一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系、疫苗和应用制造技术

本发明专利技术公开一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系、疫苗和应用，该重组细胞系是采用慢病毒载体携带目的基因构建重组质粒后转染HEK‑293T细胞，产生的高滴度病毒颗粒再感染HEK‑293T细胞从而构建得到的，表达稳定，在多次传代后仍保持很好的蛋白表达水平。本发明专利技术的稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系，具有容易培养、增殖快速、可无限扩大、性质稳定和蛋白表达量高的特点，其表达蛋白与佐剂制备成疫苗后免疫猪能诱导动物机体产生高效价猪流行性腹泻病毒中和抗体，仔猪可抵抗猪流行性腹泻病毒强毒攻击。

A recombinant cell line, vaccine and application for the stable expression of porcine epidemic diarrhea virus S1 protein

The present invention discloses a recombinant cells expressing S1 protein of porcine epidemic diarrhea virus vaccine, stability and application of the recombinant cell line by lentiviral vector carrying the target gene to construct the recombinant plasmid transfected HEK 293T cells stably expressing high titer virus particles and infected HEK 293T cells to construct. After several passages, in still maintain good protein expression level. The invention of the stable cell lines expressing recombinant S1 protein of porcine epidemic diarrhea virus, is easy to culture and rapid proliferation, unlimited expansion, stable properties and characteristics of protein expression was high, the expression of protein and preparation of vaccine adjuvant immunized pigs can induce the animal neutralizing titer of porcine epidemic diarrhea virus antibody piglets, against porcine epidemic diarrhea virus attack.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系、疫苗和应用
本专利技术涉及生物医药基因工程与免疫学领域，尤其涉及猪流行性腹泻病毒的免疫研究，具体涉及一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系、疫苗和应用。
技术介绍
猪流行性腹泻（Porcineepidemicdiarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）引起的传染性肠道疾病，临床上以猪的急性肠炎、呕吐、水样腹泻、脱水以及哺乳仔猪的高死亡率为特征。1978年本病首次发生于比利时和英国，1984年，宣华等通过荧光抗体试验和血清中和试验证实该病在我国的存在，目前在我国广泛流行。PEDV能破坏感染猪空肠和回肠上皮细胞和肠绒毛，使所有日龄的猪发生肠炎，导致腹泻，引起仔猪死亡，并使肥育猪增重减少，从而引起严重的经济损失。因此，研制有效的PEDV疫苗势在必行。PEDV具有典型的冠状病毒结构，主要结构蛋白有S蛋白、M蛋白、N蛋白和E蛋白。其中，纤突蛋白（S）可以辨别靶细胞及促进病毒和细胞膜的融合，故被认为是发展有效抵抗冠状病毒的主要靶抗原。PEDV不能像其他冠状病毒一样切本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系，其特征在于该重组细胞系是由如下方法制备而得：步骤1：构建慢病毒重组载体，该慢病毒重组载体包括编码猪流行性腹泻病毒S1蛋白的基因序列，所述编码猪流行性腹泻病毒S1蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示；步骤2：将所述慢病毒重组载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚胎肾细胞HEK‑293T，进行病毒包装和生产，收集病毒液；步骤3：用上述病毒液感染人胚胎肾细胞HEK‑293T后培养，将培养的细胞进行稀释克隆，收集克隆细胞培养上清液与细胞，检测并比较猪流行性腹泻病毒S1蛋白的表达量，获得稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系，其特征在于该重组细胞系是由如下方法制备而得：步骤1：构建慢病毒重组载体，该慢病毒重组载体包括编码猪流行性腹泻病毒S1蛋白的基因序列，所述编码猪流行性腹泻病毒S1蛋白的基因序列如SEQIDNO：1所示；步骤2：将所述慢病毒重组载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚胎肾细胞HEK-293T，进行病毒包装和生产，收集病毒液；步骤3：用上述病毒液感染人胚胎肾细胞HEK-293T后培养，将培养的细胞进行稀释克隆，收集克隆细胞培养上清液与细胞，检测并比较猪流行性腹泻病毒S1蛋白的表达量，获得稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系。2.根据权利要求1所述稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的重组细胞系，其特征在于所述编码猪流行性腹泻病毒S1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李安迪，高永新，颜仁和，王升尧，刘军，李红卫，
申请(专利权)人：广州伯尼兹生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44