 and HIV molecular 1 envelope protein Env.

【技术实现步骤摘要】
HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞及其制备方法和应用
本专利技术属于生物制品
，具体涉及一种HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
抗病毒药物的联合使用（combinationanti-retroviraltherapy,cART）组成的高效抗逆转录病毒疗法（highlyactiveanti-retroviraltherapy,HAART）可以有效控制HIV-1感染者或者艾滋病患者体内病毒复制，甚至达到不可检测的水平，从而限制AIDS疾病进程。然而，除了cART药物在长期使用中的毒性和高成本，其最大的局限性在于它不能靶向或清除患者体内静息CD4+T细胞中存在的潜伏HIV-1病毒。这些潜伏感染的细胞是非常稳定的，因此在体内持续，甚至在长期抑制治疗后，通过使用cART药物后反弹，这构成了HIV/AIDS治愈的主要障碍。在治疗后不久，病毒载量在大多数患者中恢复到治疗前水平。HIV-1病毒在宿主体内通过整合机制，在靶细胞中建立稳定的长期潜伏感染。如何彻底清除病人体内的HIV-1病毒，是治愈AIDS病人的关键问题。研究表明，CD4+中本文档来自技高网...

【技术保护点】
HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞，其特征在于：该细胞是HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR‑HC2修饰的T细胞，所述HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR‑HC2由Ibalizumab scFv、VRC01 scFv、CD8α的铰链区和跨膜区、4‑1BB的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成，scFv的VH和VL之间通过(G4S)×3 Linker连接，不同scFv之间通过(G4S)×5 Linker连接。

【技术特征摘要】
1.HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞，其特征在于：该细胞是HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR-HC2修饰的T细胞，所述HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR-HC2由IbalizumabscFv、VRC01scFv、CD8α的铰链区和跨膜区、4-1BB的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成，scFv的VH和VL之间通过(G4S)×3Linker连接，不同scFv之间通过(G4S)×5Linker连接。2.如权利要求1所述的HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞，其特征在于：所述HIV病毒潜伏库双靶向性嵌合抗原受体biCAR-HC2的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.1所示。3.一种如权利要求1所述的T细胞的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：将通过全基因技术合成的IbalizumabscFv、VRC01scFv、CD8α的铰链区和跨膜区、4-1BB的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域按照顺序串联后，连接到载体pCDH上，包装成携带嵌合抗原受体biCAR-HC2编码基因的慢病毒，利用该慢病毒感染T细胞，使T细胞表达该嵌合抗原受体biCAR-HC2。4.一种如权利要求3所述的T细胞的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）T细胞的制备：人T淋巴细胞系Jurkat于RPMI1640培养基培养，加入10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml硫酸链霉素；外周血单核细胞通过Ficoll淋巴细胞分离液分离，细胞在GT-T551培养基中培养，并加入rhIL-2至终浓度为100IU/mL，按照培养基体积加入5%自体血清；淋巴细胞的激活扩增：在淋巴细胞培养基中加入MACSGMPTransActCD3/CD28Kit(100:1)；37℃，5%CO2条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：况轶群，吴光耀，洪琛，
申请(专利权)人：河南大学淮河医院，
类型：发明
国别省市：河南,41