一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法技术

本发明专利技术公开了一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，包括以下步骤：将重楼粉碎为粗粉置于密闭容器中，接菌种发酵，滤干水份并进行灭菌处理，加入7‑9倍的80‑95％的乙醇，微波加热回流提取2次，过滤，合并提取液；将提取液脱色、脱脂，减压浓缩后连续离心沉淀2‑3次，合并上清液；将上清液通过大孔吸附树脂柱，依次用45‑55％、65‑80％的乙醇溶液洗脱，收集65‑80％的乙醇洗脱液，浓缩；将浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，所得提取物经过结晶、干燥，制得重楼皂苷Ⅰ。本发明专利技术的方法提取得率较高，提取的重楼皂苷Ⅰ纯度高，符合规模化生产的要求。

A method for purification of polyphyllin I extracted from Paris

The invention discloses a method for purification of Paris saponin extracted from Paris polyphylla, which comprises the following steps: pulverizing in a closed container, after fermentation, drain and sterilization, adding 7 9 times 80 95% ethanol, microwave heating reflux extraction 2 times, filtering the merger, extract; the extract decolorization, degreasing, vacuum concentration after continuous centrifugation 2 3 times, with the supernatant; the supernatant by macroporous resin column, followed by 45 ethanol and 55%, 65 80% collect 65 elution, 80% ethanol eluate concentration; the concentrated liquid is used isolated from the ethanol extracts and HPLC of extracts obtained by crystallization and drying, prepared polyphyllin I. The method of the invention has high yield of Paris saponin extraction, the purity of the extracted high, meet the requirements of large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法
本专利技术属于药用植物活性成份的提取
，具体涉及一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法。
技术介绍
重楼为百合科植物，又名七叶一枝花、金线重楼、灯台七、铁灯台、蚤休、草河车、白河车、枝花头、海螺七、螺丝七，多年生草本，高约50厘米。根状茎棕褐色，横走而肥厚，粗可达3厘米，表面粗糙具节，节上生纤维状须根。重楼味苦，性微寒；有小毒，归肝经。重楼中具有独特的活性成分，药用价值很高。重楼中含有较大量的甾体皂苷，苷元主要为薯蓣皂苷元和偏诺皂苷元，具有成分独特、药理活性强等特点，临床应用广泛，且该药资源丰富，具有非常好的开发前景。重楼可以诱导血小板聚集，并具有抗炎镇痛作用，因此该药在外伤治疗及外科手术抗感染止痛等方面应用广泛；重楼皂苷在免疫方面的调节作用及其对肿瘤细胞的抑制作用提示该组分可以开发成抗肿瘤新药；重楼与其他药物组方，可以用于多种不同疾病的治疗。目前，医疗、药企不断加强对重楼皂苷组分的研究，对重楼的基础研究进一步深入，特别是针对其中有活性的单体成分进行分离纯化及活性研究，以提高分离效率和单体纯度，从而开发出更有价值的新药。专利申请文献“重楼皂苷Ⅰ的制备方法(专利号：ZL201110079220.4)”，提供了重楼皂苷I的制备方法，为：取重楼,用乙醇水溶液浸泡、加热回流提取,过滤；过滤液减压浓缩,离心,得到上清液和沉淀,沉淀作为样品A；上清液通过大孔吸附树脂柱,用乙醇水溶液洗脱,收集70％-85％的乙醇水溶液的洗脱液,减压浓缩,作为样品B；将样品A与B混合,用柱层层析正相硅胶色谱柱进行纯化,得到重楼皂苷I，但该制备方法效率较低，提取物纯度较低，不利于工业化生产。
技术实现思路
本专利技术公开了一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，以解决现有提取方法得率低，纯度低，难以实现规模化生产的问题。为解决以上技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，包括以下步骤：S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种发酵36-48h，发酵完成后滤干水份并进行灭菌处理，加入7-9倍的80-95％的乙醇，再加入微波加热回流提取2次，过滤，合并提取液；S2：将步骤S1中的提取液脱色、脱脂，置于60-65℃的旋转蒸发器中，减压至0.01-0.02MPa,浓缩至重楼皂苷含量为10-15％；向浓缩液中加入75-85％的乙醇溶液，在3000r/min的离心仪中连续离心3次，合并上清液；S3：将步骤S2中的上清液通过大孔吸附树脂柱，条件为：解析剂为46-58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附树脂体积的1.8-3.2倍，再生溶剂为2-3.5％的KOH溶液，吸附区流速6-10BV/h，解吸区流速10-20BV/h，再生区流速6-10BV/h，切换时间为600-650s，温度为55-60℃，压力为0.1MPa，依次用45-55％、65-80％的乙醇溶液洗脱，收集65-80％的乙醇洗脱液，浓缩得到浓缩液；S4：将步骤S3中的浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，回收乙醇，所得提取物经过结晶、干燥，制得重楼皂苷Ⅰ。优选地，步骤S1中所述菌种为酵母菌、放线菌、枯草杆菌、芽孢杆菌中的一种或他们的组合物，其在发酵下温度控制为55-60℃。优选地，步骤S1中所述微波加热回流提取的温度控制在90-95℃，其可通过控制微波辐照量进行控制。优选地，步骤S1中所述微波加热回流提取时长为每次10-15min。优选地，步骤S2中所述脱色过程为活性炭脱色。优选地，步骤S2中所述脱脂过程使用丙酮进行脱脂。优选地，步骤S3中所述大孔吸附树脂为D101。优选地，步骤S3中所述乙醇洗脱的流速为2-3BV/h、洗脱时长为15-30min。优选地，步骤S4中所述结晶在12-16℃下进行。优选地，步骤S4中所述干燥的温度为60-70℃，时长为2-3h。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术所提供的从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，重楼皂苷Ⅰ的提取速度快，生产效率高，提取的重楼皂苷Ⅰ其，得率达到2-2.5％，纯度可达到96.2-98.5％，纯度较高，符合规模化生产的要求。【具体实施方式】下面结合具体实施例进行具体说明。实施例1一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，包括以下步骤：S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种在55℃下发酵36h，所述菌种为酵母菌，发酵完成后使用无菌蒸馏水洗涤3次，滤干水份并进行灭菌处理，加入7倍的80％的乙醇，微波加热回流提取2次，每次提取10min，同时通过控制微波辐照量来控制回流加热的温度为90℃，提取完毕后过滤，合并提取液；S2：将步骤S1中的提取液使用活性炭进行脱色，再使用丙酮进行脱脂，置于60℃的旋转蒸发器中，减压至0.01MPa,浓缩至重楼皂苷含量为10％；向浓缩液中加入75％的乙醇溶液，在3000r/min的离心仪中连续离心3次，合并上清液；S3：将步骤S2中的上清液通过D101大孔吸附树脂柱，条件为：解析剂为46％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附树脂体积的1.8倍，再生溶剂为2％的KOH溶液，吸附区流速6BV/h，解吸区流速10BV/h，再生区流速6BV/h，切换时间为600s，温度为55℃，压力为0.1MPa，依次用45％、65％的乙醇溶液洗脱，收集65％的乙醇洗脱液，浓缩得到浓缩液；S4：将步骤S3中的浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，回收乙醇，所得提取物在12℃条件下进行结晶，在60℃条件下干燥2h，制得96.2％的重楼皂苷Ⅰ，得率为2.2％。实施例2一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，包括以下步骤：S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种在56℃下发酵42h，所述菌种为酵母菌、放线菌、芽孢杆菌的组合物，发酵完成后使用无菌蒸馏水洗涤3次，滤干水份并进行灭菌处理，加入8倍的90％的乙醇，微波加热回流提取2次，每次提取12min，同时通过控制微波辐照量来控制回流加热的温度为93℃，提取完毕后过滤，合并提取液；S2：将步骤S1中的提取液使用活性炭进行脱色，再使用丙酮进行脱脂，置于32℃的旋转蒸发器中，减压至0.015MPa,浓缩至重楼皂苷含量为12％；向浓缩液中加入80％的乙醇溶液，在3000r/min的离心仪中连续离心3次，合并上清液；S3：将步骤S2中的上清液通过D101大孔吸附树脂柱，条件为：解析剂为55％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附树脂体积的2倍，再生溶剂为2.5％的KOH溶液，吸附区流速8BV/h，解吸区流速15BV/h，再生区流速8BV/h，切换时间为620s，温度为58℃，压力为0.1MPa，依次用50％、70％的乙醇溶液洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，浓缩得到浓缩液；S4：将步骤S3中的浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，回收乙醇，所得提取物在13℃条件下进行结晶，在65℃条件下干燥2.5h，制得97％的重楼皂苷Ⅰ，得率为2.2％。实施例3一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，包括以下步骤：S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种在60℃下发酵48h，所述菌种为酵母菌、放线菌、枯草杆菌、芽孢杆菌的组合物，发酵完成后使用无菌蒸馏水洗涤3次，滤干水份并进行灭菌处理，加入9倍的95％的乙醇，微波加热回流提取2次，每次提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种发酵36‑48h，发酵完成后使用无菌蒸馏水洗涤3次，滤干水份并进行灭菌处理，加入7‑9倍的80‑95％的乙醇，微波加热回流提取2次，过滤，合并提取液；S2：将步骤S1中的提取液脱色、脱脂，置于60‑65℃的旋转蒸发器中，减压至0.01‑0.02MPa,浓缩至重楼皂苷含量为10‑15％；向浓缩液中加入75‑85％的乙醇溶液，在3000r/min的离心仪中连续离心3次，合并上清液；S3：将步骤S2中的上清液通过大孔吸附树脂柱，条件为：解析剂为46‑58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附树脂体积的1.8‑3.2倍，再生溶剂为2‑3.5％的KOH溶液，吸附区流速6‑10BV/h，解吸区流速10‑20BV/h，再生区流速6‑10BV/h，切换时间为600‑650s，温度为55‑60℃，压力为0.1MPa；依次用45‑55％、65‑80％的乙醇溶液洗脱，收集65‑80％的乙醇洗脱液，浓缩得到浓缩液；S4：将步骤S3中的浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，所得提取物经过结晶、干燥，制得重楼皂苷Ⅰ。...

【技术特征摘要】
1.一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种发酵36-48h，发酵完成后使用无菌蒸馏水洗涤3次，滤干水份并进行灭菌处理，加入7-9倍的80-95％的乙醇，微波加热回流提取2次，过滤，合并提取液；S2：将步骤S1中的提取液脱色、脱脂，置于60-65℃的旋转蒸发器中，减压至0.01-0.02MPa,浓缩至重楼皂苷含量为10-15％；向浓缩液中加入75-85％的乙醇溶液，在3000r/min的离心仪中连续离心3次，合并上清液；S3：将步骤S2中的上清液通过大孔吸附树脂柱，条件为：解析剂为46-58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附树脂体积的1.8-3.2倍，再生溶剂为2-3.5％的KOH溶液，吸附区流速6-10BV/h，解吸区流速10-20BV/h，再生区流速6-10BV/h，切换时间为600-650s，温度为55-60℃，压力为0.1MPa；依次用45-55％、65-80％的乙醇溶液洗脱，收集65-80％的乙醇洗脱液，浓缩得到浓缩液；S4：将步骤S3中的浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，所得提取物经过结晶、干燥，制得重楼皂苷Ⅰ。2.根据权利要求1所述的从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：马云川，
申请(专利权)人：隆安县荣胜养殖有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45