本发明专利技术公开了法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌绿脓菌素产生和生物膜形成药物中的应用。本发明专利技术发现法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1的生长不会产生明显的抑制作用，但却能够显著抑制铜绿假单胞菌PAO1的绿脓菌素的产生，同时抑制其生物膜的形成。因此法尼醇可用于制备抑制铜绿假单胞菌产绿脓菌素的药物和抑制铜绿假单胞菌生物膜形成的药物。
Farnesol in preparing anti Pseudomonas aeruginosa pyocyanin production and biofilm formation in the application of drugs
The present invention discloses farnesol in preparing anti Pseudomonas aeruginosa pyocyanin production and biofilm formation in the application of drugs. The invention not found growth of farnesol on Pseudomonas aeruginosa PAO1 was inhibited, resulting in Pseudomonas aeruginosa but can inhibit Pseudomonas aeruginosa PAO1, while inhibiting the biofilm formation. Therefore, farnesol can be used for preparing drugs for inhibiting Pseudomonas aeruginosa pyocyanin and inhibit the formation of Pseudomonas aeruginosa biofilm drug.
【技术实现步骤摘要】
法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌绿脓菌素产生和生物膜形成药物中的应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌绿脓菌素产生和生物膜形成药物中的应用。
技术介绍
：铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)又称绿脓杆菌，在自然界分布广泛，是土壤中常见的细菌之一。铜绿假单胞菌是人类的条件致病菌，是一系列严重的化脓性感染，尤其是支气管扩张、慢性支气管炎、囊性肺纤维化等基础疾病继发感染的重要致病菌。随着抗生素的广泛应用，微生物的耐药谱越来越广、耐药强度越来越高，耐药性形成的速度也越来越快。抗生素的持续使用为高耐药菌株提供了持续的选择压力，进而加快了超级耐药和多重耐药菌株的形成。铜绿假单胞菌能对多种抗生素快速产生耐药性。人类需要改变致病菌的治理策略，寻找不同于抗生素的新的作用靶标。法尼醇是一种15-碳倍半萜烯醇，其广泛存在于天然植物中，如秋葵种子、香茅、柠檬草、桃子、草莓、番茄和玉米等。白假丝酵母也会产生法尼醇，它是白假丝酵母的一种信号分子。
技术实现思路
：本专利技术的第一个目的是提供一种法尼醇在控制铜绿假单胞菌产绿脓菌素药物中的应用。本专利技术通过实验表明，法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1的生长不会产生明显的抑制作用，但却能够显著抑制铜绿假单胞菌PAO1的绿脓菌素的产生，同时能够抑制其生物膜的形成。因此，本专利技术提供法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌产绿脓菌素的药物中的应用。本专利技术的第二个目的是提供法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌生物膜形成的药物中的应用。本专利技术发现法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1的生长不会产生明显的抑制作用，但却能够显著抑制铜绿假单胞菌PAO1的绿脓菌素的产生，同时能够抑制其生物膜的形成，因此可用于制备抑制铜绿假单胞菌产绿脓菌素的药物和控制铜绿假单胞菌生物膜形成的药物。附图说明：图1是法尼醇作用下铜绿假单胞菌PAO1的生长曲线；图2是法尼醇抑制铜绿假单胞菌PAO1的绿脓菌素产生的动力学曲线；图3是法尼醇抑制铜绿假单胞菌PAO1的生物膜形成的柱状图。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1：PAO1菌[铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)]悬液的制备：将指数生长期的铜绿假单胞菌PAO1培养液取样，离心，用PBS缓冲液洗涤一次，重悬于PBS中，并将菌浓度稀释至108CFU/mL。1.法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1生长的影响实验分别向5支试管中加入LB培养基、法尼醇，并接入指数生长期的PAO1菌悬液，总体积均为10mL，使铜绿假单胞菌PAO1的菌浓度均为106CFU/mL，法尼醇的浓度分别为0μl/mL(对照)、0.16μl/mL、0.31μl/mL、0.63μl/mL和1.25μl/mL。将几个实验组分别取样加入到自动生长曲线测定仪(BioscreenC)专用的蜂窝培养板中，每孔加入350μL的培养液，每个实验组三个平行。将蜂窝培养板置于自动生长曲线测定仪中，37℃振荡培养3天，每小时测定一次OD600。以OD600为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制法尼醇作用下PAO1的生长曲线，以此研究法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1生长的影响。结果如图1所示。2.法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1绿脓菌素产生的影响实验取3个三角烧瓶，每瓶接入LB培养基、法尼醇，并接入指数生长期的PAO1菌悬液，总体积均为100mL，铜绿假单胞菌PAO1的菌浓度均为106CFU/mL，法尼醇的浓度分别为0μl/mL(对照)、0.16μl/mL、和0.63μl/mL。置于摇床中37℃恒温振荡培养7天，每天取样提取绿脓菌素，每组两个平行样。提取方法如下：取培养液5mL，离心，将上清转入新管；加入3mL氯仿，剧烈振荡，抽提30min；离心，将氯仿层转入新管中；加入1mL的0.2N盐酸，剧烈振荡抽提30min；离心，将上层水相转入新管中；于紫外分光光度计上520nm波长处测定吸光值。以吸光值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制法尼醇作用下铜绿假单胞菌PAO1绿脓菌素产量的动力学变化，以此研究法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1绿脓菌素产生的影响。实验重复两次。实验结果如图3所示。3.法尼醇对铜绿假单胞菌PAO1生物膜产生的影响实验取4个三角烧瓶，每瓶接入LB培养基、法尼醇，并接入指数生长期的PAO1菌悬液，总体积均为10mL，铜绿假单胞菌PAO1的菌浓度为106CFU/mL，法尼醇的浓度分别为0μl/mL(对照)、0.16μl/mL、0.63μl/mL和1.25μl/mL。从每个实验组中各取200μl加入到1号96-孔板中，每个实验组各取5个平行样。将加样后的1号96-孔板置于37℃静置培养24h，然后将1号96-孔板中的培养液对应转移到一块新的2号96-孔板中。1号96-孔板用去离子水洗涤三次除去悬浮细胞，然后置于烘箱中40℃干燥2min，再加入300μl的0.1％结晶紫对生物膜染色10min，去结晶紫染液，并用去离子水洗涤去除残留的结晶紫。将1号96-孔板置于烘箱中40℃干燥2min，然后每孔加入300μl的95％乙醇萃取生物膜中的结晶紫10min，然后将乙醇萃取液对应转移到一块新的3号96-孔板中。将2号96-孔板置于微孔板分光光度计(ThermoScientificMultiskanGO)上测量OD600以获得浮游细胞的相对浓度值，将3号96-孔板置于该为孔板分光光度计中测量OD590以获得生物膜的相对产量值。绘制浮游细胞和生物膜的相对产量的柱状图。实验结果：从图1可以看出，不同浓度的法尼醇处理组与对照组中铜绿假单胞菌PAO1的生长曲线没有显著的差异，均呈现了典型的生长曲线，包括延滞期、指数生长期、稳定期和衰亡期，因该生长曲线是以菌液的OD600值为纵坐标，反映的是活细菌和死细菌的总吸光值，因此衰亡期不明显。从图2可以看出，法尼醇抑制了铜绿假单胞菌PAO1的绿脓菌素的产生，对照组中绿脓菌素的产量先是随着培养时间的延长逐渐升高，在培养3天时达到了最大值，之后随着培养时间的延长，绿脓菌素产量又呈下降趋势。但0.16μl/mL和0.63μl/mL的法尼醇处理组中，绿脓菌素的产量一直明显低于对照组。实验结果表明，低浓度的法尼醇抑制了铜绿假单胞菌的绿脓菌素的产生。从图3可以看出，法尼醇能够抑制铜绿假单胞菌PAO1的生物膜的形成，对照组和处理组中的浮游细胞的生长量没有显著的差异，但0.16、0.63和1.25μl/mL的法尼醇处理组中生物膜的产量明显低于对照组。实验结果表明，低浓度的法尼醇能够抑制铜绿假单胞菌的生物膜的产量。综上的实验结果表明，低浓度的法尼醇不会抑制铜绿假单胞菌PAO1的生长(图1)，但能够抑制铜绿假单胞菌PAO1的绿脓菌素的产生(图2)，同时能够抑制其生物膜的形成(图3)。本文档来自技高网...
【技术保护点】
法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌产绿脓菌素的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.法尼醇在制备抑制铜绿假单胞菌产绿脓菌素的药物中的应用。...
【专利技术属性】
技术研发人员：李文茹，马永凯，施庆珊，谢小保，黄小茉，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：广东,44
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